閭少冬李志剛

PTEN、AKT2、NF-кB 在肺癌組織表達(dá)及價(jià)值評價(jià)

閭少冬1李志剛2

目的 研究PTEN、AKT2以及NF-кB在肺癌組織中的表達(dá)含量以及其實(shí)際價(jià)值。方法 隨機(jī)選取我院收治的90例肺癌患者，選取其患者肺癌組織作為肺癌組以及肺癌遠(yuǎn)端（距離肺癌組織距離大于5 cm）的正常肺組織作為正常對照組，使用蛋白免疫印跡以及RTPCR技術(shù)檢測PTEN、AKT2以及NF-кB蛋白以及mRNA表達(dá)含量，分析PTEN、AKT2以及NF-кB表達(dá)的相關(guān)性以及臨床價(jià)值。結(jié)果 肺癌組織中AKT2以及NF-кB蛋白陽性表達(dá)率顯著高于正常對照組組織；肺癌組織中PTEN蛋白陽性表達(dá)率顯著低于正常對照組組織。在肺癌組織中PTEN、AKT2以及NF-кB三個(gè)基因的mRNA表達(dá)含量。肺癌組織中AKT2以及NF-кB的mRNA表達(dá)含量顯著高于正常對照組組織；肺癌組織中PTEN的mRNA表達(dá)含量顯著低于正常對照組組織。在肺癌組織中PTEN、AKT2以及NF-кB三個(gè)基因的mRNA表達(dá)含量。肺癌組織中AKT2以及NF-кB的mRNA表達(dá)含量顯著高于正常對照組組織；肺癌組織中PTEN的mRNA表達(dá)含量顯著低于正常對照組組織。PTEN陽性表達(dá)與AKT2陽性表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)；PTEN陽性表達(dá)與NF-кB陽性表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)；AKT2陽性表達(dá)與NF-кB陽性表達(dá)之間呈正相關(guān)。結(jié)論 肺癌患者組織中PTEN表達(dá)含量比較低，AKT2以及NF-кB表達(dá)含量比較高，PTEN、AKT2以及NF-кB三者與肺癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，可以作為臨床診斷和治療肺癌的重要參考指標(biāo)。

PTEN；AKT2；NF-кB；mRNA；蛋白

由于我國具有龐大的吸煙人群以及比較嚴(yán)重的空氣污染，因而我國的肺癌患者數(shù)量巨大而且呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢。有效掌握肺癌患者的病情以及發(fā)病機(jī)理對于治療肺癌病癥非常必要。現(xiàn)有的研究結(jié)果顯示，肺癌的發(fā)生與發(fā)展和基因功能的異常具有內(nèi)在聯(lián)系。PTEN作為腫瘤抑制基因，其表達(dá)含量與多種癌癥密切相關(guān)，當(dāng)PTEN基因表達(dá)失活時(shí)患者出現(xiàn)乳腺癌、肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤以及前列腺癌等惡性腫瘤的概率大大增加[1]。AKT2和NF-кB基因則與細(xì)胞增殖密切相關(guān)，其可以介導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)移與凋亡，在惡性腫瘤的發(fā)生以及發(fā)展過程中扮演重要作用[2]?，F(xiàn)有的研究較少涉及PTEN、AKT2以及NF-кB在肺癌組織中的表達(dá)以及意義，本研究探究了PTEN、AKT2以及NF-кB在肺癌組織中的表達(dá)含量以及實(shí)際意義，現(xiàn)將研究結(jié)果闡述如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選取我院2014年9月—2016年8月收治的90例肺癌患者，選取原發(fā)性肺癌標(biāo)本，手術(shù)切除的病理標(biāo)本作為肺癌組，所有患者的均含有臨床資料以及手術(shù)記錄，手術(shù)前的患者均不存在化療、免疫治療以及放療歷史。取少量肺癌遠(yuǎn)端（距離肺癌組織距離大于5 cm）的正常肺組織作為正常對照組。所有患者均簽署知情同意書，整個(gè)研究符合《主要倫理問題的審查指南》。90例肺癌患者中62例男性和28例女性，年齡43～75歲，平均年齡（56.12±7.89）歲。90例肺癌患者中42例鱗癌、48例腺癌；46例低分化肺癌以及44例中高分化肺癌；60例Ⅰ～Ⅱ期肺癌，21例Ⅲ～Ⅳ期肺癌；52例淋巴轉(zhuǎn)移；38例無淋巴轉(zhuǎn)移。

1.2 方法

隨機(jī)選取我院收治的90例肺癌患者，選取肺癌組織作為肺癌組以及肺癌遠(yuǎn)端（距離肺癌組織距離大于5 cm）的正常肺組織作為正常對照組，使用蛋白免疫印跡以及RT-PCR技術(shù)檢測PTEN、AKT2以及NF-кB蛋白以及mRNA表達(dá)含量，分析PTEN、AKT2以及NF-кB表達(dá)的相關(guān)性以及臨床價(jià)值。PTEN使用單克隆抗體，AKT2使用兔單克隆抗體，NF-кB使用鼠單克隆抗體。兔單克隆抗體全部購自CST公司，鼠單克隆抗體購自Abcam公司。RT-PCR試劑盒購自TAKARA公司。Western按照常規(guī)操作進(jìn)行，使用ECL發(fā)光法顯色。RT-PCR方法檢測PTEN、AKT2以及NF-кB的mRNA檢測，所有樣品置于-80℃中保存，樣品提取過程按照試劑盒說明進(jìn)行，提取mRNA后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，使用Primer 6.0設(shè)計(jì)PCR primer，在72～95℃環(huán)境進(jìn)行RT-PCR，使用瓊脂凝膠電泳進(jìn)行分析，最后進(jìn)行凝膠成像掃描，β-actin最為內(nèi)參。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 在肺癌組織中PTEN、AKT2以及NF-кB三個(gè)基因的蛋白表達(dá)情況

肺癌組織中，AKT2以及NF-кB蛋白陽性表達(dá)率高于正常對照組組織（P＜0.01）；肺癌組織中PTEN蛋白陽性表達(dá)率低于正常對照組組織（P＜0.01）。見表1。

2.2 在肺癌組織中PTEN、AKT2以及NF-кB三個(gè)基因的mRNA表達(dá)含量

肺癌組織中，AKT2以及NF-кB的mRNA表達(dá)含量高于正常對照組組織（P＜0.05）；肺癌組織中PTEN的mRNA表達(dá)含量低于正常對照組組織（P＜0.01）。見表2。

2.3 在肺癌組織中PTEN、AKT2以及NF-кB三個(gè)基因表達(dá)的相關(guān)性

PTEN陽性表達(dá)與AKT2陽性表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)（r=-0.612，P=0.034）；PTEN陽性表達(dá)與NF-кB陽性表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)（r=-0.865，P=0.012）；AKT2陽性表達(dá)與NF-кB陽性表達(dá)之間呈正相關(guān)（r=0.655，P=0.027）。

3 討論

研究PTEN、AKT2以及NF-кB在肺癌組織中的表達(dá)含量以及其實(shí)際價(jià)值。PTEN基因又稱為MMC1基因，自1997年被發(fā)現(xiàn)以來受到密切關(guān)注，其作為新的抑癌基因是缺失染色體10的張力蛋白同源物基因，在多種進(jìn)展期癌中容易發(fā)生突變，可以有效調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞富含磷酸酶基因[3-4]。PTEN既具有蛋白的活性也具有磷酸酶活性，存在磷酸酶雙重特異活性，可以有效水解D 3磷酸，存在D 3磷酸3，4，5三磷酸活性當(dāng)PTEN基因突變或者丟失，PTEN的mRNA表達(dá)含量降低或者不表達(dá)都可以引發(fā)機(jī)體抗腫瘤功能的喪失[5]。PTEN基因抗腫瘤機(jī)制主要表現(xiàn)為：通過FAK去磷酸化有效阻止腫瘤細(xì)胞浸潤和轉(zhuǎn)移；通過PIP3的去磷酸化有效促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞生長；有效降低MAPK細(xì)胞信號通路表達(dá)[6]。AKT2作為腫瘤生存的重要通路，在癌癥組織中可以檢測到AKT2高表達(dá)。NF-кB作為一種核轉(zhuǎn)錄因子，其通過與Iк B有效結(jié)合，在細(xì)胞漿中發(fā)揮作用[7-8]。腫瘤壞死因子等信號分子可以有效激活I(lǐng) кB激酶，隨后I кB激酶有效激活I(lǐng) кB，NF－кB隨之轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，通過與DNA結(jié)合啟動基因的轉(zhuǎn)錄，活化的NF－кB可以有效介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄抑制癌細(xì)胞的凋亡，癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和浸潤隨之增加[9-12]。檢測PTEN、AKT2以及NF-кB的表達(dá)可以反映組織細(xì)胞的健康程度，檢測三者的含量可以指導(dǎo)臨床的診斷與治療。

我們的研究發(fā)現(xiàn)，在肺癌組織中PTEN、AKT2以及NF-кB三個(gè)基因的mRNA表達(dá)含量。肺癌組織中AKT2以及NF-кB的mRNA表達(dá)含量顯著高于正常對照組組織；肺癌組織中PTEN的mRNA表達(dá)含量低于正常對照組組織。PTEN陽性表達(dá)與AKT2陽性表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)；PTEN陽性表達(dá)與NF-кB陽性表達(dá)之間呈負(fù)相關(guān)；AKT2陽性表達(dá)與NF-кB陽性表達(dá)之間呈正相關(guān)。Ⅰ～Ⅱ期、中高分化以及無淋巴轉(zhuǎn)移的肺癌組織PTEN的含量低于Ⅲ～Ⅳ期、低分化組以及有淋巴轉(zhuǎn)移的肺癌組織；無淋巴轉(zhuǎn)移以及Ⅰ～Ⅱ期肺癌組織AKT2的含量低于有淋巴轉(zhuǎn)移和Ⅲ～Ⅳ期的肺癌組織；Ⅰ～Ⅱ期、中高分化以及無淋巴轉(zhuǎn)移的肺癌組織陽性表達(dá)率低于Ⅲ～Ⅳ期、低分化組以及淋巴轉(zhuǎn)移的肺癌組織。PTEN、AKT2以及NF-кB三個(gè)基因在肺癌組織的淋巴轉(zhuǎn)移以及臨床分期中表達(dá)差異顯著，PTEN以及NF-кB的表達(dá)含量與肺癌的分化程度密切相關(guān)，AKT2的表達(dá)含量則與肺癌的分化程度關(guān)系不密切。PTEN在肺癌組織中低表達(dá)預(yù)示肺癌患者臨床分期的增加，患者更易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；AKT2以及NF-кB的高表達(dá)則預(yù)示臨床分期的增加。肺腺癌AKT2表達(dá)概率高于肺鱗癌，因而可以解釋為什么腺癌更容易發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移。PTEN、AKT2以及NF-кB三個(gè)基因的表達(dá)則與患者的性別、年齡以及組織學(xué)類型沒有明顯關(guān)系。

表1 PTEN、AKT2、NF-кB在肺癌組織表達(dá)[（蛋白陽性表達(dá)數(shù)／研究個(gè)體數(shù)）%]

表2 PTEN、AKT2、NF-кB在肺癌組織中的mRNA表達(dá)含量（）

表2 PTEN、AKT2、NF-кB在肺癌組織中的mRNA表達(dá)含量（）

組別nPTENAKT2NF-кB肺癌組9022．42±2．6959．78±1．5779．32±1．34正常對照組9060．17±3．129．89±1．4344．16±2．51t-5．788．344．97P-0．009 50．005 70．010 2

因而，肺癌患者組織中PTEN表達(dá)含量比較低，AKT2以及NF-кB表達(dá)含量比較高，PTEN、AKT2以及NF-кB三者與肺癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，可以作為臨床診斷和治療肺癌的重要參考指標(biāo)。

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The PTEN, AKT2, NF-кB Expression and Value in the Evaluation of Lung Cancer

LV Shaodong1LI Zhigang21 Thoracic Surgery Department, Chinese PLA 113 Hospital, Ningbo Zhejiang 315100, China; 2 Esophageal Surgery Department, Shanghai Chest Hospital, Shanghai 200030, China

Objective To study the expression of PTEN, AKT2 and NF-кB in lung cancer tissues and their practical value. Methods 90 cases of lung cancer patients were randomly selected from lung cancer tissue as lung cancer group and lung cancer group (distant lung cancer tissue distance greater than 5cm) normal lung tissue as a normal control group, using protein immunoblotting and RT-PCR detection PTEN, AKT2 and NF-кB protein and mRNA expression, and to analyze the correlation and clinical value of PTEN, AKT2 and NF-кB expression. Results The positive expression rate of AKT2 and NF-кB protein in lung cancer tissues was significantly higher than that in normal control group. The positive expression rate of PTEN protein in lung cancer tissues was significantly lower than that in normal control group. MRNA expression of PTEN, AKT2 and NF-кB genes in lung cancer tissues. The expression of AKT2 and NF-кB in lung cancer tissues was significantly higher than that in normal control group. The expression of PTEN mRNA in lung cancer tissues was significantly lower than that in normal control tissues. MRNA expressionof PTEN, AKT2 and NF-кB genes in lung cancer tissues. The expression of AKT2 and NF-кB in lung cancer tissues was significantly higher than that in normal control group. The expression of PTEN mRNA in lung cancer tissues was significantly lower than that in normal control tissues. There was a negative correlation between PTEN positive expression and positive expression of AKT2. There was a negative correlation between PTEN positive expression and positive expression of NF-кB. Positive expression of AKT2 was positively correlated with NF-кB expression. Conclusion The expression of PTEN and the expression of NF-кB in lung cancer tissues are relatively high. The expression of PTEN, AKT2 and NF-кB is closely related to the occurrence and development of lung cancer and can be used as an important reference for clinical diagnosis and treatment of lung cancer index.

PTEN; AKT2; NF-кB; mRNA; protein

R361

A

1674-9316（2017）08-0125-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．08．076

1 中國人民解放軍第113醫(yī)院胸外科，浙江 寧波 315100；2 上海市胸科醫(yī)院食管外科，上海 200030