楊琳琳 王 薇 張紅平 楊宏英

(昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院(云南省腫瘤醫(yī)院)婦瘤科，云南 昆明 650118)

宮頸癌患者治療前檢測(cè)外周血細(xì)胞角蛋白19 mRNA和鱗狀細(xì)胞癌抗原的臨床意義

楊琳琳 王 薇 張紅平 楊宏英

(昆明醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院(云南省腫瘤醫(yī)院)婦瘤科，云南 昆明 650118)

目的 通過(guò)檢測(cè)宮頸癌患者治療前外周血中細(xì)胞角蛋白(CK)19 mRNA和鱗狀細(xì)胞癌抗原(SCC-Ag)的表達(dá)，探討其對(duì)宮頸癌的診斷意義及與臨床病理的相關(guān)性。方法 對(duì)100例宮頸癌患者行治療前外周血CK19 mRNA及SCC-Ag檢測(cè)，以40例健康婦女為對(duì)照，分析其作為診斷參考的特異性和敏感性，并對(duì)兩者與宮頸癌臨床病理特征的相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果 CK19 mRNA、SCC-Ag檢測(cè)診斷宮頸癌的特異性均為97.5%。CK19 mRNA、SCC-Ag水平升高用于治療前診斷的敏感性分別為39%和57%，兩者差異顯著(P<0.05)。CK19 mRNA表達(dá)升高與深肌層浸潤(rùn)(P=0.031)、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.027)相關(guān)。SCC-Ag水平升高與病理類型(P=0.005)、腫瘤大小(P=0.002)、深肌層浸潤(rùn)(P=0.001)、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.012)顯著相關(guān)。結(jié)論 外周血CK19 mRNA和SCC-Ag均是宮頸癌微轉(zhuǎn)移有價(jià)值的腫瘤標(biāo)志物；就宮頸鱗癌患者而言，SCC-Ag仍然是目前首選的腫瘤標(biāo)志物。

宮頸腫瘤；細(xì)胞角蛋白(CK)19 mRNA；鱗狀細(xì)胞癌抗原；外周血

宮頸癌是僅次于乳腺癌的第二種常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，其預(yù)后與腫瘤大小、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理因素及治療方法密切相關(guān)。要提高宮頸癌患者療效、改善預(yù)后，判斷治療前有無(wú)腫瘤轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移的范圍顯得尤為重要。本研究探討治療前檢測(cè)血清細(xì)胞角蛋白(CK)19 mRNA和鱗狀細(xì)胞癌抗原(SCC-Ag)作為宮頸癌組織標(biāo)志物的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 入組條件：①均在云南省腫瘤醫(yī)院初次診治，有完整的隨訪資料；②經(jīng)臨床診斷和病理確診為宮頸癌患者；③一般情況良好，無(wú)合并其他部位腫瘤；④術(shù)前均未經(jīng)過(guò)放化療，無(wú)其他內(nèi)外科并發(fā)癥。2013年10月至2015年4月云南省腫瘤醫(yī)院初次診治的宮頸癌患者100例(病例組)，年齡31～72歲，中位年齡53歲。按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)2009年的診斷標(biāo)準(zhǔn)，ⅠA 期10例，ⅠB1期28例，ⅠB2期22例，ⅡA期18例，ⅡB 期12例，ⅢA 期5例，ⅢB期3例，Ⅳ期2例。按照組織學(xué)類型分為子宮鱗癌83例，腺癌及鱗腺癌17例。 78例行廣泛性子宮切除+雙側(cè)盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)；其余22例行根治性放射治療。在婦科門診行婦科腫瘤篩查的健康女性40例作為對(duì)照組。術(shù)前或治療前抽血行SCC-Ag水平檢測(cè)和CK19 mRNA表達(dá)檢測(cè)(后文中深肌層浸潤(rùn)與盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移這兩項(xiàng)病例數(shù)不足100例，陽(yáng)性例數(shù)也不足57例和39例)。

1.2 外周血CK19 mRNA與SCC-Ag檢測(cè) 病例組和對(duì)照組清晨抽取靜脈血各兩個(gè)3 ml，第一管用作SCC-Ag檢測(cè)，第二管加入含0.8 ml檸檬酸葡萄糖(ACD)的抗凝管〔經(jīng)0.1%焦碳酸二乙酯(DEPC)處理〕，充分混勻，放入冰盒送至實(shí)驗(yàn)室處理。CK19 mRNA檢測(cè)：用定量即時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(Q-PCR)檢測(cè)外周血中CK19 mRNA的表達(dá)水平。根據(jù)全血樣本提取RNA試劑盒操作說(shuō)明書(shū)抽提RNA。按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒操作說(shuō)明書(shū)合成cDNA，用ABI公司引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)CK19引物，在7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(ABI公司)上進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增。用2-△CT 計(jì)算mRNA表達(dá)水平，計(jì)算值大于健康對(duì)照組相對(duì)表達(dá)量95% 的可信區(qū)間視為CK19 mRNA陽(yáng)性。SCC-Ag檢測(cè)：以微粒子酶免疫分析法檢測(cè)宮頸癌患者血清SCC-Ag滴度(以≤1.5 μg/L為正常參考值，視為陰性；>1.5 μg/L為升高，視為陽(yáng)性)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 病例組與對(duì)照組CK19 mRNA、SCC-Ag陽(yáng)性表達(dá)的比較 病例組與對(duì)照組血CK19 mRNA表達(dá)水平分別為1.57±0.38和0.34±0.16。病例組CK19 mRNA陽(yáng)性表達(dá)、SCC-Ag水平升高與對(duì)照組差異顯著(均P=0.00)。見(jiàn)表1。病例組SCC-Ag水平、CK19 mRNA檢測(cè)敏感性差異顯著(P=0.000)。

表1 病例組與對(duì)照組SCC-Ag水平、 CK19 mRNA陽(yáng)性表達(dá)的比較〔n(%)〕

2.2 治療前CK19 mRNA和SCC-Ag表達(dá)水平與宮頸癌臨床病理因素的關(guān)系 治療前CK19 mRNA陽(yáng)性表達(dá)與深肌層浸潤(rùn)、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異顯著(P<0.05)，而與年齡、病理類型、腫瘤大小、臨床分期無(wú)顯著差異(P>0.05)。SCC-Ag水平升高與病理類型、腫瘤大小、深肌層浸潤(rùn)、盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)，而與年齡、臨床分期差異無(wú)顯著性(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 治療前SCC-Ag和CK19 mRNA表達(dá)水平與 宮頸癌臨床病理因素的關(guān)系(n=100)

3 討 論

宮頸癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是其治療不徹底的重要原因，其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移被公認(rèn)為是影響預(yù)后的重要因素之一，但即使是術(shù)后病理檢查無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸癌患者，仍有10%～15%出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。 而血循環(huán)中微轉(zhuǎn)移的存在,提示腫瘤已不再局限于原發(fā)灶,有發(fā)展為遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的可能。早期診斷外周血中的微轉(zhuǎn)移，理論上有助于更有針對(duì)性地制定個(gè)體化的術(shù)后輔助治療，減少?gòu)?fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，提高患者的生存率和生活質(zhì)量。CK是一類單纖絲蛋白，是表皮和某些上皮組織細(xì)胞支架復(fù)合物的組成部分。CK19存在于單層上皮及其起源的腫瘤細(xì)胞中，幾乎可在所有上皮類腫瘤及部分非上皮類腫瘤中檢出，而正常間葉組織(如外周血、淋巴結(jié))中無(wú)CK19的表達(dá)。如果在正常外周血、淋巴結(jié)中檢出CK19 mRNA的表達(dá)可認(rèn)為有微轉(zhuǎn)移的存在，這是其成為腫瘤標(biāo)志物的機(jī)制。CK19 mRNA檢測(cè)具有高敏感性和特異性，被廣泛應(yīng)用于乳腺癌、肝癌、食管癌、口腔癌、甲狀腺癌等與微轉(zhuǎn)移、預(yù)后有關(guān)的研究中〔1～5〕。

有文獻(xiàn)報(bào)道，血清CK19 mRNA升高見(jiàn)于14.89%～36%的早期宮頸癌患者(Ⅰ～ⅡA)〔6～8〕；這與各報(bào)道中病例數(shù)、年齡、期別、病理類型構(gòu)成、檢測(cè)方法等的差異有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，外周血中CK19 mRNA診斷敏感性為39%，高于相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，可能與本研究有較多ⅡB期及以后病例入組和檢測(cè)技術(shù)有關(guān)。本文結(jié)果提示SCC-Ag在作為宮頸癌指標(biāo)時(shí)，臨床診斷價(jià)值優(yōu)于CK19 mRNA。

與血CK19 mRNA升高相關(guān)的臨床病理因素比較肯定的有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而與期別、年齡、病理類型等因素不相關(guān)〔6～8〕。由于各研究對(duì)樣本選擇、實(shí)驗(yàn)方法的差異，血CK19 mRNA與腫瘤大小、肌層浸潤(rùn)等影響因素的報(bào)道并不一致。本研究顯示，血CK19 mRNA升高可作為宮頸癌有復(fù)發(fā)高危因素的一個(gè)指標(biāo)。李群等〔9〕研究認(rèn)為，SCC-Ag檢測(cè)值在以>1.95 μg/L為標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，其陽(yáng)性表達(dá)率與宮頸癌臨床分期、腫瘤大小密切相關(guān)，與病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)。但在晚期宮頸癌患者，馬瑞蘭等〔10〕經(jīng)單因素與多因素分析認(rèn)為，在治療1個(gè)月后，SCC-Ag檢測(cè)值在以>1.5 μg/L為陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，SCC-Ag水平與盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。由于研究對(duì)象的異質(zhì)性和血SCC-Ag檢測(cè)參考值的差異，各研究對(duì)宮頸癌SCC-Ag升高與臨床病理因素的關(guān)系也不盡相同。但總體來(lái)看，宮頸癌SCC-Ag升高與病理類型、腫瘤大小顯著相關(guān)，提示該指標(biāo)可反映患者腫瘤負(fù)荷。因SCC-Ag升高更特異性地見(jiàn)于宮頸鱗癌，而CK19 mRNA升高在宮頸鱗癌與非鱗癌間無(wú)顯著差別，提示對(duì)于SCC-Ag檢測(cè)正常的臨床晚期的宮頸非鱗癌患者，CK19 mRNA檢測(cè)能更好地為宮頸癌患者的療效、預(yù)后提供參考信息。

綜上，外周血CK19 mRNA和SCC-Ag是宮頸癌微轉(zhuǎn)移有價(jià)值的標(biāo)志物。腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)是宮頸癌患者致死的一個(gè)重要原因，對(duì)于檢測(cè)出有微轉(zhuǎn)移的患者，一些研究給予后繼化療進(jìn)行干預(yù)，理論基礎(chǔ)是化療可以消滅微轉(zhuǎn)移灶，減少?gòu)?fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的可能性，提高生存率，改善生活質(zhì)量。

1 Zhao S,Yang H,Zhang M，etal.Circulating tumor cells (CTCs) detected by triple-marker EpCAM,CK19,and hMAM RT-PCR and their relation to clinical outcome in metastatic breast cancer patients〔J〕.Cell Biochem Biophys,2013;65(2):263-73.

2 Sun DW,Zhang YY,Sun XD，etal.Prognostic value of cytokeratin 19 in hepatocellular carcinoma:a meta-analysis〔J〕.Clin Chim Acta，2015;448：161-9.

3 Zhang X,Chen SB,Chen JX，etal.CK19 mRNA expression in the bone marrow of patients with esophageal squamous cell carcinoma and its clinical significance〔J〕.Dis Esophagus,2010;23(5):437-43.

4 Yoshida K,Sato K,Tonogi M，etal.Expression of cytokeratin 14 and 19 in process of oral carcinogenesis〔J〕.Bull Tokyo Dent Coll，2015;56(2):105-11.

5 Liu Z,Yu P,Xiong Y，etal.Significance of CK19,TPO,and HBME-1 expression for diagnosis of papillary thyroid carcinoma〔J〕.Int J Clin Exp Med,2015;8(3):4369-74.

6 Okamoto S,Niikura H,Nakabayashi K，etal.Detection of sentinel lymph node metastases in cervical cancer:assessment of KRT19 mRNA in the one-step nucleic acid amplification (OSNA) method〔J〕.Gynecol Oncol，2013;130(3):530-6.

7 Zhang F,Liu D,Lin B，etal.Expression of high-risk HPV DNA and CK19 in pelvic lymph nodes in stage Ⅰa-Ⅱa cervical cancer and their clinical value〔J〕.Oncol Rep，2012；27(6):1801-6.

8 Ren C,Han C,Fu D，etal.Circulating tumor cells in breast cancer beyond the genotype of primary tumor for tailored therapy〔J〕.Int J Cancer,2016;138(7):1586-600.

9 李 群，劉淑玉，劉紅麗，等.血清鱗狀細(xì)胞癌抗原水平變化在診斷子宮頸鱗癌復(fù)發(fā)中的臨床意義〔J〕.中華婦產(chǎn)科雜志，2015；50(2)：131-6.

10 馬瑞蘭，張海琛，鄒麗娟，等.中晚期子宮頸鱗癌患者同步放化療的療效及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的影響因素分析〔J〕.中華婦產(chǎn)科雜志，2015；50(2)：125-30.

〔2016-06-29修回〕

(編輯 王一涵/張 慧)

云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(2013FB168)

楊宏英(1966-)，女，碩士，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，主要從事婦科腫瘤研究。

楊琳琳(1975-)，女，碩士，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事婦科腫瘤研究。

R737.33

A

1005-9202(2017)08-1940-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.08.051