趙正芳 唐純志

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·論著·

電針關(guān)元、三陰交對(duì)痛經(jīng)模型大鼠血清IL-2、5-HT及P物質(zhì)的影響

趙正芳 唐純志

目的 觀察電針關(guān)元、三陰交對(duì)痛經(jīng)模型大鼠血清白細(xì)胞介素-2(interleukin-2，IL-2)、5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)及P物質(zhì)水平的影響，探討其鎮(zhèn)痛作用機(jī)制。方法 選用40只健康成年SPF級(jí)雌性Sprague-Dawleg大鼠，根據(jù)體重隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、電針組、布洛芬組，每組10只。模型組、電針組及布洛芬組釆用已烯雌酚和催產(chǎn)素聯(lián)合制備痛經(jīng)大鼠模型，電針組給予電針關(guān)元、三陰交，布洛芬組給予布洛芬灌胃給藥，余組不予治療。于第11日觀察并記錄各組30分鐘內(nèi)大鼠扭體反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)，檢測(cè)各組大鼠血清內(nèi)IL-2、5-HT、P物質(zhì)的含量。結(jié)果 經(jīng)治療后，痛經(jīng)模型大鼠的扭體反應(yīng)發(fā)生率明顯下降(P<0.01)，電針組大鼠血清中IL-2、5-HT及P物質(zhì)水平較模型組均有明顯改善(P<0.05)。結(jié)論 電針關(guān)元、三陰交可明顯緩解痛經(jīng)所致疼痛，其作用機(jī)制可能與降低外周炎癥致痛因子水平有關(guān)。

電針； 痛經(jīng)； 白細(xì)胞介素-2； 5-羥色胺； P物質(zhì)

痛經(jīng)是婦科臨床常見病，分為原發(fā)性痛經(jīng)和繼發(fā)性痛經(jīng)，目前研究多認(rèn)為原發(fā)性痛經(jīng)主要與前列腺素(prostaglandin，PG)、催產(chǎn)素、血管加壓素及β-內(nèi)啡肽等有關(guān)[1]，而繼發(fā)性痛經(jīng)則多由子宮器質(zhì)性病變引起。中醫(yī)對(duì)疼痛病因的認(rèn)識(shí)多歸于“不通則痛”或“不榮則痛”，其中針灸通過疏通經(jīng)絡(luò)、調(diào)和氣血，可以有效減輕疼痛的癥狀，并改善機(jī)體的免疫功能紊亂狀態(tài)[2-3]，但其作用機(jī)制仍不明確。本研究選用電針關(guān)元、三陰交，觀察其痛經(jīng)模型大鼠的鎮(zhèn)痛作用以及大鼠血清白細(xì)胞介素-2(interleukin-2，IL-2)、5-羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)及P物質(zhì)水平的變化，試闡述電針治療痛經(jīng)的作用機(jī)制，為針灸治療原發(fā)性痛經(jīng)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用健康成年SPF級(jí)雌性SD大鼠40只(動(dòng)物合格證號(hào)：0025478，許可證號(hào)：SYXK(粵)2013-0001)，2～3月齡，體重200～250 g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，并于廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心完成。

1.2 儀器與試劑

“華佗牌”無菌針灸針(蘇州醫(yī)療用品廠生產(chǎn)，26號(hào)1寸針)；G6805型電針治療儀(上海醫(yī)用電子儀器廠)；已烯雌酚注射液(上海通用藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)070208)；催產(chǎn)素(上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)H310210430)；芬必得(天津葛蘭素史克生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)H10100089)；ELISA檢測(cè)試劑盒(廣州中山生物試劑公司)。

1.3 分組與模型制備

所有大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，按照體重將40只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組、電針組及布洛芬組，每組10只。各組大鼠均在相同環(huán)境下飼養(yǎng)，環(huán)境溫度控制在22～26℃，濕度保持60%左右，明暗周期設(shè)定為12/12小時(shí)。模型制備參照王黎等[4]、羅綺薇等[5]、曾昭菱[6]股部皮下注射乙烯雌酚配合腹腔注射催產(chǎn)素聯(lián)合制備痛經(jīng)模型大鼠的方法，給予模型組、電針組及布洛芬組大鼠股部皮下注射已烯雌酚注射液，連續(xù)10天。第1天0.8 mg/只，第2～9天0.4 mg/只，第10天0.8 mg/只，第11天腹腔注射催產(chǎn)素2 u/只；同時(shí)給予正常對(duì)照組大鼠股部皮下注射等量生理鹽水，每天1次。

1.4 治療

1.4.1 電針組 造模完成第一天即開始針刺治療，每天1次，連續(xù)治療10天，穴位定位參照李忠仁主編《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》，關(guān)元穴位于臍下25 mm處，三陰交位于后肢內(nèi)踝尖直上10 mm。選用華佗牌26號(hào)1寸毫針，關(guān)元直刺2 mm，三陰交直刺4～5 mm，選用上海產(chǎn)G6805型電針治療儀施以密波，頻率為50 次/秒，刺激強(qiáng)度以大鼠針刺穴位局部肌肉可見輕微抽搐，大鼠保持安靜為度，治療20分鐘。

1.4.2 布洛芬組 造模完成后，將芬必得125 mg混入100 mL生理鹽水中，以0.8 mL/只灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥10天。

1.4.3 正常對(duì)照組和模型組 每日抓握1次，每次5分鐘。

1.5 扭體實(shí)驗(yàn)

各組治療10天后，于第11天開始觀察并記錄各組大鼠30分鐘內(nèi)扭體反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)。

1.6 血清指標(biāo)檢測(cè)

血清IL-2檢測(cè)：分別取各組大鼠血2 mL，放置離心機(jī)中，以3000 r/min頻率離心10分鐘，吸取血清后放置于-30℃待檢測(cè)，檢測(cè)均采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，具體操作參照試劑盒步驟；血清5-HT、P物質(zhì)檢測(cè)：血清提取步驟同上，檢測(cè)時(shí)采用高效液相-電化學(xué)的方法檢測(cè)，具體操作參照試劑盒步驟進(jìn)行。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 電針對(duì)痛經(jīng)大鼠扭體反應(yīng)的影響

正常對(duì)照組大鼠扭體反應(yīng)發(fā)生率為0%，其余三組大鼠的扭體發(fā)生率是100%，與正常對(duì)照組相比，其余三組大鼠30分鐘內(nèi)扭體反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)顯著增多(P<0.01)，表明造模成功；與模型組相比，電針及布洛芬組大鼠扭體反應(yīng)發(fā)生的次數(shù)顯著下降(P<0.01)，說明電針及藥物治療均能有效緩解疼痛，降低大鼠扭體發(fā)生次數(shù)。詳見表1。

表1 電針對(duì)痛經(jīng)大鼠扭體反應(yīng)的影響(n=10)

注： 與正常對(duì)照組比較aP0.01；與模型組比較bP0.01。

2.2 電針對(duì)痛經(jīng)大鼠血清IL-2、5-HT、P物質(zhì)水平的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清IL-2、5-HT、P物質(zhì)水平均明顯升高(P<0.05)；與模型組比較，電針組、布洛芬組大鼠血清IL-2、5-HT、P物質(zhì)水平明顯降低(P<0.05)，說明電針及藥物治療可以降低痛經(jīng)大鼠外周血清IL-2、5-HT、P物質(zhì)水平，從而減輕疼痛。詳見表2。

表2 電針對(duì)各組大鼠血清IL-2、5-HT、P物質(zhì)水平的影響(n=10,ng/mL)

注： 與對(duì)正常照組比較，aP<0.05；與模型組比較，bP<0.05。

3 討論

原發(fā)性痛經(jīng)是指伴隨月經(jīng)出現(xiàn)的周期性小腹疼痛或痛引腰骶。有研究證實(shí)，中國(guó)原發(fā)性痛經(jīng)的發(fā)生率占36.6%[7]，對(duì)女性的工作和生活造成嚴(yán)重影響。原發(fā)性痛經(jīng)的主要與體內(nèi)炎癥致痛因子PG有關(guān)，多種物質(zhì)引起子宮平滑肌的痙攣收縮，致使子宮缺血缺氧，酸性代謝產(chǎn)物堆積，子宮疼痛神經(jīng)纖維敏感化而引發(fā)痛經(jīng)[8]。治療上西醫(yī)多選用非甾體類抗炎藥，該類藥物可抑制環(huán)氧化酶活性，減少PG合成，但易引起胃腸道及中樞系統(tǒng)的不良反應(yīng)[1,9]，因此中醫(yī)藥治療痛經(jīng)越來越受到重視。

中醫(yī)關(guān)于痛經(jīng)的記載很多，其病名首見于宋代陳自明《婦人大全良方》[10]。早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中已有關(guān)于“血崩”“血枯”的記載，漢代張仲景《金匱要略·婦人雜病脈證并治》[11]中對(duì)痛經(jīng)的病因病機(jī)及治療已有了明確論述，指出痛經(jīng)的發(fā)生與瘀血阻滯、沖任虛寒等有關(guān)，如“帶下，經(jīng)水不利，少腹?jié)M痛，經(jīng)一月再見者，土瓜根散主之”，即瘀血致痛的癥狀及治法。后世醫(yī)家通過大量臨床實(shí)踐，對(duì)痛經(jīng)的治療也日趨多樣化，其中針灸治療痛經(jīng)療效顯著[12]，現(xiàn)代文獻(xiàn)及臨床研究表明針刺治療痛經(jīng)選穴繁多，以三陰交、關(guān)元使用頻次最高[7,13]。三陰交屬足太陰脾經(jīng)穴，為足三陰經(jīng)交會(huì)穴，“循經(jīng)所過，主治之及”，足三陰經(jīng)循行皆過少腹，故臨床多用于婦科及生殖系統(tǒng)疾病。關(guān)元屬任脈經(jīng)穴，為十二募穴之一，與沖脈相通，又“任主胞胎”，可調(diào)和氣血，培元固本。故本研究選用電針關(guān)元、三陰交，以觀察針刺治療痛經(jīng)的療效。

IL-2是一種具有免疫調(diào)節(jié)功能的淋巴因子，它可增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK)活性，并促進(jìn)NK細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，對(duì)抗免疫抑制因子的作用，從而發(fā)揮宿主抗腫瘤的免疫作用[14-15]。5-HT系統(tǒng)以血腦屏障為界分為中樞和外周兩個(gè)獨(dú)立的系統(tǒng)，在中樞系統(tǒng)中5-HT是參與鎮(zhèn)痛作用的神經(jīng)活性物質(zhì)，而在外周是介導(dǎo)疼痛的炎癥因子[16-17]。P物質(zhì)是一種多肽，廣泛分布于中樞、外周神經(jīng)系統(tǒng)，與痛覺的傳遞和調(diào)節(jié)密切相關(guān)，可參與炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)，外周P物質(zhì)不僅參與傳痛和致痛，還可以刺激淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞釋放更多炎性介質(zhì)，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)[18]。

本研究結(jié)果顯示電針痛經(jīng)大鼠關(guān)元、三陰交可減少大鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，降低大鼠血清IL-2、5-HT、P物質(zhì)水平，不僅證實(shí)針刺治療痛經(jīng)有效，還提示外周IL-2、5-HT、P物質(zhì)的水平與痛經(jīng)發(fā)生密切相關(guān)，上述物質(zhì)水平升高，引起局部炎癥反應(yīng)，而針刺可以降低外周IL-2、5-HT、P物質(zhì)水平，改善患者免疫功能狀態(tài)，減輕外周炎癥反應(yīng)，從而有效鎮(zhèn)痛。

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(本文編輯： 王馨瑤)

Effect of electroacupuncture atGuanyuan(CV4) andSanyinjiao(SP6) on serum IL-2, 5-HT and substance P in dysmenorrhea model rats

ZHAOZhengfang,TANGChunzhi.

CollegeofAcupunctureandMoxibustion,GuangzhouUniversityofChineseMedicine,Guangzhou510000,China

TANGchunzhi，E-mail:jordan664@163.com

Objective To observe the effect of electroacupuncture atGuanyuan(CV4) andSanyinjiao(SP6) in dysmenorrhea rats, to observe the content of IL-2, 5-HT and substance P(SP) in serum and to explore the mechanism of analgesic action. Methods Forty healthy SD female rats(2～3 months, weight of 200～250 g) were randomly divided into normal group, model group, electroacupuncture group and Ibuprofen group, 10 rats in each group. The dysmenorrhea model rats were prepared with Diethylstilbestrol and Oxytocin. The electroacupuncture group rats were treated with electroacupuncture atGuanyuan(CV4) andSanyinjiao(SP6), and the Ibuprofen group rats were given by Ibuprofen, and the other groups were untreated. The writhing response in 30mins were recorded, and the content of IL-2, 5-HT and substance P(SP) in serum was detected at the eleventh day. Results After treatment, the occurrence rate of writhing response was obviously decreased. Compared with the model group, the content of IL-2, 5-HT and substance P in serum of the electroacupuncture group was significantly decreased (P<0.05). Conclusion The electroacupuncture can obviously alleviate dysmenorrhea, the mechanism may be related to the reduction of the level of inflammatory factors in peripheral.

Electroacupuncture； Dysmenorrhea； Interleukin-2； 5-hydroxytryptamine； Substance P

510006 廣州中醫(yī)藥大學(xué)針灸康復(fù)臨床醫(yī)學(xué)院[趙正芳(碩士研究生)、唐純志]

趙正芳(1990- )，女，2014級(jí)在讀碩士研究生。研究方向：針灸治療疾病機(jī)理。E-mail：491558050@qq.com

唐純志(1966- )，博士，教授，博士生導(dǎo)師。研究方向：針灸治療腦病機(jī)理。E-mail:jordan664@163.com

R245

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2017.05.007

2016-08-26)