韓志廣 王 棟

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)赤峰市藥品檢驗所，內(nèi)蒙古 赤峰 024000； 2.內(nèi)蒙古自治區(qū)食品藥品檢驗研究院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

蒙藥制劑嘎古拉-5散劑，主要由草果、當(dāng)歸、血竭、肉豆蔻、紫檀香5味藥組成，具有清心熱功能，用于心熱引起的心慌心悸，心前區(qū)疼痛，冠心病等癥的治療[1]。當(dāng)歸為方中君藥，具有補(bǔ)氣活血，調(diào)經(jīng)止痛，潤腸通便的功效；當(dāng)歸是我國常用中藥材，在蒙醫(yī)藥里使用也十分普遍，近些年研究證明，當(dāng)歸中的有效成分阿魏酸、當(dāng)歸酮、香荊芥酚等具有抑制子宮平滑肌收縮，抗血小板凝集和抗血栓，抗心肌缺血和擴(kuò)張血管作用，并證明阿魏酸能改善外周循環(huán)等藥理活性[2]。因此以阿魏酸作為嘎古拉-5的質(zhì)量評價指標(biāo)具有很好的代表性。本文為了更好地控制藥品質(zhì)量，采用高效液相色譜法測定嘎古拉-5中阿魏酸的含量，具有重要的實際應(yīng)用價值，為進(jìn)一步完善嘎古拉-5質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：島津高效液相色譜儀(LC10-ATVP型泵，SCL-10AVP型控制器，SPD-10AVP型檢測器,SLASS-VP色譜工作站)；HR-200型萬分之一天平；Presia型十萬分之一天平；MAS3.6P-OCE-DM百萬分之一電子天平(德國賽多利斯)。

1.2 試劑與試藥： 阿魏酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110773-200611)；乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純。嘎古拉-5由內(nèi)蒙古錫林郭勒盟蒙醫(yī)研究所提供(批號：090215；090518；090521)；陰性樣品及模擬樣品由赤峰市藥品檢驗所制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件： Dikma TechnologiesC18色譜柱(250mm ×4.6mm,5μm)；流動相：乙腈-0.085%磷酸溶液(14：86)；柱溫25℃；流速1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量20 μL；檢測波長316nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備： 取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中加70%甲醇制成每1mL含12μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備： 取本品細(xì)粉(過三號篩)約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20mL，密塞，稱定重量，加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備：按處方配制不含當(dāng)歸藥材的樣品，按2.2.2項下方法制備陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性試驗：在2.1項色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20μL，注入液相色譜儀，理論板數(shù)按阿魏酸峰計應(yīng)大于2000；陰性對照色譜圖中，在與阿魏酸對照品以及供試品色譜相應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明該方法專屬性好，成方制劑中其它組分對阿魏酸的測定無干擾，見圖1。

2.4 線性關(guān)系考察：精密稱取阿魏酸對照品9.9mg，置50mL棕色量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取上述對照品溶液0.2mL、0.6mL、1.0mL、1.4mL、1.8 mL、2.0mL，置25mL棕色量瓶中，加70%甲醇至刻度，搖勻，按2.1項下色譜條件測定，以濃度對峰面積進(jìn)行回歸分析，結(jié)果阿魏酸在1.584μg·mL-1～15.84μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系?；貧w方程為Y=4363310.42X+6770.07，r=0.9999。

2.5 精密度試驗：取批號為090215的樣品制成的供試品溶液，按2.1項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄梔子苷峰面積，計算RSD值。結(jié)果顯示阿魏酸峰面積的RSD為1.15%，表明儀器的精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗：取批號為090215的樣品制成的供試品溶液，按2.1項下色譜條件分別于0h、2h、4h、8h、12h、24h進(jìn)行測定，記錄阿魏酸峰面積，RSD為0.47%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗：取批號為090215的樣品5份，約1g，精密稱定，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，測定供試品中阿魏酸含量，測得阿魏酸含量分別為0.1331 mg/g、0.1334 mg/g、0.1320 mg/g、0.1321 mg/g、0.1328 mg/g，RSD為0.46%，表明方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收試驗：取已知阿魏酸含量的樣品(批號：090215，阿魏酸含量0.1311mg/g)9份，各約0.5g，精密稱定，置9個錐形瓶中，分別按已知阿魏酸含量的80%、100%、120% 3個水平精密加入阿魏酸對照品0.06mg、0.07mg、0.08mg，按2.2.2項下方法制備，測定每份樣品中阿魏酸的含量，計算回收率和RSD，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果(n=3)

3 樣品的含量測定

取3個批次的嘎古拉-5樣品，按2.2.2項下方法處理并進(jìn)樣，記錄阿魏酸峰面積，按外標(biāo)法測定并計算樣品中阿魏酸含量；為了驗證生產(chǎn)工藝對阿魏酸含量有無影響，按處方制備模擬樣品，同法計算阿魏酸含量。測定結(jié)果見表2。

表2 樣品、模擬樣中阿魏酸量測定結(jié)果(樣品n=2，模擬樣品n=3)

從表中三批樣品測定的數(shù)據(jù)可見，模擬樣中阿魏酸的含量為0.140mg/g，實驗中用相同的方法對上述模擬樣生產(chǎn)用當(dāng)歸藥材進(jìn)行了含量測定，測得阿魏酸含量為0.713mg/g，測定結(jié)果見表3。

表3 當(dāng)歸藥材中阿魏酸含量測定結(jié)果(n=3)

4 結(jié)果與討論

4.1 供試品提取條件考察： 阿魏酸為有機(jī)酸類化合物，是桂皮酸的衍生物之一，易溶于甲醇等有機(jī)溶劑，《中國藥典》[3-5]多以甲醇、70%甲醇、50%甲醇為溶劑提取供試品中的阿魏酸，提取方式多為加熱回流提取。本文在提取過程中，考察了以甲醇、70%甲醇、50%甲醇為提取溶劑，并考察了加熱回流提取時間( 10min、20min、30min、 40min)對提取效率的影響。

實驗結(jié)果表明：以70%甲醇為溶劑對阿魏酸進(jìn)行提取，效果最佳，對加熱回流時間的考察表明回流提取30min和回流提取40 min相比阿魏酸含量基本一致，為提高效率，將加熱回流提取時間定為30 min。

4.2 色譜條件的考察： 采用高效液相色譜法測定蒙藥嘎古拉-5中阿魏酸的含量多采用酸性系統(tǒng)，主要有甲醇-水-磷酸系統(tǒng)、甲醇-水-冰乙酸系統(tǒng)等，參照文獻(xiàn)，經(jīng)反復(fù)嘗試，最終選用乙腈-0.085%磷酸溶液( 14∶86) 為流動相，分離效果好；在200nm～400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行全波長掃描，結(jié)果阿魏酸在316nm處有最大吸收，故選擇檢測波長為316mn；實驗柱溫采用25℃，在此色譜條件下，阿魏酸與其他成分達(dá)到分離度良好，并具有較好的保留時間。

4.3 測定結(jié)果分析：結(jié)果表明，樣品和模擬樣品中阿魏酸含量相差不大，說明生產(chǎn)工藝對嘎古拉-5中阿魏酸含量無影響；對當(dāng)歸單味藥材中阿魏酸的含量測定結(jié)果表明樣品均一性良好，制劑工藝穩(wěn)定。

本實驗采用高效液相法測定嘎古拉-5中阿魏酸含量，將傳統(tǒng)蒙醫(yī)藥理論與現(xiàn)代藥學(xué)新理論、新技術(shù)有機(jī)的結(jié)合起來，進(jìn)一步明確了蒙藥有效成分，加強(qiáng)傳統(tǒng)蒙藥的現(xiàn)代化研究，全面控制藥材質(zhì)量。本方法操作簡便、快捷、準(zhǔn)確、重復(fù)性和穩(wěn)定性好，適用于嘎古拉-5的質(zhì)量控制，為進(jìn)一步完善嘎古拉-5的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定了基礎(chǔ)，對促進(jìn)蒙醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化、可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。

[1]國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會．中華本草蒙藥卷[M]．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2004: 274-275.

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[3]呂光華,程世瓊,陳金泉,等. HPLC測定川芎藥材和飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸的含量及其質(zhì)量評價指標(biāo)[J]. 中國中藥雜志,2010,(02):194-198.

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[5]金汝城,李貴文,馬素麗,等. 當(dāng)歸中阿魏酸提取工藝的優(yōu)化研究[J]. 中成藥,2008,(04):516-519.