張 麗

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

阿那日八味散，蒙藥名阿那日巴達(dá)瑪，由石榴、益智、肉桂、茇蓽、黑冰片、木鱉子(制)、訶子、玫瑰花8味藥材組成，具有袪“巴干達(dá)協(xié)日”，散瘀，消食，止痛之功效。蒙醫(yī)臨床用于胃潰瘍，消化不良，胃寒疼痛，胃脘脹滿，胃酸嘔吐，腹脹浮腫[1]。該藥收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》蒙藥分冊(cè)，原標(biāo)準(zhǔn)中沒有收載相關(guān)定性定量指標(biāo)，為全面控制阿那日八味散的質(zhì)量，提高該藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，故參考文獻(xiàn)[2-6]采用高效液相色譜法對(duì)其中蓽茇藥材所含的有效成份胡椒堿進(jìn)行含量測(cè)定，可為該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供證據(jù)。

1 儀器與試藥

大連依利特P230型高效液相色譜儀；UV230+紫外可見檢測(cè)器；手動(dòng)進(jìn)樣器；KQ5200E型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司，200W，40KHz)。電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司，0.1mg；0.01mg)。

胡椒堿對(duì)照品(批號(hào)：111637-201206)，購自中國食品藥品檢定研究院；阿那日八味散(呼和浩特中蒙醫(yī)院，批號(hào)：150112；150213,150312)，甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：Agilent XDB-C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)；流動(dòng)相：甲醇-水(80：20)；流速：1.0mL·min-1；柱溫：室溫；檢測(cè)波長：343nm；進(jìn)樣量：20μL。理論塔板數(shù)按胡椒堿計(jì)算不得少于2000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取胡椒堿對(duì)照品12.04，置200mL棕色容量瓶中，加入無水乙醇溶解，定容至刻度，搖勻，制成60.20μg·mL-1的溶液，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。取對(duì)照品儲(chǔ)備液25mL于50mL棕色容量瓶中，加入無水乙醇稀釋至刻度，制成30.10μg·mL-1的溶液，即得對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備：取阿那日八味散約0.18g，精密稱定，置具塞錐形瓶中,加入無水乙醇50mL，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再次稱定重量，加無水乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，棄去初濾液，取續(xù)濾液即得。

2.2.3 陰性樣品品溶液的制備：按阿那日八味散處方比例稱取除蓽茇外的其余藥材制備陰性樣品，按照制備供試品溶液的方法制備陰性樣品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn)：分別吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液各20μL，按“2.1”色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示胡椒堿與其他組分色譜峰可基線分離，分離度符合規(guī)定，且陰性樣無干擾。色譜圖見圖1。

2.3.2 線性范圍考察：精密吸取胡椒堿對(duì)照品溶液(60.20μg·mL-1)1.5、3.0、5.0、6.5、8.0、10.0mL，分別置于10mL棕色容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別配制成9.030、18.06、30.10、39.13、48.16、60.20μg·mL-1的溶液。按照“2.1”色譜條件，分別測(cè)定，以濃度C(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y=207.06X-392.70，r=0.9997。結(jié)果顯示，胡椒堿在9.030μg·mL-1-60.20μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗(yàn)：分別精密吸取供試品溶液(批號(hào)：150112)與對(duì)照品溶液(30.10μg·mL-1)各20μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果對(duì)照品溶液的RSD=1.7%；供試品溶液的RSD=0.3%。結(jié)果表明：該儀器精密度良好，符合含量測(cè)定要求。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液(批號(hào)：150112)，分別于0，2，4，6，8及10小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定，記錄峰面積值，RSD=0.9%。結(jié)果表明：供試品溶液在10小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好，符合含量測(cè)定要求。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)：取供試品(批號(hào)：150112)約0.18g，精密稱定，共6份，分別按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，分別吸取20μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積，并計(jì)算含量，結(jié)果胡椒堿的平均含量為3.052mg·g-1，RSD=1.6%。結(jié)果表明：該測(cè)定方法的重復(fù)性較好，符合含量測(cè)定要求。

2.3.6 回收率試驗(yàn)：取已知含量供試品(批號(hào)：150112)粉末約0.09g，共6份，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，每份精密加入胡椒堿對(duì)照品溶液(60.20μg·mL-1)4.5mL。水浴蒸干溶劑，分別按供試品溶液的制備方法制備溶液，分別精密吸取20μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。平均加樣回收率為98.75%，RSD=1.3%。結(jié)果表明：該測(cè)定方法的準(zhǔn)確度良好，符合含量測(cè)定要求，測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3.7 耐用性試驗(yàn)：取供試品(批號(hào)：150112)2份,每份約0.18g，精密稱定，分別按“2.2”方法項(xiàng)下制備供試品溶液，另對(duì)照品溶液(30.10μg·mL-1)，在不同色譜柱類型(依利特C18、安捷倫C18、迪馬C18)，分別測(cè)定供試品含量，RSD為1.5%(n=6)。結(jié)果表明：該方法的耐用性良好，符合含量測(cè)定要求。

3 樣品的測(cè)定

分別取3個(gè)不同批號(hào)的阿那日八味散供試品約0.18g，精密稱定，分別按供試品溶液的制備方法制備溶液，精密吸取溶液各20μL，注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算胡椒堿的含量，按照《中國藥典》2015版一部中規(guī)定：蓽茇中胡椒堿的含量不得少于2.5%來計(jì)算，阿那日八味散含胡椒堿應(yīng)不低于2.778mg·g-1，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

4.1 提取時(shí)間的選擇：實(shí)驗(yàn)對(duì)超聲提取的時(shí)間進(jìn)行了考察，比較了20min，30min，40min結(jié)果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，超聲30min和超聲40min含量差別不大，但明顯大于20min，故確定超聲提取時(shí)間為30min。

3.2 流動(dòng)相的選擇：實(shí)驗(yàn)比較了不同的流動(dòng)相：甲醇—水(77∶23)、甲醇—水(80∶20)。結(jié)果表明：用甲醇-水(80∶20)為流動(dòng)相保留時(shí)間適宜，分離效果好，故采用甲醇-水(80∶20)為流動(dòng)相。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).蒙藥分冊(cè)[S].1998:117.

[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[M].一部.中國醫(yī)藥科技出版社, 2015:219.

[3]畢曉黎,孫冬梅,羅文匯,等.HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方姜黃微囊中姜黃素和胡椒堿的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010,16(2)：20-22.

[4]李普全,白音夫.高效液相色譜法測(cè)定不同色澤蓽茇中胡椒堿含量[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2009,(5)：44-45.

[5]包勒朝魯,烏蘭圖雅,那生桑,等.蒙成藥哈日嘎布日-10味片中胡椒堿含量測(cè)定[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2014,20(1)；81-83.

[6]史文燕,郭寶鳳,王玉華.高效液相色譜法測(cè)定四味光明鹽湯散中胡椒堿的含量[J].內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào).2014,36(6)：505-508.