何衛(wèi)社 梁俊杰 劉建嶺 劉樂霞 王德平 馮麗娜 張 燕 曹立敏

罕見患者Ael04亞型1例及其家系調(diào)查

何衛(wèi)社 梁俊杰 劉建嶺 劉樂霞 王德平 馮麗娜 張 燕 曹立敏

Ael04亞型 家系調(diào)查 分子生物學(xué)

Ael亞型在人群中罕見[1]，最近在患者中發(fā)現(xiàn)1例Ael亞型，現(xiàn)將家系調(diào)查及分子生物學(xué)鑒定結(jié)果報道如下。

材料與方法

1 材料 患者，女，26歲，足月待產(chǎn)，無輸血史、妊娠史，常規(guī)查血型為正定O、反定A，經(jīng)家系調(diào)查，其母親正定O、反定A，進一步做血型血清學(xué)鑒定，并送上海血液中心血型參比室做分子生物學(xué)鑒定。

2 試劑 單克隆抗-A、抗-B血型定型試劑（長春博訊生物有限公司），人源抗-A和抗-B及Ac、Bc、Oc、A2c和自身紅細(xì)胞（本站制備），抗-H、抗-A1（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司），均在有效期內(nèi)使用。

3 方法

3.1 血型血清學(xué)檢查

3.1.1 血型鑒定：按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作［2］，見表1。

3.1.2 吸收、放散試驗：被檢者紅細(xì)胞、陽性對照A型紅細(xì)胞、陰性對照O型紅細(xì)胞分別與效價64的人源抗-A血清做吸收放散試驗。按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程操作［2］。

3.1.3 血型物質(zhì)檢測：取被檢者唾液1～2 ml，沸水煮10 min，離心后取上清。 抗-A、抗-B單克隆抗體試劑用生理鹽水稀釋至效價為1∶16，抗-H抗體不用稀釋。分別將100 μl血型物質(zhì)與制備后的試劑100 μl等體積混合，室溫放置10 min。 用Ac檢測中和后的抗-A抗體，Bc檢測中和后的抗-B抗體，Oc檢測中和后的抗-H抗體。

3.2 家系調(diào)查：對家系共3代進行調(diào)查。

3.3 分子生物學(xué)鑒定：患者及其母親標(biāo)本送上海市血液中心國家血型參比室進行分子生物學(xué)鑒定。

結(jié) 果

1 血型血清學(xué)檢查結(jié)果 該患者及其母親的紅細(xì)胞與抗-A、抗-B、抗-AB在室溫、4℃時均不凝集，與抗-H出現(xiàn)強凝集。2人的血清中除有正?？?B外，在4℃與A2c、自身c、Oc均不反應(yīng)，與Ac有弱凝集，證明血清中有抗-A1；吸收放散試驗效價為64的人源抗-A經(jīng)被檢者紅細(xì)胞和對照A型紅細(xì)胞吸收后，被檢者抗-A的效價降為16，對照A型紅細(xì)胞抗-A效價降為0，被檢者放散抗-A的效價為32，對照A型紅細(xì)胞放散抗-A效價為0，陰性對照O型紅細(xì)胞放散液為陰性，證明被檢者的A抗原比正常A型的A抗原吸收能力弱，放散能力強，紅細(xì)胞上有弱的A抗原；血型物質(zhì)測定顯示患者為分泌型，分泌H型物質(zhì)，不分泌A型、B型物質(zhì)。見表1。

2 家系調(diào)查結(jié)果 家系3代中有2人為Ael亞型。見圖1。

3 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果 患者及其母親基因型分別為Ael04/ O201、Ael04/O101。見表1。

表1 血型血清學(xué)、分子生物學(xué)檢測結(jié)果

圖1 Ael04家系血型遺傳圖

討 論

Ael在人群中罕見，有學(xué)者在法國150 000名獻血者中未查到Ael，而在400 000名中國人群中檢測到5例Ael［1］，提示Ael在人群中頻率較低且存在差異。本研究的血型血清學(xué)試驗結(jié)果顯示患者及其母親均為A細(xì)胞不被抗-A、抗-AB凝集，但經(jīng)吸收放散試驗可證實紅細(xì)胞上有極弱的A抗原，唾液中含H物質(zhì)，不含A物質(zhì)，符合Ael血型血清學(xué)特點［3］。而Ael亞型的血清中是否含有抗-A1尚不肯定；許先國等［4］報道先證者不含有抗-A1，但其母親含有；宿軍［5］、王成輝［6］、呂杭軍等［7］報道兩者均含抗-A1；本例患者及其母親血清中均有抗-A1，肯定了某些Ael個體血清中含抗-A1。Ael與Ax、Am的區(qū)別主要在于Ax血清中常有抗-A1抗體，而Am唾液血型物質(zhì)有A、H物質(zhì)［8，9］。

采用分子生物學(xué)方法進行基因定型，本例患者及其母親均為Intron 6 5G＞A突變，對照血型抗原基因突變數(shù)據(jù)庫[10]，其等位基因均為Ael04。Soloman及Sturgeon于 1964年報道，Ael具有遺傳性[11]，家系調(diào)查及分子生物學(xué)鑒定發(fā)現(xiàn)此患者Ael04血型從母親遺傳所得，其家族目前已遺傳了2代，本例證實了Ael的遺傳性。由此可見，血清學(xué)方法無法對亞型正確定型，通過分子生物學(xué)技術(shù)，結(jié)合家系調(diào)查揭示血型遺傳方式，可得到準(zhǔn)確的血型結(jié)果，因此，分子生物學(xué)技術(shù)及家系調(diào)查是血型血清學(xué)方法的重要輔助手段。

Ael亞型紅細(xì)胞上的A抗原極弱，一般情況下不易檢出，患者及其母親血清中不但含有抗-B，還有抗-A1，易將其誤定為“O”型。該Ael亞型患者由于其血清中有抗-A1，不能接受A型紅細(xì)胞，而應(yīng)輸注O型紅細(xì)胞，作為獻血者，血漿不應(yīng)輸給A型患者。

（感謝上海市血液中心血型參比室向東老師的大力支持?。?/p>

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3 李勇，馬學(xué)嚴(yán).實用血液免疫學(xué)血型理論和實驗技術(shù)[M].北京：科學(xué)出版社，2006：136-137.

4 許先國，何吉，洪小珍，等.Ael亞型的分子生物學(xué)研究[J].中國輸血雜志，2003，16（2）：74-77.

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R457.1+1

B

1671-2587（2017）02-0203-02

2016-08-22）

（本文編輯：姚萍）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.02.033

065000 河北省廊坊市人民醫(yī)院（何衛(wèi)社，王德平）；滄州市中心血站（梁俊杰，劉建嶺，劉樂霞，馮麗娜，張燕）；廊坊廣安醫(yī)院（曹立敏）

何衛(wèi)社（1966–），男，河北廊坊人，副主任技師，主要從事臨床輸血工作，（Tel）18003368990（E-mail）tianwaiyoutian8270@sina.com。

劉樂霞，女，主任技師，主要從事免疫血液學(xué)及質(zhì)量管理工作，（Tel）13582728982（E-mail）liulexia@163.com。