王文婷 胡興斌 孫文利 張輝潔 尤海菲 杜 姣 尹 文

97 835例獻(xiàn)血者傳染性指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的不重合性分析

王文婷 胡興斌 孫文利 張輝潔 尤海菲 杜 姣 尹 文

目的 分析和探討無償獻(xiàn)血者標(biāo)本中傳染性指標(biāo)的2次ELISA法檢測(cè)結(jié)果不重合的情況，為試劑選擇及獻(xiàn)血者篩選策略的制定提供依據(jù)。方法 選取本血站2013年1月～ 2015年11月97 835例無償獻(xiàn)血者標(biāo)本，采用ELISA法檢測(cè)HBsAg、抗-HCV、抗-HIV（1+2）和抗-TP四項(xiàng)傳染性指標(biāo)，對(duì)2次檢測(cè)不合格標(biāo)本中由單試劑檢測(cè)不合格的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 97 835例標(biāo)本中，抗-HIV（1+2）和抗-HCV的不重合率最高，抗-TP的不重合率最低。結(jié)論 試劑選擇應(yīng)進(jìn)行篩選與組合，將不同試劑間不重合率的比對(duì)納入試劑篩選的重要指標(biāo)。

傳染性指標(biāo) ELISA 不重合性

血站實(shí)驗(yàn)室對(duì)傳染性指標(biāo)的檢測(cè)不同于醫(yī)療機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室，其結(jié)果為決定性信息。檢測(cè)結(jié)果若出現(xiàn)錯(cuò)誤，可能引發(fā)經(jīng)血液傳播疾病，造成嚴(yán)重后果。1985～1990年法國(guó)出現(xiàn)約4 000例感染艾滋病的重大事件[1]，未能開展有效高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是其重要原因之一。血液質(zhì)量與所用試劑的靈敏度和特異性密切相關(guān)。依據(jù)《獻(xiàn)血者健康檢查標(biāo)準(zhǔn)》，本站無償獻(xiàn)血者血液篩查采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法，由不同的工作人員用兩種不同廠家試劑對(duì)無償獻(xiàn)血標(biāo)本進(jìn)行2次傳染指標(biāo)的檢測(cè)。為保證用血安全，對(duì)單試劑陽(yáng)性或可疑標(biāo)本也按不合格標(biāo)本處理，而此類不合格所造成的血液報(bào)廢占相當(dāng)?shù)谋壤?。為此，筆者對(duì)2013年1月～ 2015年11月中國(guó)人民解放軍西安血站97 835名無償獻(xiàn)血者的血液應(yīng)用兩種不同ELISA試劑的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

材料與方法

1 材料 2013年1月～2015年11月解放軍西安血站無償獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本，共97 835例，所有獻(xiàn)血者體格檢查均符合衛(wèi)生部《獻(xiàn)血者健康檢查標(biāo)準(zhǔn)》。

2 儀器與試劑 RSP150全自動(dòng)加樣儀，SunRise酶標(biāo)儀由瑞士TECAN公司生產(chǎn)。BEPIII全自動(dòng)酶免分析儀由德國(guó)德靈公司生產(chǎn)，國(guó)產(chǎn)HBsAg、抗-TP、抗HIV-（1+2）檢測(cè)試劑由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)產(chǎn)抗-HCV由湖南康潤(rùn)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，進(jìn)口HBsAg、抗-HCV、抗-TP檢測(cè)試劑購(gòu)自意大利Sorin公司，進(jìn)口抗HIV-（1+2）檢測(cè)試劑購(gòu)自法國(guó)BIO-RAD公司，試劑均經(jīng)國(guó)家批批檢合格。質(zhì)控品由衛(wèi)生部臨檢中心提供。

3 檢測(cè)方法 所有標(biāo)本均用不同廠家試劑進(jìn)行2次ELISA法檢測(cè)。HBsAg用萬泰和Sorin試劑檢測(cè)，抗-HCV用康潤(rùn)和Sorin試劑檢測(cè)，抗-HIV（1+2）用萬泰和BIO-RAD試劑檢測(cè)，抗-TP用萬泰和Sorin試劑檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)過程嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。

4 判定標(biāo)準(zhǔn) 相關(guān)參數(shù)的設(shè)置嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。S/CO值≥1 為陽(yáng)性，依據(jù)本站相關(guān)SOP，各檢測(cè)項(xiàng)目S/CO值在0.6～1設(shè)置為灰區(qū)，陽(yáng)性或灰區(qū)統(tǒng)稱陽(yáng)性；檢測(cè)結(jié)果中，雙試劑檢測(cè)呈陽(yáng)性即判為該標(biāo)本不合格，任一種試劑結(jié)果為陽(yáng)性反應(yīng)的，即使用原有試劑雙孔復(fù)檢，雙孔復(fù)檢中任一孔陽(yáng)性則判定該標(biāo)本不合格。抗-HIV（1+2）檢測(cè)結(jié)果中，不合格標(biāo)本需送至西安市疾控中心做確證實(shí)驗(yàn)。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì) HBsAg、抗-HCV、抗-HIV（1+2）和抗-TP 各項(xiàng)目試劑檢測(cè)結(jié)果均不合格的標(biāo)本數(shù)、單試劑不合格標(biāo)本數(shù)、不合格標(biāo)本總數(shù)及不重合標(biāo)本數(shù)，計(jì)算單檢測(cè)項(xiàng)目的不重合率。項(xiàng)目不重合率 = 不重合標(biāo)本數(shù)/該項(xiàng)目不合格數(shù)×100%，對(duì)不同檢測(cè)項(xiàng)目的不重合率進(jìn)行R×C列聯(lián)表卡方檢驗(yàn)，α=0.05，若差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，則進(jìn)一步進(jìn)行組間兩兩比較，采用Bonferroni法調(diào)整檢驗(yàn)水平，α′=α/6=0.008 3。

結(jié) 果

經(jīng)酶免篩查的97 835例標(biāo)本中，傳染性指標(biāo)不合格標(biāo)本2 369例，HBsAg檢測(cè)不合格852例，不合格率為0.87%；抗-HIV（1+2）檢測(cè)不合格中單試劑不合格92例，占60.9%，經(jīng)西安市CDC確證65例，見表1。對(duì)4項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的不重合率進(jìn)行R×C列聯(lián)表卡方檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=214.369，P＜0.001）。進(jìn)一步的組間兩兩比較結(jié)果見表2。4項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)中，不重合率最高的是抗-HIV（1+2）與抗-HCV，不重合率最低的是抗-TP，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 97 835例標(biāo)本ELISA雙試劑檢測(cè)不合格結(jié)果統(tǒng)計(jì)

討 論

無償獻(xiàn)血者標(biāo)本的傳染性指標(biāo)的2次ELISA法檢測(cè)不合格結(jié)果中，有相當(dāng)一部分為單試劑不合格。尤其是抗-HIV（1+2）和抗-HCV，其不重合率分別為60.9%和58.9%，不重合率最低的為抗-TP（24.3%），楊亞艷等報(bào)道國(guó)產(chǎn)試劑加進(jìn)口試劑檢測(cè) HBsAg、抗-HCV、抗-HIV（1+2）和抗-TP項(xiàng)目不重合率為55.59%、21.94%、32.12%和11.11%，不重合率最高的是HBsAg和抗-HIV（1+2），最低的是抗-TP[2]，與本文結(jié)果略有不同，可能與所用初復(fù)檢試劑不同有關(guān)。而黃秀琳等報(bào)道的獻(xiàn)血者傳染性指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果不合格中，有相當(dāng)一部分為單試劑不合格，特別是抗-HCV和抗-HIV不合格結(jié)果中，有60%～ 70%的結(jié)果存在爭(zhēng)議[3]，與本文統(tǒng)計(jì)結(jié)果基本一致。

表2 不重合率兩兩比較χ2值

盡管檢測(cè)抗體的第 3 代免疫測(cè)定精確度高，自動(dòng)檢測(cè)儀器的可信度高，但抗-HCV 假陽(yáng)性率還是很高（15% ～62%）[4]。因此，理論上抗-HCV檢測(cè)的假陽(yáng)性或不確定率通常高于 HBsAg 檢測(cè)結(jié)果。所以，針對(duì)假陽(yáng)性獻(xiàn)血者歸隊(duì)，抗-HCV 篩查的意義大于 HBsAg 篩查[5]。試劑的靈敏度和特異性往往不能兼而得之。當(dāng)靈敏度和特異性出現(xiàn)沖突時(shí)，為保障血源安全，從HIV傳播的危險(xiǎn)性考慮，盡可能選擇靈敏度為100%的試劑[6]。這也是抗-HIV（1+2）檢測(cè)不符合率較高的原因之一。加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理，提高實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力，研發(fā)和采用高靈敏度和高特異性的方法和試劑進(jìn)行血液檢測(cè)，是各級(jí)血液工作人員的任務(wù)和目標(biāo)[7]。首先，雖然所選用試劑的生產(chǎn)和供應(yīng)商均具有國(guó)家要求的相應(yīng)資質(zhì)，每批試劑均通過國(guó)家批批檢，且在有效期內(nèi)使用，我們也嚴(yán)格按照試劑說明書及相關(guān)SOP文件規(guī)范操作，但仍然存在兩種試劑結(jié)果不一致的現(xiàn)象，這與不同廠家技術(shù)水平的差異以及不同試劑包被的抗原或抗體不同有關(guān)[8]。就血站而言，選用高靈敏度和特異性ELISA試劑盒尤為重要，高靈敏度可以盡量避免漏檢，最大限度的保證血液安全。高特異性可以盡量避免假陽(yáng)性，保證寶貴的血液資源不被浪費(fèi)。選擇最佳的檢測(cè)試劑組合進(jìn)行無償獻(xiàn)血者篩查，可以減少假陰性率，進(jìn)一步降低輸血風(fēng)險(xiǎn)，保證輸血安全[9]。其次，應(yīng)積極探索分子檢測(cè)技術(shù)在血站工作中的應(yīng)用。血液篩查引入 NAT 可彌補(bǔ) ELISA 檢測(cè)的不足，如后者檢測(cè)窗口期長(zhǎng)、靈敏度低，病毒亞型和變異及靜默感染導(dǎo)致的漏檢等[10]。

綜上所述，我們必須進(jìn)一步加強(qiáng)血液檢測(cè)試劑的篩選及評(píng)估，重視不同試劑間不重合率的比對(duì)工作，并將其納入試劑篩選的重要指標(biāo)，同時(shí)也應(yīng)注意篩選最佳的檢測(cè)試劑組合，以期最大限度的保障血液安全，減少血液浪費(fèi)。同時(shí)，還可對(duì)單試劑不合格人群進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果的追蹤，將其納入暫時(shí)屏蔽，以減少獻(xiàn)血者的流失，并將該人群檢測(cè)結(jié)果的分析做為灰區(qū)設(shè)置的參考依據(jù)。

1 陳素媛.法國(guó)國(guó)家血站的管理與無償獻(xiàn)血[J].中國(guó)輸血雜志，2002，15（1）：74.

2 楊亞艷，趙繼華，沈?qū)W耕.無償獻(xiàn)血標(biāo)本傳染性指標(biāo)兩次ELISA檢測(cè)結(jié)果不重合原因分析[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2015，13（8）：70-71.

3 黃秀琳，李維，段恒英，等.重慶市血液中心無償獻(xiàn)血者傳染性指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的重合性分析[J].中國(guó)輸血雜志，2013，26（6）：546-548．

4 De Leuw P，Sarrazin C，Zeuzem S． How to use virological tools for the optimal management of chronic hepatitis C[J].Liver Int，2011，31（Suppl 1）：3-12.

5 劉宇寧，蔡菊英，劉曉音.血液篩查HBsAg、抗-HCV 假陽(yáng)性獻(xiàn)血者歸隊(duì)的調(diào)查分析[J].中國(guó)輸血雜志，2012，25（3）：260-262．

6 魏祥松，徐育云，薛敏曦，等.HIV抗體診斷試劑的評(píng)價(jià)及選用策略[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2006，8（1）：41-42.

7 申子瑜.我國(guó)血站實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)能力初探[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2007，9（2）：171-172．

8 魏祥松，徐育云，薛敏曦，等.HIV抗體診斷試劑的評(píng)價(jià)及選用策略[J].臨床輸血與檢驗(yàn)，2006，8（1）：41-42.

9 王宋興，曾勁峰，古醒輝，等.兩種TP抗體檢測(cè)試劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（7）：930-931.

10 蔣昵真，肖建宇，蔡麗娜，等． 血液混樣核酸篩查與酶免篩查的最佳工作流程探討[J].中國(guó)輸血雜志，2011，24（5）：422-423．

Analysis of Divergent Epidemical Markers Detected by ELISA in 97 835 Volunteer Blood Donor

WANG Wen-ting，HU Xin-bin，SUN Wen-li，et al.
Xi'an Blood Bank, Xijing Hospital，The Fourth Military University Xi'an 710032

Objective To investigate，and better the screen reagent as well recruitment strategy. To provide strong evidence for selecting high quality reagent and recruitment strategy，we analyzed whether twice ELISA results of pathogen marker detection in blood donors was consistent. Methods ELISA was performed to detect HBsAg，anti-HCV，anti-HIV（1+2） and anti-TP，in 97 835 blood donor samples collected from Jan. 2013 to Nov. 2015. Statistical analysis was employed to evaluate the divergent rate of each pathogen marker in the discharged donations. Results The results showed that there was higher inconsistent rate in anti-HIV （1+2） and anti-HCV detection，while the lowest inconsistent rate was in anti-TP detection. Conclusions Reagents for ELISA would be selected and grouped，thus the inconsistent detection data should be taken into account to select ELISA kit.

Epidemical marker ELISA Noncoincidence

R446.61

A

1671-2587（2017）02-0148-03

2016-12-01）

（本文編輯：王虹）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.02.016

710032 陜西省西安市第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院輸血科（中國(guó)人民解放軍西安血站）

王文婷（1984–），女，陜西漢中人，主管技師，學(xué)士，主要從事血液檢測(cè)工作，（Tel）13468834801。

尹文（1969–），男，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事免疫學(xué)研究工作，（E-mail）yinwen@fmmu.edu.cn。