林曉淵

(福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬廈門市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建廈門361000)

抗-HCV抗體、HCV-RNA定量與ALT檢測相關(guān)性分析

林曉淵

(福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬廈門市中醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建廈門361000)

目的比較不同實(shí)驗(yàn)方法檢測丙型肝炎診斷的準(zhǔn)確性，并觀察丙型肝炎抗體與HCV－RNA病毒載量及ALT異常之間的相關(guān)性。方法對118例高敏化學(xué)發(fā)光法(CIA)檢測丙肝抗體初篩結(jié)果呈陽性(S/Co＞1)的標(biāo)本，并對其進(jìn)行熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（FQ－PCR）進(jìn)行HCV－RNA病毒載量檢測及應(yīng)用貝克曼全自動生化儀丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)指標(biāo)。結(jié)果118例丙肝抗體初篩陽性患者中，HCV RNA陽性率為46．6%（55/118）不同HCV抗體檢測值在不同區(qū)間HCV－RNA檢測陽性率不全相同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=62．745，P＜0．05）；在55例HCV－RNA陽性(HCV RNA＞103copies/ml)的樣本中，有43例ALT結(jié)果異常，ALT異常率為78．1%（43/55），其ALT異常率隨著HCV RNA含量的增高而升高，即呈正相關(guān)(r=0．96，P＜0．01)。結(jié)論化學(xué)發(fā)光法檢測血清HCV抗體診斷HCV與熒光PCR檢測方法均可能存在假陽性或假陰性情況；熒光PCR檢測結(jié)果陽性率低于CIA檢測結(jié)果；在臨床診斷中丙肝抗體的檢測應(yīng)與熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)一起使用，可以降低漏診，應(yīng)聯(lián)合丙肝抗體、HCV－RNA、ALT檢測為臨床抗病毒提供有效評估提供依據(jù)。

丙型肝炎；高敏化學(xué)發(fā)光法；熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶

HCV是腸道外傳播的非甲乙型肝炎的主要病原體，所導(dǎo)致的肝炎稱為丙型肝炎，是常見的慢性肝病之一。丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的一種重要的世界性傳染病[1]。HCV感染呈世界性分布，據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球HCV的感染率約為2．8%，估計(jì)約1．85億人感染了HCV，每年新發(fā)丙型肝炎病例約3．5萬例，我國丙型肝炎病毒（HCV）感染率約為2．5%～4．9%，多數(shù)HCV感染都是無癥狀性的，少數(shù)引起急性肝炎的患者，其癥狀也比甲型和乙型急性肝炎的癥狀輕不幸的是，HCV病毒感染初期可引起肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，進(jìn)一步發(fā)展成為肝硬化、肝癌等終末期肝病，嚴(yán)重危害人類健康[2]。因此，早期準(zhǔn)確診斷和合理治療具有重要的臨床意義。

HCV抗體是反映HCV是否感染的主要指標(biāo)。HCV RNA是HCV復(fù)制的標(biāo)志，越來越多的肝病實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)把它作為判斷丙肝感染和丙肝治療療效的主要參考。而Sysmex高敏化學(xué)發(fā)光儀的出現(xiàn)，使一種更加靈敏、結(jié)果更加準(zhǔn)確的丙肝抗體檢測新方法成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)旨在探討丙肝抗體檢測中的臨床價(jià)值，結(jié)合患者HCV RNA定量檢測及ALT指標(biāo)，為丙肝的實(shí)驗(yàn)診斷、治療以及療效提供參考。

1 材料與方法

1．1一般資料118例標(biāo)本均來自我院2015年1月－2016年2月門診和住院患者，經(jīng)高敏化學(xué)發(fā)光法(ECIA)檢測丙肝抗體，初篩結(jié)果呈陽性(S/Co)＞1。其中：男性78例，女性40例，年齡平均(23±58)歲。1．2方法空腹采集病人抽取2ml外周靜脈血于EDTA－K2抗凝及真空抗凝管中并分離血清，用于丙肝抗體測定及ALT，并按照天根RNA提取試劑盒提取RNA用于HCV－RNA病毒載量測定。丙肝抗體測定ECIA檢測采用日本希森美康HISCL－5000的免疫診斷系統(tǒng)及希森美康醫(yī)用電子（上海）有限公司的丙型肝炎病毒抗體診斷試劑；ALT采用貝克曼全自動生化儀及配套試劑檢測；HCVRNA病毒載量采用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)使用廈門安普利生物工程有限公司生產(chǎn)的丙肝肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（熒光PCR法）。

1．3結(jié)果判定抗HCV結(jié)果的判斷根據(jù)廠家說明書檢測初篩結(jié)果(S/Co)＞1為陽性；ALT結(jié)果大于40U/L為異常；HCV－RNA病毒載量檢測結(jié)果以5．0×103IU/ml≤HCV RNA≤5．0×108IU/ml判斷為陽性，直接報(bào)告定量結(jié)果；樣本中病毒載量檢測結(jié)果＞5．0×108IU/ml，判斷為陽性，報(bào)告為＞5．0×108IU/ ml；樣本中病毒載量檢測結(jié)果＜5．0×103IU/ml，判斷為陰性，報(bào)告為＜5．0×103IU/ml。

1．4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17．0對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。組率的比較采用χ2檢驗(yàn)，抗HCV、HCV－RNA與ALT之間關(guān)系采用相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2．1 HCV抗體檢測不同區(qū)間值中HCV－RNA載量的陽性率比較將118例抗體陽性者按HCV抗體檢測值由低到高排序，對118例HCV抗體陽性者的HCV抗體檢測值在不同區(qū)間HCV－RNA檢測陽性率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，總陽性率為46．6%（55/ 118），不同HCV抗體檢測值在不同區(qū)間HCVRNA檢測陽性率不全相同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=62．745，P＜0．05），見表1。

2．2 HCV RNA含量與ALT檢測結(jié)果分析在55例PCR檢測結(jié)果呈陽性(HCV RNA＞103copies/ml)的樣本中，有43例ALT結(jié)果異常，ALT異常率為78．1%（43/55）；按HCV RNA病毒載量將55例標(biāo)本分成107～108、106、105、103～104和＜103copies/ml 5組，分析HCV RNA含量與ALT結(jié)果間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)：HCV RNA含量呈陽性的樣本，其ALT異常率隨著HCV RNA含量的增高而升高，即呈正相關(guān)(r=0．96，P＜0．01)。

表1 不同抗HCV抗體區(qū)間值中HCV-RNA載量陽性率比較

表2 HCV RNA含量與ALT檢測結(jié)果分析

3 討論

丙型肝炎是丙型肝炎病毒RNA經(jīng)血液傳播的一種病毒感染性疾病，它發(fā)病率雖低于乙型肝炎，但其危害遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于乙型肝炎病毒感染。發(fā)病呈全球性流行，極易發(fā)展為慢性丙型肝炎，嚴(yán)重者會進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為肝硬化或肝癌，對患者生命安全造成嚴(yán)重威脅，是歐美及日本等國家終末期肝病的最主要原因。因此，控制丙型肝炎只能從傳染源和傳播途徑入手，早期準(zhǔn)確診斷和發(fā)現(xiàn)HCV感染者就是防控丙型肝炎傳染源、阻斷傳播途徑最為有效的手段[4]。

人體感染HCV后抗－HCV一般15個(gè)月內(nèi)可在病人血清中被檢測到[5]，HCV抗體主要用于流行病學(xué)調(diào)查、丙肝感染患者的診斷篩查。HCV－RNA是HCV復(fù)制活躍的一項(xiàng)可靠指標(biāo)，感染2周內(nèi)即可檢出[6]。HCV－R NA主要用于臨床丙肝確診以及治療效果評估指標(biāo)。目前臨床常聯(lián)合HCV抗體和丙肝病毒HCV－R NA定量檢測以明確是否感染了丙肝病毒及實(shí)施治療措施，HCV－R NA陽性(＞103copies/ ml）的患者可以直接作為HCV感染的有效證據(jù)，并且表明HCV病毒復(fù)制活躍具有一定傳染性[7]。HCV-R NA比HCV抗體出現(xiàn)的時(shí)間更早，可作為丙肝感染的早期診斷和篩查，HCV-R NA陰性可作為患者治療效果以及預(yù)后指標(biāo)，HCV-R NA陰性表明患者經(jīng)治療后病毒被清除，傳染性弱。本研究中118例丙肝抗體初篩陽性患者中，HCV RNA陽性率僅為為46.6%（55/118）可能主要的原因有：⑴由于自然界RNA降解酶存在導(dǎo)致HCV RNA降解而出現(xiàn)的假陰性；⑵患者采取過抗病毒治療等因素有關(guān)，血清中HCV-RNA載量未達(dá)到最低檢測量；⑶機(jī)體HCV病毒己被清除，HCV-RNA已為陰性，但HCV抗體持續(xù)存在一段時(shí)間[7-10]。綜合分析本研究對象中118例HCV抗體陽性樣本中不同HCV抗體檢測值在不同區(qū)HCV-RNA檢測陽性率不全相同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=62.745，P＜0.05），可能觀察對象處于抗病毒治療的患者，呈現(xiàn)HCV-RNA病毒載量檢測陽性率不一致的現(xiàn)象。ALT主要存在于肝細(xì)胞的線粒體以及細(xì)胞質(zhì)中，是肝細(xì)胞實(shí)質(zhì)損害一個(gè)主要指標(biāo)（參考值0～40IU/L），常聯(lián)合其他多種指標(biāo)用于肝功能臨床診斷評估[11，12]。

在實(shí)際工作中我們發(fā)現(xiàn)，CIA方法自動化程度更強(qiáng)，操作更加簡便，降低了操作人員感染的風(fēng)險(xiǎn)。HCV-RNA病毒載量的測定能更早期用于丙肝的診斷及抗病毒治療的療效判斷，化學(xué)發(fā)光法檢測血清HCV抗體診斷HCV與熒光PCR檢測方法均可能存在假陽性或假陰性情況。臨床實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)聯(lián)合HCV抗體及HCV-RNA病毒載量測定從可以降低丙肝感染的漏診，同時(shí)聯(lián)合ALT以反應(yīng)肝細(xì)胞實(shí)質(zhì)損害程度，為臨床治療丙肝提供有效的診療實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

[1]趙東巖，陳弟，劉春林，等.TRFIA、FQ-PCR方法聯(lián)合檢測乙肝標(biāo)志物的應(yīng)用探討[J].昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，35(10)：57-60.

[2]梁勇彪，莫定敢，覃海燕，等.FQ-PCR檢測HCV-RNA載量與ALT相關(guān)性探討[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2012，10(8)：59.

[3]Mohd Hanafiah K，Groeger J，F(xiàn)laxman AD，et al.Global epidemiology of hepatitis C virus infection：new estimates of age-specific antibody to HCV seroprevalence[J].Hepatology，2013，57(4)：1333-1342.

[4]孫軍紅.抗-HCV抗體檢測與熒光定量RT-PCR檢測在丙型肝炎診斷中的比較[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（7）：1562-1563.

[5]曾艷華.化學(xué)發(fā)光法檢測HCV抗體診斷丙型肝炎價(jià)值的Meta分析[J].中國循證醫(yī)學(xué)雜志，2014，14(6)：707-715.

[6]張學(xué)英，李勵，柴曉文，等.乙型肝炎病毒標(biāo)志物不同模式與HBV-DNA、PA、ADA及ALT濃度的相關(guān)性研究[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，11(6)：447-448.

[7]李文楷，丁波，魏容，等.聯(lián)合檢測血清標(biāo)志物、ALT和HBVDNA對乙型肝炎患者診療的臨床意義[J].四川醫(yī)學(xué)，2013，34(1)：154-156.

[8]Ponde RA.Enzyme-linked immunosorbent/chemiluminescence assays，recombinant immunoblot assays and nucleic acid tests in the diagnosis of HCV infection[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis，2013，32(8)：985-988.

[9]谷婭楠，朱鴻，程艷杰，等.丙型肝炎患者血清HCV-R NA載量、抗-HCV及ALT的相關(guān)性研究[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35 (4)：487-488.

[10]陳作芬，曹永平.丙肝患者治療前后HCV R NA與抗-HCV及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平的分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7(12)：1175-1177.

[11]彭澤軍.丙型肝炎患者血清中HCV抗體、HCV-R NA、ALT聯(lián)合檢測及臨床意義[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，29(6)：635-636.

[12]徐煒新，李峰，孫杰.抗原抗體聯(lián)合檢測在提高血液透析患者丙肝感染檢出率中的應(yīng)用[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，36(7)：920-922.

R512．6+3，R446．62，R446．11+2

A

1674－1129(2017)02－0236－03

10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．031

2016-10-19；

2016-12-23)