楊偉明，王小中，劉靜，呂嬌鳳

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，南昌330006)

Beckman Coulter AU2700全自動生化儀的性能驗(yàn)證

楊偉明，王小中，劉靜，呂嬌鳳

(南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，南昌330006)

目的對在Beckman Coulter AU2700全自動生化分析儀部分檢測項(xiàng)目丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、尿素（UREA）、總蛋白（TP）、氯（Cl-）的分析性能進(jìn)行驗(yàn)證，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。方法根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）及其他相關(guān)文獻(xiàn)對ALT、UREA、TP、Cl-的精密度、正確度、可報告范圍、生物參考區(qū)間等分析性能進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果各項(xiàng)目批內(nèi)精密度、日間精密度分別小于1/4 CLIA’88的允許總誤差（1/4Tea）、1/3 CLIA’88的允許總誤差（1/3Tea）；正確度偏倚小于1/2 CLIA’88的允許總誤差（1/2Tea）；ALT、UREA、TP、Cl-線性實(shí)驗(yàn)相關(guān)系數(shù)2≥0.975，以上項(xiàng)目在廠家規(guī)定的檢測范圍內(nèi)線性良好；生物參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果均在設(shè)定的范圍之內(nèi)。結(jié)論Beckman Coulter AU2700全自動生化分析儀所驗(yàn)證項(xiàng)目性能符合要求，該檢測系統(tǒng)能夠滿足臨床應(yīng)用。

全自動生化分析儀；檢測系統(tǒng)；性能驗(yàn)證

全自動生化分析儀是臨床檢驗(yàn)中經(jīng)常使用的重要儀器之一，通過對血液或體液的各種生化指標(biāo)進(jìn)行分析測定，為臨床疾病的診斷、治療提供可靠依據(jù)。然而，設(shè)備的檢測系統(tǒng)性能是否符合要求，對我們的檢驗(yàn)結(jié)果起著決定性作用?！夺t(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》（ISO 15189：2012，IDT）和《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床試驗(yàn)室管理方法》等也要求對全自動生化分析儀性能進(jìn)行驗(yàn)證。本文對在Beckman Coulter AU2700全自動生化分析儀的檢測項(xiàng)目丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、尿素（UREA）、總蛋白（TP）、氯（Cl-）的分析性能進(jìn)行驗(yàn)證，評價是否達(dá)到要求、能否滿足臨床應(yīng)用?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

1.1.1 儀器Beckman Coulter AU2700全自動生化分析儀

1.1.2 試劑質(zhì)控品由RANDOX公司提供，高值質(zhì)控品（批號：765UE），中值質(zhì)控品（批號：1005UN）；ALT、UREA、TP、Cl-項(xiàng)目均使用原裝配套試劑、校準(zhǔn)品，由Beckman Coulter公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)樣本⑴精密度實(shí)驗(yàn)樣本：2個水平RANDOX質(zhì)控血清，根據(jù)需要分管冷凍保存。⑵有證的參考物質(zhì)：ALT、UREA、TP、Cl-各一個水平，血清ALT和TP，證書編號分別為GBW(E)090593、GBW(E)090351，由北京市醫(yī)療器械檢驗(yàn)所提供；血清UREA，證書編號為GBW09174a，由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供證公司提供；血清Cl-，證書編號為GBW09152，由中國計量科學(xué)研究院提供。⑶能力驗(yàn)證（PT）定值樣品：國家衛(wèi)計委臨檢中心2016年第二次PT樣品，編號分別為201621、201622、201623、201624、201625。⑷分析測量范圍（AMR）樣本：收集接近于ALT、UREA、TP、Cl-項(xiàng)目試劑廠家提供的分析測量范圍上限（高濃度H）和下限（低濃度L）的足夠?qū)嶒?yàn)用量樣本備用。⑸臨床可報告范圍（CRR）樣本：選擇ALT、UREA、TP、Cl-項(xiàng)目在AMR內(nèi)的高值足夠?qū)嶒?yàn)用量樣本，根據(jù)需要用生理鹽水稀釋2倍、5倍、10倍不等備用。⑹生物參考區(qū)間驗(yàn)證樣本：選擇無溶血、脂血和黃疸的健康體檢者的新鮮血清樣品20份，男女各半。

1.3 方法

1.3.1 精密度驗(yàn)證批內(nèi)精密度：選擇高值與中值兩個水平的質(zhì)控血清作為評價樣本，在較短的時間內(nèi)及穩(wěn)定的條件下連續(xù)重復(fù)測定20次，記錄每次的測定結(jié)果并計算其均值（MEAN）、標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。日間精密度：每天做1次評價樣品，累積20次結(jié)果[1]，計算MEAN、SD和CV。以美國臨床實(shí)驗(yàn)室修正法規(guī)（CLIA’88）規(guī)定的TEa（ALT、UREA、TP、Cl-的Tea分別是20%、9%、10%、5%）為依據(jù)，批內(nèi)精密度＜1/4TEa，日間精密度＜1/ 3TEa，對精密度性能進(jìn)行驗(yàn)證。

1.3.2 正確度驗(yàn)證參照中國合格評定國家認(rèn)可委員會（CNAS）-CL38：2012《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床化學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說明》[2]及有關(guān)參考文獻(xiàn)[3]標(biāo)準(zhǔn)，對ALT、UREA、TP、Cl-項(xiàng)目進(jìn)行正確度驗(yàn)證，按以下2種方法進(jìn)行：⑴檢測ALT、UREA、TP、Cl-項(xiàng)目有證的參考物質(zhì)，每個項(xiàng)目重復(fù)測定3次，計算每個樣品重復(fù)測量的均值與參考物質(zhì)的靶值的相對偏倚；⑵檢測2016年國家衛(wèi)計委臨檢中心發(fā)放的EQA樣品5份，每個樣品重復(fù)測定3次，計算每個樣品重復(fù)測量的均值與靶值的相對偏倚；⑶正確度的質(zhì)量要求：ALT、UREA、TP、Cl-偏倚＜1/2Tea（偏倚分別＜10%、4.5%、5%、2.5%）判定正確度驗(yàn)證符合要求。

1.3.3 AMR驗(yàn)證按照參考文獻(xiàn)[3]，將ALT、UREA、TP、Cl-項(xiàng)目AMR驗(yàn)證低中值（L）和高值（H）樣本，分別按照5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L的關(guān)系配置成6個濃度梯度，每個濃度的樣本按順序測定三次，計算均值。將預(yù)期值(x)與測定值(y)進(jìn)行回歸分析，得到直線回歸方程y=bx+a。若b值在1±0.03范圍，相關(guān)系數(shù)r2≥0.975，a和0無顯著差異，接近于0，則可直接判斷分析測量范圍在實(shí)驗(yàn)已涉及濃度；如果上述任一條不滿足條件，則舍去高值或中值組數(shù)據(jù)，再做回歸統(tǒng)計分析，直至縮小分析范圍或重做，判斷符合要求。

1.3.4 CRR CRR上限通過最大稀釋度試驗(yàn)來驗(yàn)證[4，5]。在AMR范圍內(nèi)取一份高濃度（已知值）的病人樣本，用空白液或廠商推薦的稀釋液和最大稀釋度進(jìn)行系列稀釋，已知值的實(shí)驗(yàn)樣品在檢測系統(tǒng)上進(jìn)行檢測，每個濃度重復(fù)測定3次，獲得的結(jié)果均值為實(shí)測均值。已知值除以稀釋度為預(yù)期值，計算回收率=(實(shí)測均值/預(yù)期值)×100%和偏倚。判定標(biāo)準(zhǔn)：以110%≥回收率≥90%，且偏倚＜1/2Tea，最大稀釋度得到驗(yàn)證，AMR乘以最大稀釋度即為CRR上限，結(jié)合AMR和臨床需要確定日常工作該項(xiàng)目的最大稀釋度及CRR。

1.3.5 生物參考區(qū)間驗(yàn)證參照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[6]，進(jìn)行小樣本驗(yàn)證，選擇20例健康人員為實(shí)驗(yàn)對象，若參考區(qū)間按性別、年齡等分組，則每組至少20人，對項(xiàng)目的參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。判定標(biāo)準(zhǔn)：落在參考限外的測定值不超過2個標(biāo)本（10%），則該參考區(qū)間可使用；若3個或3個以上測定值超出，則需重新篩選20人，重復(fù)上述操作，同樣若不超過2個測定值超出該參考區(qū)間的則可以使用，參考區(qū)間驗(yàn)證通過。否則，應(yīng)考慮是否需要建立自己的參考區(qū)間。

1.3.6 統(tǒng)計學(xué)分析用Excel 2003辦公軟件和SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析。

表1 ALT、UREA、TP、Cl-的批內(nèi)精密度實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果及性能判斷

表2 ALT、UREA、TP、Cl-的日間精密度實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果及性能判斷

2 結(jié)果

2.1 精密度驗(yàn)證

2.1.1 批內(nèi)精密度連續(xù)測定中、高2個濃度水平質(zhì)控品，ALT、UREA、TP、Cl-的CV%均小于1/4Tea，符合要求，驗(yàn)證通過。結(jié)果見表1。

2.1.2 日間精密度測定中、高2個濃度水平質(zhì)控品，每天1次，連續(xù)測20d，記錄結(jié)果并進(jìn)行統(tǒng)計分析，ALT、UREA、TP、Cl-的CV%均小于1/3Tea，各項(xiàng)目測定結(jié)果均符合要求，驗(yàn)證通過。結(jié)果見表2。

2.2 正確度驗(yàn)證

2.2.1 檢測有證的參考物質(zhì)ALT、UREA、TP、Cl-各項(xiàng)目的正確度驗(yàn)證結(jié)果顯示偏倚均小于1/2Tea，符合要求，驗(yàn)證通過。結(jié)果見表3。

圖1 ALT測定值與預(yù)期值散點(diǎn)圖

圖2 UREA測定值與預(yù)期值散點(diǎn)圖

圖3 TP測定值與預(yù)期值散點(diǎn)圖

圖4 Cl-測定值與預(yù)期值散點(diǎn)圖

2.2.2 檢測PT樣品ALT、UREA、TP、Cl-各項(xiàng)目的正確度驗(yàn)證結(jié)果顯示偏倚均小于1/2Tea，符合要求，驗(yàn)證通過。結(jié)果見表4。

2.3 分析測量范圍ALT、UREA、TP、Cl-分別選擇低濃度和高濃度樣本各1份，分別按要求制備成6個實(shí)驗(yàn)樣品，按實(shí)驗(yàn)方法測量，記錄結(jié)果并繪制散點(diǎn)圖（分別見圖1～圖4），所有實(shí)驗(yàn)點(diǎn)呈明顯直線趨勢，建立直線回歸方程，r2≥0.975，斜率b均在0.97～1.03之間，接近于1，截距a與0均無顯著性差異（P均＞0.05），且6個測定值與預(yù)期值偏差均＜±10%，ALT、UREA、TP、Cl-的分析測量范圍驗(yàn)證通過，結(jié)果見表5。

2.4 CRR驗(yàn)證結(jié)果在AMR內(nèi)取高值血清樣本，進(jìn)行不同比例稀釋，檢測結(jié)果用稀釋回收率表示，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6，回收率均在90%~110%之間，偏差均＜1/2TEa，最大稀釋度得到驗(yàn)證，結(jié)合AMR和臨床需要確定日常工作該項(xiàng)目的最大稀釋度及CRR。

2.5 生物參考區(qū)間每個項(xiàng)目選擇不同年齡10名男性和10例女性共20例健康體檢者體檢測ALT、UREA、TP、Cl-，濃度分別為（7.50～40.00）U/L、(3.40～8.00)mmol/L、(67.50～78.10)g/L、（99.06～102.90）mmol/L，均落在需驗(yàn)證的的參考區(qū)間內(nèi)。ALT、UREA、TP、Cl-參考區(qū)間分別為（5.00～40.00）U/L、(2.90～8.20)mmol/L、(60.00～83.00)g/L、（96.0～108.0）mmol/L得到驗(yàn)證，結(jié)果顯示生物參考區(qū)間可以直接使用。

表3 有證參考物ALT、UREA、TP、TG、TBIL、Cl-的正確度實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果及性能判斷

表4 PT樣品ALT、UREA、TP、Cl-的正確度實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果及性能判斷

表5 ALT、UREA、TP、Cl-的AMR實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果

表6 ALT、UREA、TP、Cl-的稀釋回收實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果

3 討論

精密度是指在規(guī)定條件下，對同一或類似被測對象重復(fù)測量所得示值或測定值間的一致程度，反映了系統(tǒng)的隨機(jī)誤差。臨床上通常僅對標(biāo)本作一次檢測就發(fā)出報告，因此儀器的精密度性能非常重要，是評價檢驗(yàn)方法、儀器或試劑盒分析性能的首要指標(biāo)，同時也是保障檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的前提[7]。為了更好地檢出不穩(wěn)定的誤差，美國NCCLS EP-5A文件，CLIA'88能力驗(yàn)證分析質(zhì)量提出，當(dāng)批內(nèi)精密度小于1/4 CLIA'88，日間精密度小于1/3 CLIA'88時，可認(rèn)為它的隨機(jī)誤差屬于可接受的水平[8]。表1、表2結(jié)果表明，AU2700生化儀對4個檢測項(xiàng)目的高中值的批內(nèi)精密度為1.01%～2.96%和日間精密度為1.46%～5.10%，符合CLIA'88能力驗(yàn)證分析質(zhì)量要求，表明其具有良好的精密度，滿足性能評價要求。

正確度是指無窮次重復(fù)測量所得量值的平均值與一個參考量值間的一致程度[9，10]，用“偏倚”表示，反映了檢測系統(tǒng)的系統(tǒng)誤差[11]。EP15-A3[12]建議臨床實(shí)驗(yàn)室用定值參考物質(zhì)進(jìn)行正確度驗(yàn)證，這里的參考物質(zhì)是一個廣義的概念，包括了有證參考物質(zhì)、大型能力比對或室間質(zhì)評物質(zhì)等，臨床實(shí)驗(yàn)室對定值參考物質(zhì)進(jìn)行檢測，若檢測結(jié)果在允許誤差或不確定度范圍內(nèi)則正確度得到驗(yàn)證。我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[9]規(guī)定至少用2個測量濃度的定值參考物質(zhì)進(jìn)行試劑盒的正確度性能驗(yàn)證。參考EP15-A3和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，我們分別使用了有證的參考物質(zhì)和PT定值的5個樣品共6個測量濃度進(jìn)行正確度性能驗(yàn)證，濃度涵蓋分析測量范圍。使用有證參考物質(zhì)進(jìn)行正確度評價當(dāng)然是首選的方法，但在實(shí)際工作中，由于購買有證的參考物質(zhì)價格昂貴，尤其要購買多個濃度更是不易?？梢岳?個PT/EQA樣本的簡易方法進(jìn)行正確度驗(yàn)證[3]，只要參加PT的實(shí)驗(yàn)室數(shù)量足夠大，分析物冷凍保存條件下性能穩(wěn)定，此方法不失為一種簡便、經(jīng)濟(jì)、有效的方法。本研究表3、表4結(jié)果顯示，AU2700生化儀對3個檢測項(xiàng)目的偏倚均小于1/ 2Tea，說明正確度符合臨床要求。

可報告范圍包括AMR和CRR。AMR是指標(biāo)本不經(jīng)任何預(yù)處理，檢驗(yàn)程序所能給出準(zhǔn)確結(jié)果的范圍[9]。有時臨床上常出現(xiàn)超出AMR上限的結(jié)果，實(shí)驗(yàn)室需將標(biāo)本稀釋后重新測定，測定結(jié)乘以稀釋倍數(shù)，發(fā)出檢測報告，這就是臨床可報告范圍[13]。在本研究AMR實(shí)驗(yàn)中對系列濃度樣本進(jìn)行檢測，并對預(yù)期值和測定值回歸分析，r2均≥0.975，斜率b在0.97～1.03之間，接近于1，截距a與0無顯著性差異（P均＞0.05），計算每個樣品的稀釋回收率均在90%～110%，稀釋偏差均≤1/2TEa，AU2700生化儀在廠家規(guī)定的檢測范圍內(nèi)線性良好。在我們具體的臨床工作中，不但要檢測項(xiàng)目的AMR，也要結(jié)合臨床實(shí)際考慮CRR，目的是為了分析各稀釋濃度的線性關(guān)系，確定最高稀釋倍數(shù)，從而確保為臨床發(fā)出準(zhǔn)確的檢驗(yàn)報告，一般只是對于那些CRR大于AMR的檢測項(xiàng)目才需要進(jìn)行驗(yàn)證[14，15]。表7實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所研究項(xiàng)目的稀釋回收率均在90%~110%之間，偏差均＜1/2TEa，最大稀釋倍數(shù)得到驗(yàn)證，說明在一定范圍內(nèi)的標(biāo)本稀釋檢測結(jié)果可靠，可滿足臨床要求。20例健康人血清濃度均在設(shè)定的參考區(qū)間范圍內(nèi)，可以認(rèn)為所驗(yàn)證的參考區(qū)間適用于本實(shí)驗(yàn)室。

綜上所述，本研究參考試劑廠家、CLSI文件以及國內(nèi)關(guān)于定量檢測分析系統(tǒng)性能驗(yàn)證的相關(guān)報道，評價了在Beckman coulter AU2700全自動生化分析儀上檢測ALT、UREA、TP、Cl-的性能，基本與廠家聲明的性能一致，檢測系統(tǒng)的性能通過驗(yàn)證，能夠滿足臨床需要，可以應(yīng)用于日常臨床檢驗(yàn)工作。

[1]馮仁豐.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ).第2版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，2007：85-91.

[2]中國合格評定國家認(rèn)可委員會.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床化學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說明（CNAS-CL38）[S].2012-9-13.

[3]張秀明，闞麗娟.淺析定量檢驗(yàn)程序分析性能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，38(6)：428-430.

[4]李婷婷，寧芬，陸雅春，等.日立7600全自動生化分析儀檢測系統(tǒng)性能驗(yàn)證[J].安徽醫(yī)學(xué)，2013，34(11)：1679-1682.

[5]Zhang XM，Wang WJ，Wen DM，et al.Analytical performances and heart failure research of the BNP and NT proBNP assays on the cobas e601 and ADVIA centaur[J].Clin Lab，2013，59：109-126.

[6]中華人民共和國衛(wèi)生部.臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的的制定(WS/T花402-2012)[S]：2012-12-24.

[7]吳宗勇，賈德強(qiáng)，李佳，等.自動生化分析儀的能力驗(yàn)證[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，10(7)：524-525.

[8]陶亞，廖經(jīng)忠，孫謙，等.Beckman Coulter AU 5821全自動生化分析儀性能評價[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2014，24(29)：91-97.

[9]王治國.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量控制技術(shù)[M].第2版.北京：人民衛(wèi)生出版.2010：41-46.

[10]中華人民共和國衛(wèi)生和計劃生育委員會.臨床實(shí)驗(yàn)室對商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證(WS/T 420-2013)[S]：2013-07-16.

[11]醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則：ISO 15189：2007[S].

[12]CLSI.User verification of precision and estimation of bias；approved guideline-third edition(EP15-A3)[s].2014.

[13]徐江霞，龔淑琪，萬振華，等.新型乙肝定量PCR試劑檢測性能驗(yàn)證[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2016，34(2)：149-151.

[14]壽爽，徐勝，呂潔，等.邁瑞B(yǎng)C-6900全自動血細(xì)胞分析儀血液模式的性能驗(yàn)證和評價[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2015，33(3)：310-316.

[15]陳麗娟，羅俐鶯，魏權(quán)，等.尿液有形成分全自動分析儀(UF-1000i)性能評價[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2015，33(4)：435-475.

R446.11+2

A

1674-1129(2017)02-0222-04

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.02.026

2016-10-19；

2016-12-25)

國家自然科學(xué)基金（81560033）

呂嬌鳳，主任技師，Email：2111014815@qq.com