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        Beckman Coulter AU2700全自動生化儀的性能驗(yàn)證

        2017-04-20 08:52:47楊偉明王小中劉靜呂嬌鳳
        關(guān)鍵詞:正確度精密度分析儀

        楊偉明,王小中,劉靜,呂嬌鳳

        (南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,南昌330006)

        Beckman Coulter AU2700全自動生化儀的性能驗(yàn)證

        楊偉明,王小中,劉靜,呂嬌鳳

        (南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科,南昌330006)

        目的對在Beckman Coulter AU2700全自動生化分析儀部分檢測項(xiàng)目丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、尿素(UREA)、總蛋白(TP)、氯(Cl-)的分析性能進(jìn)行驗(yàn)證,保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。方法根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)及其他相關(guān)文獻(xiàn)對ALT、UREA、TP、Cl-的精密度、正確度、可報告范圍、生物參考區(qū)間等分析性能進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果各項(xiàng)目批內(nèi)精密度、日間精密度分別小于1/4 CLIA’88的允許總誤差(1/4Tea)、1/3 CLIA’88的允許總誤差(1/3Tea);正確度偏倚小于1/2 CLIA’88的允許總誤差(1/2Tea);ALT、UREA、TP、Cl-線性實(shí)驗(yàn)相關(guān)系數(shù)2≥0.975,以上項(xiàng)目在廠家規(guī)定的檢測范圍內(nèi)線性良好;生物參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果均在設(shè)定的范圍之內(nèi)。結(jié)論Beckman Coulter AU2700全自動生化分析儀所驗(yàn)證項(xiàng)目性能符合要求,該檢測系統(tǒng)能夠滿足臨床應(yīng)用。

        全自動生化分析儀;檢測系統(tǒng);性能驗(yàn)證

        全自動生化分析儀是臨床檢驗(yàn)中經(jīng)常使用的重要儀器之一,通過對血液或體液的各種生化指標(biāo)進(jìn)行分析測定,為臨床疾病的診斷、治療提供可靠依據(jù)。然而,設(shè)備的檢測系統(tǒng)性能是否符合要求,對我們的檢驗(yàn)結(jié)果起著決定性作用?!夺t(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》(ISO 15189:2012,IDT)和《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床試驗(yàn)室管理方法》等也要求對全自動生化分析儀性能進(jìn)行驗(yàn)證。本文對在Beckman Coulter AU2700全自動生化分析儀的檢測項(xiàng)目丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、尿素(UREA)、總蛋白(TP)、氯(Cl-)的分析性能進(jìn)行驗(yàn)證,評價是否達(dá)到要求、能否滿足臨床應(yīng)用?,F(xiàn)報道如下。

        1 材料與方法

        1.1 儀器及試劑

        1.1.1 儀器Beckman Coulter AU2700全自動生化分析儀

        1.1.2 試劑質(zhì)控品由RANDOX公司提供,高值質(zhì)控品(批號:765UE),中值質(zhì)控品(批號:1005UN);ALT、UREA、TP、Cl-項(xiàng)目均使用原裝配套試劑、校準(zhǔn)品,由Beckman Coulter公司提供。

        1.2 實(shí)驗(yàn)樣本⑴精密度實(shí)驗(yàn)樣本:2個水平RANDOX質(zhì)控血清,根據(jù)需要分管冷凍保存。⑵有證的參考物質(zhì):ALT、UREA、TP、Cl-各一個水平,血清ALT和TP,證書編號分別為GBW(E)090593、GBW(E)090351,由北京市醫(yī)療器械檢驗(yàn)所提供;血清UREA,證書編號為GBW09174a,由衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供證公司提供;血清Cl-,證書編號為GBW09152,由中國計量科學(xué)研究院提供。⑶能力驗(yàn)證(PT)定值樣品:國家衛(wèi)計委臨檢中心2016年第二次PT樣品,編號分別為201621、201622、201623、201624、201625。⑷分析測量范圍(AMR)樣本:收集接近于ALT、UREA、TP、Cl-項(xiàng)目試劑廠家提供的分析測量范圍上限(高濃度H)和下限(低濃度L)的足夠?qū)嶒?yàn)用量樣本備用。⑸臨床可報告范圍(CRR)樣本:選擇ALT、UREA、TP、Cl-項(xiàng)目在AMR內(nèi)的高值足夠?qū)嶒?yàn)用量樣本,根據(jù)需要用生理鹽水稀釋2倍、5倍、10倍不等備用。⑹生物參考區(qū)間驗(yàn)證樣本:選擇無溶血、脂血和黃疸的健康體檢者的新鮮血清樣品20份,男女各半。

        1.3 方法

        1.3.1 精密度驗(yàn)證批內(nèi)精密度:選擇高值與中值兩個水平的質(zhì)控血清作為評價樣本,在較短的時間內(nèi)及穩(wěn)定的條件下連續(xù)重復(fù)測定20次,記錄每次的測定結(jié)果并計算其均值(MEAN)、標(biāo)準(zhǔn)差(SD)和變異系數(shù)(CV)。日間精密度:每天做1次評價樣品,累積20次結(jié)果[1],計算MEAN、SD和CV。以美國臨床實(shí)驗(yàn)室修正法規(guī)(CLIA’88)規(guī)定的TEa(ALT、UREA、TP、Cl-的Tea分別是20%、9%、10%、5%)為依據(jù),批內(nèi)精密度<1/4TEa,日間精密度<1/ 3TEa,對精密度性能進(jìn)行驗(yàn)證。

        1.3.2 正確度驗(yàn)證參照中國合格評定國家認(rèn)可委員會(CNAS)-CL38:2012《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床化學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說明》[2]及有關(guān)參考文獻(xiàn)[3]標(biāo)準(zhǔn),對ALT、UREA、TP、Cl-項(xiàng)目進(jìn)行正確度驗(yàn)證,按以下2種方法進(jìn)行:⑴檢測ALT、UREA、TP、Cl-項(xiàng)目有證的參考物質(zhì),每個項(xiàng)目重復(fù)測定3次,計算每個樣品重復(fù)測量的均值與參考物質(zhì)的靶值的相對偏倚;⑵檢測2016年國家衛(wèi)計委臨檢中心發(fā)放的EQA樣品5份,每個樣品重復(fù)測定3次,計算每個樣品重復(fù)測量的均值與靶值的相對偏倚;⑶正確度的質(zhì)量要求:ALT、UREA、TP、Cl-偏倚<1/2Tea(偏倚分別<10%、4.5%、5%、2.5%)判定正確度驗(yàn)證符合要求。

        1.3.3 AMR驗(yàn)證按照參考文獻(xiàn)[3],將ALT、UREA、TP、Cl-項(xiàng)目AMR驗(yàn)證低中值(L)和高值(H)樣本,分別按照5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L的關(guān)系配置成6個濃度梯度,每個濃度的樣本按順序測定三次,計算均值。將預(yù)期值(x)與測定值(y)進(jìn)行回歸分析,得到直線回歸方程y=bx+a。若b值在1±0.03范圍,相關(guān)系數(shù)r2≥0.975,a和0無顯著差異,接近于0,則可直接判斷分析測量范圍在實(shí)驗(yàn)已涉及濃度;如果上述任一條不滿足條件,則舍去高值或中值組數(shù)據(jù),再做回歸統(tǒng)計分析,直至縮小分析范圍或重做,判斷符合要求。

        1.3.4 CRR CRR上限通過最大稀釋度試驗(yàn)來驗(yàn)證[4,5]。在AMR范圍內(nèi)取一份高濃度(已知值)的病人樣本,用空白液或廠商推薦的稀釋液和最大稀釋度進(jìn)行系列稀釋,已知值的實(shí)驗(yàn)樣品在檢測系統(tǒng)上進(jìn)行檢測,每個濃度重復(fù)測定3次,獲得的結(jié)果均值為實(shí)測均值。已知值除以稀釋度為預(yù)期值,計算回收率=(實(shí)測均值/預(yù)期值)×100%和偏倚。判定標(biāo)準(zhǔn):以110%≥回收率≥90%,且偏倚<1/2Tea,最大稀釋度得到驗(yàn)證,AMR乘以最大稀釋度即為CRR上限,結(jié)合AMR和臨床需要確定日常工作該項(xiàng)目的最大稀釋度及CRR。

        1.3.5 生物參考區(qū)間驗(yàn)證參照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[6],進(jìn)行小樣本驗(yàn)證,選擇20例健康人員為實(shí)驗(yàn)對象,若參考區(qū)間按性別、年齡等分組,則每組至少20人,對項(xiàng)目的參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。判定標(biāo)準(zhǔn):落在參考限外的測定值不超過2個標(biāo)本(10%),則該參考區(qū)間可使用;若3個或3個以上測定值超出,則需重新篩選20人,重復(fù)上述操作,同樣若不超過2個測定值超出該參考區(qū)間的則可以使用,參考區(qū)間驗(yàn)證通過。否則,應(yīng)考慮是否需要建立自己的參考區(qū)間。

        1.3.6 統(tǒng)計學(xué)分析用Excel 2003辦公軟件和SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析。

        表1 ALT、UREA、TP、Cl-的批內(nèi)精密度實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果及性能判斷

        表2 ALT、UREA、TP、Cl-的日間精密度實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果及性能判斷

        2 結(jié)果

        2.1 精密度驗(yàn)證

        2.1.1 批內(nèi)精密度連續(xù)測定中、高2個濃度水平質(zhì)控品,ALT、UREA、TP、Cl-的CV%均小于1/4Tea,符合要求,驗(yàn)證通過。結(jié)果見表1。

        2.1.2 日間精密度測定中、高2個濃度水平質(zhì)控品,每天1次,連續(xù)測20d,記錄結(jié)果并進(jìn)行統(tǒng)計分析,ALT、UREA、TP、Cl-的CV%均小于1/3Tea,各項(xiàng)目測定結(jié)果均符合要求,驗(yàn)證通過。結(jié)果見表2。

        2.2 正確度驗(yàn)證

        2.2.1 檢測有證的參考物質(zhì)ALT、UREA、TP、Cl-各項(xiàng)目的正確度驗(yàn)證結(jié)果顯示偏倚均小于1/2Tea,符合要求,驗(yàn)證通過。結(jié)果見表3。

        圖1 ALT測定值與預(yù)期值散點(diǎn)圖

        圖2 UREA測定值與預(yù)期值散點(diǎn)圖

        圖3 TP測定值與預(yù)期值散點(diǎn)圖

        圖4 Cl-測定值與預(yù)期值散點(diǎn)圖

        2.2.2 檢測PT樣品ALT、UREA、TP、Cl-各項(xiàng)目的正確度驗(yàn)證結(jié)果顯示偏倚均小于1/2Tea,符合要求,驗(yàn)證通過。結(jié)果見表4。

        2.3 分析測量范圍ALT、UREA、TP、Cl-分別選擇低濃度和高濃度樣本各1份,分別按要求制備成6個實(shí)驗(yàn)樣品,按實(shí)驗(yàn)方法測量,記錄結(jié)果并繪制散點(diǎn)圖(分別見圖1~圖4),所有實(shí)驗(yàn)點(diǎn)呈明顯直線趨勢,建立直線回歸方程,r2≥0.975,斜率b均在0.97~1.03之間,接近于1,截距a與0均無顯著性差異(P均>0.05),且6個測定值與預(yù)期值偏差均<±10%,ALT、UREA、TP、Cl-的分析測量范圍驗(yàn)證通過,結(jié)果見表5。

        2.4 CRR驗(yàn)證結(jié)果在AMR內(nèi)取高值血清樣本,進(jìn)行不同比例稀釋,檢測結(jié)果用稀釋回收率表示,實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6,回收率均在90%~110%之間,偏差均<1/2TEa,最大稀釋度得到驗(yàn)證,結(jié)合AMR和臨床需要確定日常工作該項(xiàng)目的最大稀釋度及CRR。

        2.5 生物參考區(qū)間每個項(xiàng)目選擇不同年齡10名男性和10例女性共20例健康體檢者體檢測ALT、UREA、TP、Cl-,濃度分別為(7.50~40.00)U/L、(3.40~8.00)mmol/L、(67.50~78.10)g/L、(99.06~102.90)mmol/L,均落在需驗(yàn)證的的參考區(qū)間內(nèi)。ALT、UREA、TP、Cl-參考區(qū)間分別為(5.00~40.00)U/L、(2.90~8.20)mmol/L、(60.00~83.00)g/L、(96.0~108.0)mmol/L得到驗(yàn)證,結(jié)果顯示生物參考區(qū)間可以直接使用。

        表3 有證參考物ALT、UREA、TP、TG、TBIL、Cl-的正確度實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果及性能判斷

        表4 PT樣品ALT、UREA、TP、Cl-的正確度實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果及性能判斷

        表5 ALT、UREA、TP、Cl-的AMR實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果

        表6 ALT、UREA、TP、Cl-的稀釋回收實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計結(jié)果

        3 討論

        精密度是指在規(guī)定條件下,對同一或類似被測對象重復(fù)測量所得示值或測定值間的一致程度,反映了系統(tǒng)的隨機(jī)誤差。臨床上通常僅對標(biāo)本作一次檢測就發(fā)出報告,因此儀器的精密度性能非常重要,是評價檢驗(yàn)方法、儀器或試劑盒分析性能的首要指標(biāo),同時也是保障檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確的前提[7]。為了更好地檢出不穩(wěn)定的誤差,美國NCCLS EP-5A文件,CLIA'88能力驗(yàn)證分析質(zhì)量提出,當(dāng)批內(nèi)精密度小于1/4 CLIA'88,日間精密度小于1/3 CLIA'88時,可認(rèn)為它的隨機(jī)誤差屬于可接受的水平[8]。表1、表2結(jié)果表明,AU2700生化儀對4個檢測項(xiàng)目的高中值的批內(nèi)精密度為1.01%~2.96%和日間精密度為1.46%~5.10%,符合CLIA'88能力驗(yàn)證分析質(zhì)量要求,表明其具有良好的精密度,滿足性能評價要求。

        正確度是指無窮次重復(fù)測量所得量值的平均值與一個參考量值間的一致程度[9,10],用“偏倚”表示,反映了檢測系統(tǒng)的系統(tǒng)誤差[11]。EP15-A3[12]建議臨床實(shí)驗(yàn)室用定值參考物質(zhì)進(jìn)行正確度驗(yàn)證,這里的參考物質(zhì)是一個廣義的概念,包括了有證參考物質(zhì)、大型能力比對或室間質(zhì)評物質(zhì)等,臨床實(shí)驗(yàn)室對定值參考物質(zhì)進(jìn)行檢測,若檢測結(jié)果在允許誤差或不確定度范圍內(nèi)則正確度得到驗(yàn)證。我國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[9]規(guī)定至少用2個測量濃度的定值參考物質(zhì)進(jìn)行試劑盒的正確度性能驗(yàn)證。參考EP15-A3和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),我們分別使用了有證的參考物質(zhì)和PT定值的5個樣品共6個測量濃度進(jìn)行正確度性能驗(yàn)證,濃度涵蓋分析測量范圍。使用有證參考物質(zhì)進(jìn)行正確度評價當(dāng)然是首選的方法,但在實(shí)際工作中,由于購買有證的參考物質(zhì)價格昂貴,尤其要購買多個濃度更是不易??梢岳?個PT/EQA樣本的簡易方法進(jìn)行正確度驗(yàn)證[3],只要參加PT的實(shí)驗(yàn)室數(shù)量足夠大,分析物冷凍保存條件下性能穩(wěn)定,此方法不失為一種簡便、經(jīng)濟(jì)、有效的方法。本研究表3、表4結(jié)果顯示,AU2700生化儀對3個檢測項(xiàng)目的偏倚均小于1/ 2Tea,說明正確度符合臨床要求。

        可報告范圍包括AMR和CRR。AMR是指標(biāo)本不經(jīng)任何預(yù)處理,檢驗(yàn)程序所能給出準(zhǔn)確結(jié)果的范圍[9]。有時臨床上常出現(xiàn)超出AMR上限的結(jié)果,實(shí)驗(yàn)室需將標(biāo)本稀釋后重新測定,測定結(jié)乘以稀釋倍數(shù),發(fā)出檢測報告,這就是臨床可報告范圍[13]。在本研究AMR實(shí)驗(yàn)中對系列濃度樣本進(jìn)行檢測,并對預(yù)期值和測定值回歸分析,r2均≥0.975,斜率b在0.97~1.03之間,接近于1,截距a與0無顯著性差異(P均>0.05),計算每個樣品的稀釋回收率均在90%~110%,稀釋偏差均≤1/2TEa,AU2700生化儀在廠家規(guī)定的檢測范圍內(nèi)線性良好。在我們具體的臨床工作中,不但要檢測項(xiàng)目的AMR,也要結(jié)合臨床實(shí)際考慮CRR,目的是為了分析各稀釋濃度的線性關(guān)系,確定最高稀釋倍數(shù),從而確保為臨床發(fā)出準(zhǔn)確的檢驗(yàn)報告,一般只是對于那些CRR大于AMR的檢測項(xiàng)目才需要進(jìn)行驗(yàn)證[14,15]。表7實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,所研究項(xiàng)目的稀釋回收率均在90%~110%之間,偏差均<1/2TEa,最大稀釋倍數(shù)得到驗(yàn)證,說明在一定范圍內(nèi)的標(biāo)本稀釋檢測結(jié)果可靠,可滿足臨床要求。20例健康人血清濃度均在設(shè)定的參考區(qū)間范圍內(nèi),可以認(rèn)為所驗(yàn)證的參考區(qū)間適用于本實(shí)驗(yàn)室。

        綜上所述,本研究參考試劑廠家、CLSI文件以及國內(nèi)關(guān)于定量檢測分析系統(tǒng)性能驗(yàn)證的相關(guān)報道,評價了在Beckman coulter AU2700全自動生化分析儀上檢測ALT、UREA、TP、Cl-的性能,基本與廠家聲明的性能一致,檢測系統(tǒng)的性能通過驗(yàn)證,能夠滿足臨床需要,可以應(yīng)用于日常臨床檢驗(yàn)工作。

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        R446.11+2

        A

        1674-1129(2017)02-0222-04

        10.3969/j.issn.1674-1129.2017.02.026

        2016-10-19;

        2016-12-25)

        國家自然科學(xué)基金(81560033)

        呂嬌鳳,主任技師,Email:2111014815@qq.com

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