吳瓊，劉昭貴，王小中

(1、南昌大學第二附屬醫(yī)院檢驗科，江西南昌330006；2、贛州市南康區(qū)婦幼保健院，江西南康341400)

惡性血液病患者化療前后淋巴細胞亞群分析

吳瓊1，劉昭貴2，王小中1

(1、南昌大學第二附屬醫(yī)院檢驗科，江西南昌330006；2、贛州市南康區(qū)婦幼保健院，江西南康341400)

目的探討惡性血液病患者化療前后TBNK淋巴細胞亞群檢測的臨床意義。方法采用流式細胞儀對兩組患者進行外周血TBNK淋巴細胞亞群檢測，分析化療前后的變化，觀察組患者的免疫功能變化及其與病情進展之間的聯(lián)系和病情的變化及預后。結果分析發(fā)現，觀察組患者的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD16+56+指標均低于對照組，且急性患者的CD4+/CD8+最低為（0.97±0.32）。隨著病情的緩解，指標都在升高并恢復至正常水平，緩解后各項指標和對照組比較，并無顯著差異，無統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。從觀察組的40例患者治療前后的TBNK淋巴細胞比較，治療后的惡性血液病患者CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+、CD16+56+指標有明顯的提高，前后差異顯著有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結論化療前，惡性血液病患者的TBNK各項指標異常，化療后得到有效的緩解，表明通過檢測TBNK淋巴細胞亞群有助于了解患者的免疫功能和病情的變化情況，值得推廣應用。

惡性血液?。换?；TBNK淋巴細胞亞群

惡性血液病是一類原發(fā)于造血系統(tǒng)的重大疾病，在所有惡性腫瘤發(fā)病率排第6位，嚴重威脅著人類健康[1]。目前惡性血液病的主要治療手段是化療，但化療藥物通?！皵澄也环帧?，在殺死病變細胞的同時，也會殺傷人體正常免疫細胞。感染是惡性血液病患者死亡的重要原因，研究表明[2]：化療會對機體的免疫系統(tǒng)產生損害，導致患者免疫力下降，增加其發(fā)生感染的機率。如何在化療、免疫調節(jié)劑應用和預防感染三者中找到一個平衡點，對患者進行恰如其分的治療，是臨床工作者經常碰到的問題，這需要臨床醫(yī)生確切地掌握每個患者的免疫情況。本研究旨在通過對TBNK淋巴細胞亞群的檢測，了解患者的免疫功能變化及其病情進展之間的聯(lián)系，并為臨床醫(yī)生提供重要的預后信息，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象觀察組選擇2014年3月至2015年3月我院接受診治的惡性血液初治病患者共40例，男27例，女13例，年齡20~65歲，平均年齡35.22±2.1歲。均根據MICM確診為急慢性白血病，其中，急性白血病22例，慢性白血病5例、惡性淋巴瘤9例、多發(fā)性骨髓瘤4例。對照組選擇同時期到我院健康體檢者30例，其中，男16例，女14例，年齡22~67歲，平均年齡35.31±2.3歲。所有病例診斷均符合血液病診斷及療效標準[3]，兩組的年齡、性別等一般資料的差異，均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 儀器和試劑BD Multitest IMK試劑盒：內含兩瓶試劑，一瓶是multitest CD3-FITC/CD8-PE/ CD45-Percp/CD4-APC（克隆號：SK7，SK1，2D1，SK3）。一瓶是multitest CD3-FITC/CD16+56-PE/ CD45-Percp/CD19-APC（克隆號：SK7，B73.1，NCAM16.2，2D1，SJ25C1）。溶血素為BD FACS Lysing Solution；采用BD FACSCalibur流式細胞儀檢測，BD MultiSET軟件分析數據。以上試劑及儀器均由美國BD公司提供。

1.3 方法檢測時間和次數：惡性血液病患者分別采用DA、DVP、CHOP、COMP等方案治療，21d為一周期。所有病例及正常對照組均空腹抽晨血，檢測惡性血液病患者治療前、有效緩解、未緩解、化療緩解后鞏固治療各階段及正常人的外周血分別3次測定TBNK淋巴細胞亞群。

標本收集：⑴收集正常人外周血和各類惡性血液病初治患者外周血，無菌條件下采集以EDTA-K2抗凝2ml；⑵收集化療有效緩解的患者與未能緩解患者化療前后外周血，無菌條件下采集以EDTA-K2抗凝2ml；⑶收集化療緩解后各類惡性血液病患者鞏固治療各階段外周血，無菌條件下采集以EDTA-K2抗凝2ml。

流式細胞儀檢測：取上樣管2支，各加入EDTA-K2抗凝血100μl，分別加入熒光標記的抗體20μl，振蕩混勻后避光孵育20min，加入2ml溶血素，振蕩混勻，溶血10min，離心5min，用0.1mol/L pH7.0 PBS洗滌2遍，再加入500μl的PBS重懸細胞，上機檢測。打開MultiSET軟件，用門圈出淋巴細胞群，計數10000個細胞，檢測淋巴細胞中各標記細胞的百分率。

1.4 統(tǒng)計學分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件對數據進行分析和處理，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，檢測數據采用配對t檢驗。計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者外周血TBNK淋巴細胞亞群治療前后的檢測變化比較從觀察組的40例患者治療前后的TBNK淋巴細胞比較，治療后的惡性血液病患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD16+56+指標有明顯的提高，前后差異顯著有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），具體數據見表1。

2.2 惡性血液病患者和健康人群TBNK淋巴細胞分布特點觀察組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD16+56+指標均低于對照組，且急性患者的CD4+/CD8+最低為（0.97±0.32）。隨著病情的緩解，指標都在升高并恢復至正常水平，緩解后各項指標和對照組比較，并無顯著差異，無統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表1 兩組患者外周血TBNK淋巴細胞亞群治療前后的檢測變化比較（x±s）

3 討論

目前最常用的檢測淋巴細胞亞群，包括T淋巴細胞（CD3+）、B淋巴細胞（CD19+）、NK細胞（CD16+56）、輔助性T淋巴細胞（CD3+CD4+）、抑制性T淋巴細胞（CD3+CD8+）[4]。CD4+細胞可協(xié)助B細胞分泌抗體和調節(jié)其他T細胞的免疫應答，能夠識別血液腫瘤細胞分泌的可溶性抗原，釋放IL-2，IFN-γ，IL-4等細胞因子，激活巨噬細胞和NK細胞，促進B淋巴細胞活化和抗體的形成，從而起到抗腫瘤作用[5]；CD8+細胞常表現細胞毒活性，是主要的細胞毒效應細胞[6]；NK細胞是機體防御腫瘤的天然屏障，腫瘤細胞能被它直接或者分泌出細胞因子而殺傷，腫瘤發(fā)展和發(fā)生轉移的原因往往是因為其活性的降低[7]。分泌抗體和介導體液免疫應答是B淋巴細胞的主要功能[8]。活化的B淋巴細胞可以分泌抗原，誘導T細胞免疫和巨噬細胞補體系統(tǒng)一起殺死腫瘤細胞[9]。

胸腺肽是臨床上應用很廣的一種免疫調節(jié)劑，能誘導T細胞的分化成熟，增加細胞因子的生成和增強B細胞的抗體應答，起到維持機體免疫平衡，提高機體抵抗疾病的能力[10，11]。已有報導證實[12]：化療的同時使用胸腺肽可以保護增強免疫細胞的活性，保證化療的如期進行，還能調動提高機體免疫活性細胞達到機體免疫功能良性循環(huán)。

正常情況下機體免疫狀態(tài)的維持，靠各種免疫細胞之間相互作用，使各細胞的指標達到一種穩(wěn)定的狀態(tài)[13]。近年的相關研究表明[14]，Th（輔助性T淋巴細胞）及Ts（抑制性T淋巴細胞）的平衡是維持機體免疫內環(huán)境穩(wěn)定的一個中心環(huán)節(jié)，其比值可直接反映機體細胞免疫功能狀態(tài)，當Th/Ts比值很低時，機體細胞免疫處于受抑制的狀態(tài)，增加機體發(fā)生感染的概率[4]，同時也預示著患者的預后較差，容易發(fā)生腫瘤轉移[15]。

本次研究證明，惡性血液病患者TBNK細胞比值及其功能和正常的健康人群相比更低，如與免疫功能有關的CD3+CD8+指標，其功能低下會導致腫瘤的持續(xù)生長；CD4+、CD16+56+細胞在體內抗瘤免疫中具有重要作用。經化療后可以改善CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD16+56+各項指標的比值，緩解后免疫功能恢復到正常水平。

綜上所述，治療前的惡性血液病患者和治療后的惡性血液病患者TBNK淋巴細胞的比值有明顯差異，檢測TBNK淋巴細胞亞群的比值，對評價治療后的療效、患者的免疫功能變化及其與病情進展之間的聯(lián)系和預后方面有著一定的臨床價值，值得廣為應用。

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R446.62，R733.7

A

1674-1129(2017)02-0183-03

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2016-12-29；

2017-03-15)

江西省衛(wèi)計委科技計劃，編號：20151649

吳瓊，女，1984年生，碩士，主管技師，流式細胞術。

王小中，男，1973年生，博士，主任技師，教授，主要從事臨床檢驗診斷學。