石賀芹，張聰恪

(1、平頂山平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院，河南平頂山467000；2、河南省疾病預(yù)防控制中心，河南鄭州450016)

·實(shí)驗(yàn)研究·

西洋參袋泡茶增強(qiáng)小鼠免疫力功能的實(shí)驗(yàn)研究

石賀芹1，張聰恪2

(1、平頂山平煤神馬醫(yī)療集團(tuán)總醫(yī)院，河南平頂山467000；2、河南省疾病預(yù)防控制中心，河南鄭州450016)

目的探討西洋參袋泡茶對小鼠免疫功能的影響。方法將144只BALB/C雄性小鼠按體重分層隨機(jī)分為4組，分別是低、中、高劑量組和對照組，前3組分別給予0．84g/kg BW、1．67g/kg BW、5．01g/kg BW西洋參袋泡茶受試液，對照組用蒸餾水，每天上午灌胃1次，30d后分組檢測細(xì)胞免疫指標(biāo)：臟器/體重比、脾淋巴細(xì)胞增殖能力、24h足拓腫脹度；體液免疫指標(biāo)：溶血空斑數(shù)、半數(shù)溶血值（HC50）；非特異性免疫指標(biāo)：雞紅細(xì)胞吞噬率與吞噬指數(shù)、NK細(xì)胞活性及碳廓清能力。結(jié)果中、高劑量西洋參袋泡茶可使小鼠24h足拓腫脹度增大，提高小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力、脾淋巴細(xì)胞增殖能力及清除碳廓清能力，增強(qiáng)NK細(xì)胞活性(P＜0．05)；高劑量西洋參袋泡茶促進(jìn)抗體和血清凝血素的生成(P＜0．05)；各劑量組對免疫器官/體重比均無明顯影響(P＞0．05)。結(jié)論西洋參袋泡茶能不同程度提高免疫學(xué)指標(biāo)，對正常小鼠免疫功能具有增強(qiáng)作用。

西洋參袋泡茶；BALB/C小鼠；免疫功能

西洋參為五加科植物（拉丁名Panax quinqueoliums）的干燥根，藥食同源，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、清肺腎、涼心脾、生津止渴等功效。其功效成分為西洋參人參皂苷、多糖、揮發(fā)油、甾醇、氨基酸等化合物和微量元素[1－3]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，西洋參活性成分總皂甙具有增強(qiáng)免疫力、改善心腦血管、抗疲勞等作用[4－7]。為驗(yàn)證其對機(jī)體是否具有免疫調(diào)節(jié)功能，作者以BALB/C小鼠為實(shí)驗(yàn)對象，進(jìn)行了多種免疫學(xué)試驗(yàn)，包含非特異性吞噬功能、細(xì)胞免疫及體液免疫指標(biāo)，旨在探討西洋參袋泡茶對正常小鼠免疫功能的作用。

1 材料與方法

1．1樣品及其制備西洋參袋泡茶(由天津某有限公司提供），有效成分為西洋參總皂甙，含量為697mg/100g，規(guī)格為10g/袋，每日一袋。樣品提取方法：取100g西洋參袋泡茶加1000ml蒸餾水于80℃～90℃浸泡30min，提取兩次，合并提取液于60℃～70℃條件下，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至60ml，作為受試物原液，1ml相當(dāng)于1．67g原樣品。用蒸餾水將受試物原液分別稀釋成不同劑量的受試液進(jìn)行功能學(xué)試驗(yàn)。

1．2主要儀器與試劑ADVIA1200全自動(dòng)生化儀(美國)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國HEIDOLPH）；高壓滅菌器(山東新華醫(yī)療器械股份有限公司)；二氧化碳培養(yǎng)箱(美國)；離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠)；倒置顯微鏡(日本OLYMPUS)；Multiskan酶標(biāo)儀(芬蘭)；顯微鏡(日本OLYMPUS)；小牛血清(HYCLONE公司產(chǎn)品)；RPMll640(美國Gibco公司產(chǎn)品)；刀豆蛋白A (ConA)、瓊脂糖和MTT(美國Sigma公司產(chǎn)品)。

1．3動(dòng)物與細(xì)胞來源144只BALB/C雄性小鼠，體質(zhì)量18～22g。由軍科院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號SCXK（軍）2012－0004。YAC－1細(xì)胞由上海市疾病預(yù)防控制中心贈(zèng)送。

1．4方法將小鼠分為三批，每批48只，每批按體重分層隨機(jī)分為四組，每組12只，劑量分別為低劑量組（0．84g/kg BW）、中劑量組(1．67g/kg BW)、高劑量(5．01g/kg BW)和對照組(蒸餾水)。每天灌胃一次，分別給予不同劑量的西洋參袋泡茶受試液，30d后分為3個(gè)亞組，試驗(yàn)方法參照《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003年版）[8]。檢測以下指標(biāo)：脾臟及胸腺/體重比值（小鼠稱重后脫臼處死，取脾臟與胸腺，濾紙吸干表面血污稱重，計(jì)算脾臟/體重比值和胸腺/體重比值），脾淋巴細(xì)胞增殖能力(ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，MTT法)，24h足跖腫脹度(綿羊紅細(xì)胞誘發(fā)小鼠DTH，足跖增厚法)[9]；半數(shù)溶血值(HC50，血清凝血素測定)，溶血空斑數(shù)(抗體生成細(xì)胞檢測，Jeme改良載法)；碳廓清能力(小鼠碳廓清試驗(yàn))[10]，雞紅細(xì)胞吞噬率與吞噬指數(shù)(小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)，滴片法)和NK細(xì)胞活性(酶標(biāo)儀測定）[11]。

1．5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 16．0軟件行方差分析，檢測數(shù)據(jù)先經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)，再進(jìn)行方差分析，對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)資料進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)化，待滿足“正態(tài)或方差齊”要求后，用轉(zhuǎn)換所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2．1西洋參袋泡茶對免疫器官、細(xì)胞免疫和體液免疫功能的影響試驗(yàn)表明各劑量組小鼠的臟器/體重比值與對照組比較差異無顯著意義(P＞0．05)，中、高劑量組24h足跖腫脹度及脾淋巴細(xì)胞增殖能力與對照組比較差異有顯著意義(P＜0．05)，高劑量小鼠溶血空斑數(shù)和半數(shù)溶血值高于溶劑對照組，差異有顯著意義（P＜0．05），見表1、表2。

2．2西洋參袋泡茶對小鼠非特異性免疫功能的影響結(jié)果顯示中、高劑量組NK細(xì)胞活性、雞紅細(xì)胞吞噬率與吞噬指數(shù)及碳廓清能力與對照組比較差異有顯著意義(P＜0．05)，見表3，表明在本實(shí)驗(yàn)條件下西洋參袋泡茶對非特異性免疫功能有促進(jìn)作用。

表1 西洋參袋泡茶對臟器/體質(zhì)比值和細(xì)胞免疫功能的影響

表2 西洋參袋泡茶對體液免疫功能的影響

表3 西洋參袋泡茶對非特異性免疫功能的影響

3 討論

本實(shí)驗(yàn)通過對脾臟及胸腺/體重比值，24h足跖腫脹度，脾淋巴細(xì)胞增殖能力等9項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行了測定，內(nèi)容涵蓋免疫器官、細(xì)胞免疫、體液免疫和非特異性免疫四方面，系統(tǒng)探討了西洋參袋泡茶對小鼠免疫功能的影響。

脾臟、胸腺是機(jī)體重要的免疫器官，胸腺/體重（胸腺指數(shù)）和脾臟/體重（脾臟指數(shù)）的高低取決于其中淋巴細(xì)胞增殖的程度，在本研究中，不同劑量的西洋參袋泡茶對小鼠對其無明顯影響。說明胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)在免疫評價(jià)中可能是一個(gè)滯后的指標(biāo)[12]。然而實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示中、高劑量西洋參袋泡茶均能提高碳廓清能力及巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力[13]，可促進(jìn)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力[14]，增強(qiáng)綿羊紅細(xì)胞引起的小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)，增強(qiáng)NK細(xì)胞活性[15]，高劑量西洋參袋泡茶亦可促進(jìn)抗體生成及提高血清凝血素水平，充分證明了西洋參袋泡茶對小鼠的免疫調(diào)節(jié)具有促進(jìn)作用。

[1]閆玉梅，趙梅梅，王笑笑，等.RP-HPLC法同時(shí)測定西洋參含片中4種成分[J].西北藥學(xué)雜志，2016，30（1）：5-8.

[2]楊修仕，周閑容，王麗君，等.西洋參多糖的超濾分離及其免疫增強(qiáng)活性研究[J].食品工業(yè)科技，2014，35(5)：49-52.

[3]白雪，黃鑫，劉淑瑩.不同來源西洋參藥材及產(chǎn)品皂苷成分評價(jià)研究[J].藥物評價(jià)研究，2015，38(6)：652-655.

[4]Yu ZP，Xu DD，Lu LF，et al.Immunomodulatory effect of a formula developed from Americanginseng and Chinese jujube extracts in mice[J].Zhejiang Univ-Sci B(Biomed&Biotechnol)，2016，17(2)：147-157.

[5]邱涵，呂曉君，張鵬.冬蟲夏草西洋參復(fù)合物增強(qiáng)免疫力功能實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2016，13(9)：18-22.

[6]羅亞萍，馬惠榮，黃曉慧，等.西洋參膠囊對電磁輻射大鼠肝臟超微結(jié)構(gòu)及氧化應(yīng)激的影響[J].中醫(yī)雜志，2015，56（18）：1593-1596.

[7]黃金寶.中西醫(yī)結(jié)合治療病毒性心肌炎40例[J].中醫(yī)研究，2015，28(2)：26-28.

[8]中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003年版）[S].2003：23-34.

[9]李巖，霍嬌，呂曉華，等.硒多糖對小鼠免疫功能的影響[J].四川大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014，45（3）：512-514.

[10]張克，牛國順，鄧?yán)?，?鮮蘆根水提物對小鼠細(xì)胞免疫功能的影響[J].中醫(yī)研究，2016，29（10）：68-70.

[11]張立平，端禮榮.NGF和bFGF對小鼠免疫細(xì)胞功能的影響[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2011，29（1）：9-11.

[12]陳蘭芳，肖亮，楊軍平.細(xì)胞自噬的分子機(jī)制及其功能[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014，3（2）：157-161.

[13]劉長江，葉亞龍，孫風(fēng)祥，等.環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)小鼠免疫功能低下模型建立與評價(jià)[J].濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015，37（1）：4-6.

[14]劉佳，張敬敬，李明陽，等.人參莖葉總皂苷對D-半乳糖致衰老小鼠免疫功能的影響[J].中國老年學(xué)雜志，2015，（18）：5087-5089.

[15]Aimee MB，Sharline M，Joseph CS.Molecular Programming of Immunological Memory in Natural Killer Cells[J].Adv Exp Med Biol，2015，850(1)：81-91.

SHI Heqing1，ZHANG Congke2.1. General Hospital of PINGMEISHENMA Medical Group，Pingdingshan Henan 467000，China；2.Henan Center for Disease Control and Prevention，Zhengzhou Henan 450016，China.

Objective To observe the impact of American ginseng teabag on immunity function in mice．Methods A total of l44 BALB/C mice were allocated into 4 groups．Three groups were given low－，mediate－，high－doses(0．84g/kg BW、1．67g/kg BW、5．01g/kg BW)of the American ginseng teabag and the control group was given distilled water in each morning for 30 days．After 30 days，the index of cellular immunity was detected included the ratio of spleen－thymus/body weight，the spleen lymphocyte proliferation and the 24h full extension swelling degree．The humoral immunity index were the hemolytic plaque of spleen and Half hemolytic value(HC50)，and the nonspecific immune index consisted of the phagocytes rate and index of chicken erythrocytes，the natural killer(NK)cell activity and the carbon clearance ability．Results The American ginseng teabag could increase the 24h full extension swelling degree，the phagocytes ability of chicken erythrocytes，the spleen lymphocyte proliferation，the carbon clearance ability and the NK cell activity in the dosage of 1．67g/kg BW and 5．01g/kg BW(P＜0．05)．The amount of antibodies and Serum coagulation factor was enhanced significantly in the dosage of 5．01g/kg BW．The significant difference was observed in the dosage of 5．01g/kg BW in the amount of hemolytic antibody(P＜0．05)．The ratio of spleen－thymus/body weight significant difference was not observed in each group(P＞0．05)．Conclusion The result showed that the American ginseng teabag can improve the different levels of immunological indexes，and enhance the role of immune function in normal mice．

American ginseng teabag；BALB/C Mice；Immunity function

R446．63，R－332

A

1674－1129(2017)02－0181－02

10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．013

2016-09-20；

2017-03-07)

河南省科技廳產(chǎn)學(xué)研合作項(xiàng)目(編號：152107000073)

石賀芹，女，1969年生，醫(yī)學(xué)學(xué)士，主管檢驗(yàn)師，專業(yè)：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，研究方向?yàn)槊庖邫z驗(yàn)。

Experimental study on American ginseng teabag of enhancing immune function to mice