陶鵬輝

(信陽(yáng)市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南信陽(yáng)464000)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清IL-17、IL-23、HMGB1表達(dá)水平及臨床意義

陶鵬輝

(信陽(yáng)市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南信陽(yáng)464000)

目的探討系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)患者血清中白介素17(Interleukin－17，IL－17)、白介素23(Interleukin－23，IL－23)、高遷移率蛋白1(High mobility group box－1，HMGB1)的表達(dá)水平及臨床意義。方法選取我院風(fēng)濕免疫科收治的67例SLE患者為本研究觀察組，同期選取22例體檢健康志愿者為對(duì)照組，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)所有受試者血清中IL－17、IL－23、HMGB1表達(dá)水平，分析三者表達(dá)與SLE臨床指標(biāo)之間的關(guān)系。結(jié)果觀察組患者血清中IL－17、IL－23以及HMGB1水平均高于對(duì)照組，差異均顯著，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0．05)，其中SLE活動(dòng)組中IL－17、IL－23以及HMGB1水平均高于穩(wěn)定組(P＜0．05)，腎炎組HMGB1水平明顯高于非腎炎組(P＜0．05)，腎炎組IL－17、IL－23水平與非腎炎組比較無(wú)顯著差異(P＞0．05)；觀察組IL－17水平與抗ds－DNA抗體水平、抗Sm抗體水平、補(bǔ)體C3、C4、IgM、IgG、CRP均無(wú)顯著相關(guān)性(P＞0．05)，與SLEDAI呈正相關(guān)(r=0．703，P＜0．05)；IL－23水平與抗ds－DNA抗體水平、抗Sm抗體水平均無(wú)顯著相關(guān)性(P＞0．05)，與SLEDAI、IgM、IgG、CRP呈正相關(guān)(r=0．621、0．317、0．432，P＜0．05)，與補(bǔ)體C3、C4呈負(fù)性相關(guān)(r=－0．456、－0．378，P＜0．05)；HMGB1水平與抗Sm抗體水平、補(bǔ)體C4、CRP均無(wú)相關(guān)性，與SLEDAI、抗ds－DNA抗體水平、IgM、IgG呈正相關(guān)(r=0．000，P＜0．05)，與補(bǔ)體C3呈負(fù)性相關(guān)(r=0．000，P＜0．05)。結(jié)論血清IL－17、IL－23及HMGB1在SLE患者中顯著高表達(dá)，且與疾病活動(dòng)性密切相關(guān)，這些指標(biāo)可能對(duì)揭示SLE發(fā)病機(jī)制或控制病情有一定的作用。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡；白介素17；白介素23；高遷移率蛋白1

SLE是一種以機(jī)體多器官功能損傷及廣泛的免疫異常為特征的典型自身免疫性疾病[1]。SLE發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前臨床仍然缺乏特效治療性藥物。糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑是目前控制SLE病情應(yīng)用最為廣泛的治療藥物[2]，但長(zhǎng)期大量使用往往導(dǎo)致多數(shù)病人發(fā)生嚴(yán)重毒副反應(yīng)，最終導(dǎo)致病情反復(fù)，預(yù)后不良。進(jìn)一步開(kāi)展SLE基礎(chǔ)及臨床研究，對(duì)于闡明SLE發(fā)病機(jī)制以及開(kāi)發(fā)新型治療性藥物具有重要意義。研究表明[3]，大量細(xì)胞因子表達(dá)異常在SLE發(fā)病中起重要作用。本研究旨在探討IL-17、IL-23及HMGB1在SLE患者血清中的表達(dá)情況，以及三者表達(dá)與SLE臨床指標(biāo)之間的關(guān)系，試圖為闡明SLE發(fā)病機(jī)制及尋找新的治療靶點(diǎn)提供一定理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料選取2015年4月至2016年4月河南省信陽(yáng)市中心醫(yī)院風(fēng)濕免疫科收治的67例SLE患者為本研究觀察組，所有患者均符合2012年系統(tǒng)性紅斑狼瘡國(guó)際臨床協(xié)助組(Systemic lupus international collaborating clinics，SLICC)制定關(guān)于SLE最新分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，按照SLE活動(dòng)性指數(shù)(Systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI)評(píng)分，以SLEDAI評(píng)分≥10分者為活動(dòng)組，共32例，其中男性7例，女性25例，年齡20~56歲，平均年齡31.57±8.43歲，SLEDAI評(píng)分＜10分者為穩(wěn)定組，共35例，其中男性10例，女性22例，年齡19~54歲，平均年齡30.78±8.52歲，狼瘡性腎炎者36例，其中男性9例，女性27例，年齡20~55歲，平均年齡31.32±8.27歲，非腎炎者31例，其中男性8例，女性23例，年齡20~56歲，平均年齡32.03±8.56歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合2012年SLICC制定關(guān)于SLE最新分類診斷標(biāo)準(zhǔn)；②確診前未使用免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素類藥物；③排除合并其他急慢性感染病者；④排除伴有心臟、肝臟、腎臟、腫瘤等嚴(yán)重疾病者；⑤排除懷孕及哺乳期婦女；⑥了解本研究，患者家屬同意簽署知情同意書者。

同期選取22例體檢健康志愿者為對(duì)照組，其中男性4例，女性18例，年齡21~53歲，平均年齡31.06±8.54歲。兩組受試者之間一般資料比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 主要試劑與儀器人IL-17、IL-23及HMGB1酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Enzymes linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒購(gòu)自美國(guó)ADL公司，抗ds-DNA抗體ELISA試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司，抗Sm抗體試劑盒購(gòu)于德國(guó)歐蒙生物技術(shù)有限公司，C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)、C3、C4、IgM、IgG試劑均購(gòu)于上?？迫A生物工程股份有限公司，比濁法檢測(cè)儀器為德國(guó)生產(chǎn)的羅氏MODULAR P800全自動(dòng)生化分析儀。

1.3 方法采集所有受試者清晨空腹?fàn)顟B(tài)下靜脈血5mL，離心分離血清，-70℃保存待檢。采用ELISA檢測(cè)血清IL-17、IL-23及HMGB1含量，具體操作嚴(yán)格按照試劑盒使用說(shuō)明進(jìn)行，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)ds-DNA抗體水平，采用間接免疫熒光法半定量檢測(cè)抗Sm抗體水平，采用免疫比濁法檢測(cè)補(bǔ)體C3、C4以及CRP、IgM、IgG水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析利用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，服從正態(tài)分布計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，組間比較采用方差分析，相關(guān)性分析采用Pearson法，不服從正態(tài)分布資料兩兩比較采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，采用Spearman法進(jìn)行相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對(duì)照組之間IL-17、IL-23以及HMGB1水平比較觀察組患者血清中IL-17、IL-23以及HMGB1水平均高于對(duì)照組，差異均顯著，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 觀察組與對(duì)照組之間IL-17、IL-23以及HMGB1水平比較

2.2 觀察組IL-17、IL-23以及HMGB1水平與病情活動(dòng)之間的關(guān)系SLE活動(dòng)組及SLE穩(wěn)定組中IL-17、IL-23、HMGB1水平均高于對(duì)照組(P＜0.05)，且SLE活動(dòng)組中IL-17、IL-23、HMGB1水平均高于SLE穩(wěn)定組(P＜0.05)。具體結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 觀察組IL-17、IL-23以及HMGB1水平與病情活動(dòng)之間的關(guān)系

2.3觀察組IL-17、IL-23以及HMGB1水平與腎臟損害之間的關(guān)系腎炎組及非腎炎組中IL-17、IL-23、HMGB1水平均高于對(duì)照組(P＜0.05)，且腎炎組HMGB1水平明顯高于非腎炎組(P＜0.05)，腎炎組IL-17、IL-23水平與非腎炎組比較無(wú)顯著差異(P＞0.05)。見(jiàn)表3。

表3 觀察組IL-17、IL-23以及HMGB1水平與腎臟損害之間的關(guān)系

2.4 觀察組IL-17、IL-23以及HMGB1水平與臨床指標(biāo)之間的關(guān)系相關(guān)性分析采用Pearson法，不服從正態(tài)分布資料，如抗ds-DNA抗體水平與抗Sm抗體水平，采用Spearman法進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果可見(jiàn)，觀察組IL-17水平與抗ds-DNA抗體水平、抗Sm抗體水平、補(bǔ)體C3、C4、IgM、IgG、CRP均無(wú)顯著相關(guān)性(P＞0.05)，與SLEDAI呈正相關(guān)(P＜0.05)；IL-23水平與抗ds-DNA抗體水平、抗Sm抗體水平均無(wú)顯著相關(guān)性(P＞0.05)，與SLEDAI、IgM、IgG、CRP呈正相關(guān)(P＜0.05)，與補(bǔ)體C3、C4呈負(fù)性相關(guān)(P＜0.05)；HMGB1水平與抗Sm抗體水平、補(bǔ)體C4、CRP均無(wú)相關(guān)性，與SLEDAI、抗ds-DNA抗體水平、IgM、IgG呈正相關(guān)(P＜0.05)，與補(bǔ)體C3呈負(fù)性相關(guān)(P＜0.05)。

表4 觀察組IL-17、IL-23以及HMGB1水平與臨床指標(biāo)之間的關(guān)系

3 討論

目前，SLE發(fā)病尚未完全清楚，臨床普遍認(rèn)為SLE發(fā)病主要與機(jī)體T淋巴細(xì)胞激活，刺激B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生大量自身抗體以及免疫復(fù)合物沉積有關(guān)[5]，Th17細(xì)胞作為輔助性T淋巴細(xì)胞亞群[6]，成為了近年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。Th17主要分泌IL-17A、IL-17F、TNF-α等細(xì)胞因子[7]，IL-17A作為IL-17最為主要的效應(yīng)分子，在機(jī)體中具有很強(qiáng)的促進(jìn)炎癥作用。大量研究表明[8-10]，IL-17在自身免疫性疾病諸如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、支氣管哮喘、移植腎排斥反應(yīng)等中均存在表達(dá)異常，提示IL-17與自身免疫性疾病的發(fā)生關(guān)系密切。IL-23是IL-12家族新成員，對(duì)Th17細(xì)胞存活及增殖起重要作用，且能夠促進(jìn)Th細(xì)胞釋放IL-17[11]。相關(guān)研究表明[12]，CD4+T細(xì)胞在向Th17分化的早期，IL-23并不發(fā)揮作用，而在Th17細(xì)胞發(fā)生增殖分化時(shí)起重要作用。此外，國(guó)外學(xué)者發(fā)現(xiàn)[13]，鼠模型試驗(yàn)中，自身免疫性疾病在缺乏IL-17以及IL-17抗體治療的模型中仍然發(fā)生，而在缺乏IL-23模型中結(jié)果相反，推測(cè)IL-23可能通過(guò)不依賴于Th17的其他途徑參與自身免疫性疾病的發(fā)生及發(fā)展。HMGB1在細(xì)胞核內(nèi)是一種進(jìn)化高度保守的典型非組蛋白，參與DNA重組、DNA復(fù)制、基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞分化成熟以及類固醇激素調(diào)控等重大生命活動(dòng)[14，15]。近年來(lái)，HMGB1在自身免疫性疾病中的研究成為了熱點(diǎn)，研究表明[16，17]，HMGB1在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中呈現(xiàn)高表達(dá)，在狼瘡性腎炎小鼠模型中同樣發(fā)現(xiàn)其異常高表達(dá)，提示HMGB1可能與自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系。因此，本研究選擇IL-17、IL-23以及HMGB1三個(gè)指標(biāo)進(jìn)行研究，探討三者與SLE發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系，試圖為闡明SLE發(fā)病機(jī)制及尋找新的治療靶點(diǎn)提供一定理論依據(jù)。

本研究結(jié)果表明，觀察組患者血清中IL-17、IL-23以及HMGB1水平均高于對(duì)照組，提示SLE患者中存在IL-17、IL-23以及HMGB1高表達(dá)，推測(cè)三者參與SLE疾病的發(fā)生；SLE活動(dòng)組中IL-17、IL-23以及HMGB1水平均高于SLE穩(wěn)定組，三者與SLEDAI呈明顯正相關(guān)，提示三者與SLE疾病病情密切相關(guān)，且隨疾病活動(dòng)呈升高趨勢(shì)，提示三者可作為SLE疾病活動(dòng)的參考指標(biāo)；腎炎組HMGB1水平明顯高于非腎炎組，HMGB1水平與抗Sm抗體水平、補(bǔ)體C4、CRP均無(wú)相關(guān)性，與SLEDAI、抗ds-DNA抗體水平、IgM、IgG呈正相關(guān)，與補(bǔ)體C3呈負(fù)性相關(guān)，說(shuō)明HMGB1與SLE并發(fā)癥狼瘡性腎炎的發(fā)生密切相關(guān)，抗ds-DNA抗體作為SLE患者自身特異性抗體，推測(cè)HMGB1在SLE發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮作用，可能是由于與抗ds-DNA誘導(dǎo)的腎小球免疫復(fù)合物發(fā)生結(jié)合；腎炎組IL-17、IL-23水平與非腎炎組比較無(wú)顯著差異，觀察組IL-17水平與抗ds-DNA抗體水平、抗Sm抗體水平、補(bǔ)體C3、C4、IgM、IgG、CRP均無(wú)顯著相關(guān)性，與SLEDAI呈正相關(guān)，IL-23水平與抗ds-DNA抗體水平、抗Sm抗體水平均無(wú)顯著相關(guān)性，與SLEDAI、IgM、IgG、CRP呈正相關(guān)，與補(bǔ)體C3、C4呈負(fù)性相關(guān)，提示IL-17、IL-23與狼瘡性腎炎的發(fā)生無(wú)明顯相關(guān)性，二者與SLE疾病活動(dòng)情況密切相關(guān)，推測(cè)IL-23與SLE疾病活動(dòng)程度相關(guān)的作用機(jī)制，可能與其導(dǎo)致IgM、IgG、CRP水平升高，補(bǔ)體C3、C4消耗過(guò)大有關(guān)。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，血清IL-17、IL-23及HMGB1在SLE患者中顯著高表達(dá)，三者參與SLE疾病發(fā)生，且與疾病活動(dòng)性密切相關(guān)，推測(cè)三者有望成為SLE治療新靶點(diǎn)，值得進(jìn)一步深入研究探討。

[1]李圣楠，黃慈波.系統(tǒng)性紅斑狼瘡的診斷治療進(jìn)展[J].臨床藥物治療雜志，2010，8(1)：6-10.

[2]郗建雄，鄒延峰.糖皮質(zhì)激素治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡致血脂異常的研究進(jìn)展[J].安徽醫(yī)藥，2016，20(2)：205-209.

[3]何陽(yáng)陽(yáng)，閻雨，杜冠華.系統(tǒng)性紅斑狼瘡的細(xì)胞因子療法研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27(5)：876-880.

[4]Petri M，Orbai AM，Alarcón GS，et al.Derivation and validation of the Systemic Lupus International Collaborating Clinics classification criteria for systemic lupus erythematosus[J].Arthritis& Rheumatism，2012，64(8)：2677-2686.

[5]郭卉，董瑤佳，吳冰.自身抗體的聯(lián)合檢測(cè)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡診斷中的意義[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2016，34(5)：644-646.

[6]董大群，王忠永，李海英，等.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血濾泡輔助性T細(xì)胞水平的檢測(cè)[J].中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2014，28(10)：1007-1011.

[7]王玫，任安.Th17與自身免疫性疾病[J].國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志，2012，32(3)：272-276.

[8]郭江燕，高梓珊，姜姝姝，傅淑平，甘君學(xué).IL-17和NF-κB通路與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的相關(guān)性研究[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，31(1)：192-194.

[9]梁曉君，胡志堅(jiān)，荀春華.哮喘患兒外周血降鈣素原、IL-17及CRP水平監(jiān)測(cè)及應(yīng)用[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014(5)：575-576.

[10]陳博.IL-17在腎移植急性排斥反應(yīng)中表達(dá)的變化及意義[D].吉林大學(xué)，2010.

[11]Sherlock JP，Taylor PC，Buckley CD.The biology of IL-23 and IL-17 and their therapeutic targeting in rheumatic diseases[J]. Current opinion in rheumatology，2015，27(1)：71-75.

[12]王冬梅，王久敏，劉桂芝.IL-23/IL-17炎性通路的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，22(6)：674-677.

[13]Langrish CL，Chela Y Blumenschein WM，et al.IL-23drives a pathogenic T cell population that induces autommune inflammation.J Exp Med，2005，201：233-240.

[14]郝旭蕾，羅文，何新宇，等.HMGB1在自身免疫和炎癥疾病中的作用及研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，13(17)：3378-3381.

[15]Zhu X，Messer JS，Wang Y，et al.Cytosolic HMGB1 controls the cellular autophagy/apoptosis checkpoint during inflammation[J]. Journal of Clinical Investigation，2015，125(3)：1098-110.

[16]張玉萍，姚茹冰，蔡輝.HMGB1對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎作用的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué)，2015，43(9)：1203-1204.

[17]封曉娟.HMGB1在狼瘡性腎炎腎小球系膜細(xì)胞增殖中的作用及機(jī)制[D].河北醫(yī)科大學(xué)，2014.

The expression and clinical significance of IL-17，IL-23，HMGB1 in systemic lupus erythematosus

TAO Penghui.Department of Laboratory Medicine，Central Hospital of Xin Yang City，Xinyan Henan 464000，China.

Objective To investigate the expression and clinical significance of IL－17，IL－23，HMGB1 in systemic lupus erythematosus．Method A total of 67 cases of SLE patients in our hospital were selected as the observation group，and 22 healthy volunteers were selected as the control group．ELISA was used to detect the expression of IL－17，IL－23and HMGB1 in serum of all subjects，and the relationship between the expression of these three indexes and the clinical parameters of SLE was analyzed．Result In the patients of observation group，the expression levels of serum IL－17，IL－23 and HMGB1 were higher than that in control group(P＜0．05)；IL－17，IL－23 and HMGB1 levels of SLE patients in active state were significantly higher than those in stable state(P＜0．05)．The level of IL－17 in the nephritis group was significantly higher than that in the non－nephritis group(P＜0．05)，and there was no significant difference for IL－17 and IL－23 levels between nephritis group and non nephritis group(P＞0．05)；The level of IL－17 in the observation group had no significant correlation with anti－ds－DNA antibody level，anti－Sm antibody level，complement C3，C4，IgM，IgG and CRP(P＞0．05)，but positive correlation with SLEDAI(P＜0．05)；Between IL－23 and anti－ds－DNA antibody or anti－Sm antibody there was no correlation(P＞0．05)．But IL－23 was positively correlated with SLEDAI，IgM，IgG，CRP(P＜0．05)，and had negative correlation with C3，C4(P＜0．05)；The level of HMGB1 was not correlated with the level of anti－Sm antibody，complement C4 and CRP，and was positively correlated with SLEDAI，anti－ds－DNA antibody levels，IgM and IgG(P＜0．05)，and negatively correlated with complement C3(P＜0．05)．Conclusion Serum levels of IL－17，IL－23 and HMGB1 were significantly higher in SLE patients，and three of them were involved in SLE disease，and were closely related to disease activity．These indexes may play an important role in revealing the pathogenesis of SLE and controlling the disease．

Systemic lupus erythematosus；IL－17；IL－23；HMGB1

R593．24+1，R446．62

A

1674－1129(2017)02－0177－04

10．3969/j.issn.1674－1129．2017．02．012

2016-12-16；

2017-03-17)

陶鵬輝，男，1972年生，本科學(xué)歷，學(xué)士學(xué)位，副主任檢驗(yàn)技師，研究方向是臨床免疫、生化、微生物學(xué)檢驗(yàn)。E-mail：taopenghui88@ 163.com