唐安福，蘇倩雯，貢 磊，湯 淏，王曙東

HPLC法測定兒腎康丸中的特女貞苷含量

唐安福，蘇倩雯，貢 磊，湯 淏，王曙東

目的 為提高兒腎康丸的質(zhì)量，建立特女貞苷的含量測定方法。 方法 采用高效液相色譜法，流動相為甲醇?水；色譜柱：Hedera?ODS?2 C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫：25℃；流速：1.0 mL／min；檢測波長：224 nm；進樣量：10 μL。結(jié)果 特女貞苷在10.73～120.90 μg／mL范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系，平均回收率為98.60%（RSD＝2.22%）。 結(jié)論 所采用的方法簡便可行，重現(xiàn)性好，定量方法準(zhǔn)確可靠。

兒腎康丸；特女貞苷；高效液相色譜法

兒腎康丸為南京軍區(qū)南京總醫(yī)院院內(nèi)制劑，處方由黃芪、茯苓、白術(shù)等共七味中藥組成，具有滋陰降火，清熱利濕的功效，臨床上用于治療慢性腎炎、腎病綜合征、蛋白尿等。該制劑原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅采用薄層色譜法鑒別法，不能全面反映該制劑質(zhì)量［1?2］。為提高制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［3?4］，本實驗采用高效液相色譜法，測定兒腎康丸中特女貞苷的含量，進一步提升制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［5?7］。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 對照品特女貞苷（121056?200503）購自中國食品藥品檢定研究院；兒腎康丸為本院制劑科配制（規(guī)格：60 g／瓶，批號為130817、140329、141122、150210、150509）。甲醇為色譜純（美國天地）；其他試劑均為分析純。高效液相色譜儀Waters 1525，2487紫外檢測器；XS105型十萬分之一電子天平（梅特勒爾?托利多公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Hedera?ODS?2 C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇?水梯度洗脫見表1；檢測波長：224 nm；柱溫：25℃；流速：1.0 mL／min；進樣量為10 μL。特女貞苷的保留時間約為34.5 min。

表1 流動相梯度

1.2.2 溶液的制備 對照品溶液的制備：精密稱取對照品特女貞苷4.16 mg，置于25 mL量瓶中，加稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。供試品溶液的制備：取本品適量，研碎，混勻，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，浸泡30 min，超聲提取（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。陰性對照溶液的制備：按處方比例稱取缺少女貞子的處方藥材，同本品制備工藝制備成陰性制劑，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。

1.2.3 專屬性試驗 精密吸取上述對照品、供試品及陰性對照溶液各10 μL，按上述色譜條件進行測定。特女貞苷線性關(guān)系考察：分別精密量取特女貞苷對照品溶液0.625，1.25，2.5，5.0，7.5 mL至10 mL容量瓶中，用稀乙醇稀釋至刻度，按“2.1”項下方法進行測定，每個濃度對照品溶液進樣2次，計算峰面積值并計算其平均值，以對照品濃度為橫坐標(biāo)（X），平均峰面積值為縱坐標(biāo)（Y），進行線性回歸，并計算回歸方程。精密度試驗：取“2.2”項下的特女貞苷對照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進樣5次，計算特女貞苷峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

圖1 特女貞苷方法專屬性考察

1.2.4 穩(wěn)定性試驗 取同一批號的樣品（批號為140329），按“2.2”項下樣品溶液的制備方法進行測定，在常溫下分別于0、1、2、4、8 h進樣，計算特女貞苷峰面積 RSD。重復(fù)性試驗：取同一批號的樣品（批號為140329）6份，按“2.2”項下樣品溶液的制備方法進行測定，測定特女貞苷的含量并計算其RSD。加樣回收率試驗：精密稱取特女貞苷對照品1.2 mg，置入50 mL容量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，即得對照品儲備液。精密稱取已知含量的兒腎康丸樣品（批號為140329，其中特女貞苷含量為0.447 mg／g）細粉9份，每份0.25 g，平均分成3組，分別精密加入上述對照品儲備液3 mL、5 mL和7 mL，按“2.2”項下供試品溶液制備方法處理，進樣測定，記錄峰面積，并計算回收率。

2 結(jié) 果

2.1 專屬性試驗 結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的保留時間處，有同一色譜峰，而陰性對照溶液在相應(yīng)保留時間處則無峰出現(xiàn)，表明其對樣品測定無干擾。結(jié)果見圖1。

2.2 特女貞苷線性回歸方程 Y＝13236X＋6677，R2＝0.999（n＝5）。結(jié)果表明，特女貞苷的濃度在10.73～120.90 μg／mL之間，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗 特女貞苷峰面積的 RSD為0.18%，結(jié)果表明該方法的精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗 特女貞苷峰面積 RSD為1.81%，表明樣品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 重復(fù)性試驗 測得特女貞苷平均含量為444.18 μg／g，其RSD為1.52%，表明方法重復(fù)性良好。

2.6 加樣回收率試驗 特女貞苷的平均回收率為98.60%，RSD為2.22%。結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗

2.7 樣品含量測定 取8批兒腎康丸（批號分別為110210、120325、121230、130817、140329、141122、150210、150509），按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下方法進行含量測定，結(jié)果含量分別為0.35、0.40、0.41、0.45、0.45、0.39、0.39、0.38 mg／g。

3 討 論

3.1 指標(biāo)成分的選擇 女貞子性偏寒涼，能補益肝腎之陰，適用于肝腎陰虛證［8］。其化學(xué)成分主要含有三萜類成分如齊墩果酸、熊果酸等，黃酮類化合物如槲皮素、木犀草素等，環(huán)烯醚萜苷類如特女貞苷、女貞苷等，另外還含有脂肪酸類、磷脂、多糖等成分［9］。其中特女貞苷為女貞子最重要的有效成分，現(xiàn)代藥理研究表明其具有抑菌、抗炎、抗衰老、降血脂和降血糖等藥理作用［10］?！吨袊幍洹?015年版收載的女貞子藥材飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［11］中也以特女貞苷為指標(biāo)性成分進行含量控制。因而本實驗增加了特女貞苷的含量測定。

3.2 提取條件的選擇 預(yù)實驗對特女貞苷提取時間（30 min、45 min和60 min）進行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)提取時間在60 min時，特女貞苷提取率較高；同時對提取溶劑的用量（藥材與溶劑固液比為1∶80、1∶100、1∶120）進行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)藥材與提取溶劑固液比為1∶100時，特女貞苷提取率較高。故最終確定特女貞苷提取條件為加入100倍量稀乙醇，超聲提取60 min。實驗結(jié)果也表明，在此條件下特女貞苷提取得率較高。

3.3 測定波長的選擇 通過預(yù)實驗，精密稱取一定量的對照品，進行紫外掃描［12］，測得最大吸收波長為224 nm。

3.4 流動相的選擇 參照《中國藥典》2015年版收載的女貞子［11］中特女貞苷的含量測定方法，并通過預(yù)實驗調(diào)整，實驗最終選擇甲醇?水（梯度洗脫見表1）為最佳流動相［13］。

本文建立了兒腎康丸中特女貞苷含量測定的方法，并對該方法進行了全面方法學(xué)考察，結(jié)果表明，該方法陰性無雜質(zhì)干擾，特女貞苷分離度好，重現(xiàn)性好，定量方法準(zhǔn)確可靠，可作為本制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)［14?15］。

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HPLC determination of specnuezhenide in Ershenkang pill

TANG An?fu，SU Qian?wen，GONG Lei，TANG Hao，WANG Shu?dong

（Department of Pharmaceution，Nanjing General Hospital of Nanjing Military Region，PLA，Nanjing210002，Jiangsu，China）

Objective To improve the quality of Ershenkang pill and establish the standard. Methods A HPLC（high?performance liquid chromatography）method was used with Hedera?ODS?2 C18column（4.6 mm×250 mm，5 μm）and a mobile phase of Methanol?Water.Flow rate was 1.0 mL／min，column temperature was 25℃，the detection wavelength was 224 nm and sample loop volume was 10 μL. Results The linear relationship of specnuezhenide content was good in the range of 10.73－120.90 μg／mL and the average recovery was 98.60% （RSD＝2.22%）. Conclusion The method is simple，accurate，reliable，and has good reproduc?ibility.

Ershenkang pill；Specnuezhenide；HPLC

R927.11

A

1672?271X（2017）01?0013?03

10.3969／j.issn.1672?271X.2017.01.004

2016?05?26；

2016?08?23）

（本文編輯：黃攸生； 英文編輯：王建東）

全軍醫(yī)療機構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研項課題（13ZJZ13）

210002 南京，南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科

湯 淏，E?mail：tang_hao0518＠sina.com

唐安福，蘇倩雯，貢 磊，等.HPLC法測定兒腎康丸中的特女貞苷含量［J］.東南國防醫(yī)藥，2017，19（1）：13?15.