張樂樂

（黑龍江省濟仁藥業(yè)有限公司）摘 要：目的：采用高效液相色譜法去測定阿莫西林顆粒中高分子雜質的方法。方法：在測定的過程中采用的是高效液相色譜的方法。色譜柱是當前比較常見的凝膠柱，流動相A是濃度為0.1mol/L，PH值為7.0的磷酸鹽緩沖液。流動相B為水，流動相的流速為0.6-0.9ml/min，在測定中檢測的波長為254nm。結果：阿莫西林顆粒中的雜質含量在0.1%以內。結論：高效液相色譜法在測定阿莫西林中雜質含量使具有靈活性高，準確性強和操作簡便等多項優(yōu)勢，這種方法也值得大力的推廣和應用。

關鍵詞：高效液相色譜法；阿莫西林顆粒；高分子雜質、

阿莫西林顆粒也被叫做羥氨芐青霉素顆粒，是一種半合成光譜青霉素，阿莫西林顆粒有著抗菌譜廣、耐酸性強?？诜蘸?、療效確切等特點，基于這一特點，在醫(yī)學中被廣泛的應用，已經被廣泛的應用到臨床中。相對于其他的青霉素類的抗生素來說，阿莫西林顆粒的國民反應較大，國民反應在臨床研究中是極為重要的，已經有許多的學者進行了阿莫西林的過敏反應分析，發(fā)現引起阿莫西林國民反應的主要因素就是阿莫西林顆粒中含有較多的高分子雜質，要想降低阿莫西林顆粒的過敏性，就要減少顆粒中高分子雜質的含量。本文就是對高效液相色譜法對阿莫西林顆粒中的高分子雜質進行分析，為相關的研究提供借鑒。

1 儀器與試藥

儀器：WatersH1LC儀（美國Waters），1525泵，2487UV檢測器，色譜工作站（WatersBeeze）。

試藥：阿莫西林對照品（中國藥品生物制品檢定所，含量為86。2010）；水為重蒸餾水；阿莫西林顆粒（商品名為再林，批號為031202、031203、031204，海南先聲藥業(yè)有限公司）；藍色葡聚糖2000（Pharmacia公司）：其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱使用的是SephadexG-10凝膠柱，這一凝膠柱使用的是不銹鋼色譜柱，具體的規(guī)格是300mmxl0mm，而且內部填的是SephadexG-10凝膠，本文測定試驗中使用的凝膠是俺媽西亞生物技術有限公司提供的。流動相要以pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液，并且是0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液，具體的制備是分別取21.85g和6.08g的一二水磷酸氫二鈉和二水磷酸二氫鈉溶液在水中溶解，這樣就會制成磷酸溶液和氫氧化鈉，而且其pH值在（7.0±0.1）。而流動相B是重蒸餾水，按照下滑書的具體要求來進行試驗測定：流速要在0.6-0.9mL/min之間，檢測的波長為254nm，而且進樣量是20μ。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗

使用藍色葡聚糖2000溶液，這一溶液的規(guī)格是1mg/ml，使用這一溶液來進行色譜柱的拖尾因子和理論塔板數，將流動相A當做是流動相，檢測的過程中，檢測的波長是254nm，流速是0.6-0.9ml/min，拖尾因子是0.86，理論塔板數是1695，，在此基礎上，取標準品阿莫西林兩份，阿莫西林要適量，將這兩份阿莫西林分別的放置在50ml的量瓶中，之后量瓶中加入重蒸餾水，將其進行溶解，在這樣的情況下，就可以將其當做是對照品溶液，之后按照相應的方法將。流動相B當做是流動相，將一份連續(xù)的重復的進樣3次，而且峰面積的偏差也要達到0.38%，在此基礎上，對兩份都另外進樣一針，這時得到的峰面積的相對偏差是0.26%。

2.3 溶液的制備

溶液在制備的過程中，主要包括供試品溶液對對照品溶液。供試品溶液在制備的過程中，需要取本品4袋，將這4袋藥品研細，之后進行精密量取，在量取的過程中，要相當于阿莫西林500mg，之后將其放在50ml的容量瓶中，向里面加入流動相A，大約為30ml，進行超聲溶解，在全部溶解之后稀釋到相應的刻度就要搖勻處理，通過0.45μm的濾膜就能夠進行過濾，最終形成供試品溶液。對照品溶液在制備的過程中，需要稱取阿莫西林對照品大約20mg，一定要進行精密稱定，將其放置在50ml的容量瓶中，使用流動相B來進行溶解，還要對其進行稀釋到相應的刻度，這樣就形成了對照品溶液。

2.4 測定的方法

吸取供試品溶液20μl，將著2μl的供試品溶液注入到色譜儀中，將流動相A當做流動相，之后在取20μl的對照品溶液，將其注入到色譜儀中，將流動相B來當做流動相來進行測定，在測定的過程中，還要記錄色譜圖。根據規(guī)定，保留時間是小于阿莫西林主峰和大于藍色葡聚糖2000的雜質全部都是高分子雜質，按照外標法來進行供試品中高分子雜質的含量的計算。

2.5 阿莫西林顆粒的高分子雜質的測定

按照上述闡述的色譜條件來對三個批號的阿莫西林顆粒的高分子含量進行了科學的測定，在測定的過程中，主要是選擇阿莫西林作為整個試驗的對照品，按照主成分對照法來對物質的具體含量進行測定，測定的結果是供試品溶液中含有的雜質含量全部都小于0.25，具體的就結果如表1所示：

3 討論

在樣品中加入了碳酸鈉溶液，其碳酸鈉溶液占10%，這樣就使得阿莫西林溶液極容易產生聚合，將其自然的放置了3個小時之后，就會發(fā)現高分子雜質已經增加了一倍，因此，在樣品溶解之后，必須要立即的進行進樣處理，除此之外，還要注意的是，在每一次溶解之后，樣品僅僅能夠進一針，而且加入的碳酸鈉溶液也要盡可能的減少，可以將超聲的時間增加，便于溶解。在對照品溶液進樣的過程中，應該將水當成流動相，進樣品溶液的過程中應該將磷酸鹽緩沖液當成流動相，這樣也就可以充分的保證對照品主峰的保留時間和樣品的高分子雜質保留的時間具有高度的一致性。到目前為止，阿莫西林及青霉素類抗生素的高分子雜質尚無標準品。以HPLC分析相關物質，在沒有雜質對照品的情況下，《中國藥典》采用主成分對照法評價相關物質的含量，故在參照相關文獻的基礎上，研究采用對照法進行了測定，結果表明本法簡便、易行，能有效地檢測到阿莫西林顆粒中的雜質含量。隨著免疫學和分子生物學技術的迅速發(fā)展，目前對阿莫西林過敏機制有了較明確的認識。阿莫西林木身沒有抗原性，不直接引發(fā)過敏反應，引起過敏反應的是制劑中高分子聚合物雜質。對于口服阿莫西林，原料藥中高分子雜質0.1%、制劑中高分子雜質O.2%時，一般不會產生青霉素過敏應。上最優(yōu)質的阿莫西林原料（西班牙Biochemie公司）和先進的生產工藝，成功地將成品中的雜質控制在0.1%以下，從而確保了該制劑的療效和安全性。

參考文獻

[1]馬萍，程玉寶，王德剛，鐘雅妮，熊淵_5可莫西林顆粒中特定雜質的研究及控制[J].今日藥學，2014（9）.

[2]李緒倫，任學毅，李霞，李寧-5可莫西林膠囊聚合物雜質測定中的異常情況研究[J].中國藥業(yè)，2008（12）.

[3]朱康玲，康月菊，尹翠英，焦瑞恒.關于阿莫西林中聚合物雜質的研究們.石家莊職業(yè)技術學院學報，2006（2）.

[4]顧立素，胡昌勤，周進東，羅興洪，趙耀軍-5可莫西林顆粒中高分子雜質含量和生產工藝的相關性評價[J].藥品評價，2005（2）.