蘇光燦++何興莉++鄧龍++向春蓉++劉捷

摘要 采用高效液相色譜法對涼山州引進油橄欖品種初榨油的多酚含量、α-生育酚含量、甾醇含量進行分析，采用氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）對橄欖油脂肪酸組成進行分析。結(jié)果表明：涼山州引進油橄欖品種初榨油的4種多酚類化合物含量均較高，分別為沒食子酸2.76 μg/g、羥基酪醇1.69 μg/g、兒茶素0.19 μg/g和阿魏酸1.43 μg/g；α-生育酚、豆甾醇、β-谷甾醇的含量分別為166.39、492.03、822.90 μg/g；棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞油酸的相對含量分別為15.50%±0.17%、1.70%±0.09%、63.70%±0.78%和9.20%±0.71%。涼山州引進油橄欖初榨油具有較好的品質(zhì)，達到了優(yōu)質(zhì)保健型食用油的標準，值得推廣食用。

關(guān)鍵詞 油橄欖；引進品種；初榨油；品質(zhì)分析；四川涼山

中圖分類號 TS221 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2016）24-0262-02

油橄欖（Olea europaea L.）是木犀科木犀欖屬常綠喬木，為世界著名油料作物，原產(chǎn)地中海沿岸國家[1]。橄欖油是用適當(dāng)?shù)臋C械方法從油橄欖鮮果中提取出來的油脂。初榨橄欖油富含不飽和脂肪酸、角鯊烯、多酚以及維生素，具有抗氧化、調(diào)節(jié)膽固醇、預(yù)防癌癥和心血管疾病、美容等功效，利于促進幼兒骨骼和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育[2-3]。

多酚類化合物是一類活性較強的抗氧化物質(zhì)，其中生育酚具有抗不孕、抗氧化等生理功能，在多種異構(gòu)體中，α-生育酚的生理活性和抗氧化能力最強[4-6]。天然甾醇是一種存在于植物中的天然活性物質(zhì)，對人類無毒副作用，具有降血糖、降膽固醇等功能[7]。脂肪酸組成是橄欖油的重要特征指標，具有較好的抗氧化穩(wěn)定性。本試驗以涼山州引進油橄欖品種的初榨油為研究對象，從多酚含量、生育酚含量、甾醇含量、脂肪酸組成4個方面進行分析，以了解涼山州引進油橄欖品種初榨油的品質(zhì)特性。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 原料與試劑。初榨橄欖油由涼山州中澤新技術(shù)開發(fā)有限責(zé)任公司提供；甲醇（用于提?。?、正己烷、正己烷（含0.01%BHT）、去離子水（含0.5%冰醋酸）、KOH-95%乙醇溶液、飽和氯化鈉溶液、石油醚、1 mol/L KOH-甲醇溶液、無水碳酸鈉、硝酸、過氧化氫、1%硝酸為分析純；甲醇（用于流動相）、異丙醇為HPLC級。

1.1.2 儀器與設(shè)備。Agilent1260型高效液相色譜系統(tǒng)（美國Agilent公司）；真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；微量移液槍；電子天平；空心陰極燈，AS-I·Pb-SR；原子吸收分光光度計（AA-6880系列，日本Shimadzu公司）；氣相色譜質(zhì)譜儀，GCMS-QP2010配有Aoc-20i進樣器，日本Shimadzu公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 多酚含量的測定。包括色譜條件、標準品溶液的制備、樣品溶液的制備3個步驟。

（1）色譜條件。色譜柱：ZORBAX SB-C18柱（4.6×150 mm，5.0 μm）；DAD檢測器；檢測波長、柱溫、流量分別為280 nm、35 ℃、1.0 mL/min；流動相：A、B、C分別為0.5%乙酸、甲醇、異丙醇；梯度洗脫順序：0～14 min，92%A，4%B，4%C；14～30 min，82%～92%A，4%～9%B，4%～9%C（表1）。

（2）標準品溶液的制備。分別稱取適量的沒食子酸、羥基酪醇、兒茶素、阿魏酸加入甲醇溶解，定容于25 mL容量瓶中得標準品溶液。分別吸取一定量的標準品溶液配制成混合標準品溶液。將該混合標準品溶液稀釋2.5、5、10、15、20倍，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，按上述色譜條件進樣分析。

（3）樣品溶液的制備。稱取20.0 g橄欖油樣品置于具塞錐形瓶中，加入50 mL正己烷充分振搖3 min，加入20 mL 60%甲醇充分振搖5 min，再于125 mL分液漏斗中靜置20 min，收集下層濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中40 ℃濃縮，加甲醇定容至3 mL得試樣溶液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，進樣20 μL進行HPLC分析。進行3次重復(fù)。采用標準曲線法，根據(jù)HPLC色譜圖峰面積及標準曲線方程求其含量。

1.2.2 α-生育酚含量的測定。包括色譜條件、標準品溶液的制備、樣品溶液的制備3個步驟。

（1）色譜條件。色譜柱：ZORBAX SB-C18柱（4.6×150 mm，5.0 μm）；DAD檢測器；檢測波長、柱溫、流量分別為295 nm、35 ℃、1.0 mL/min；流動相為100%甲醇。

（2）標準品溶液的制備。稱取α-生育酚標準品，加入正己烷溶解，定容于25 mL容量瓶中得標準品溶液，依次稀釋2.5、5、10、15、20倍，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，按上述色譜條件進樣分析。

（3）樣品溶液的制備。稱取1 g橄欖油樣溶于5 mL正己烷中，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后進樣分析，進行3次重復(fù)試驗。采用標準曲線法進行定量分析，根據(jù)HPLC色譜圖峰面積及標準曲線方程求其含量。

1.2.3 豆甾醇、β-谷甾醇含量的測定。包括色譜條件、標準品溶液的制備、樣品皂化處理、HPLC分析4個步驟。

（1）色譜條件。色譜柱：ZORBAX SB-C18柱（4.6×150 mm，5.0 μm）；DAD檢測器檢測波長、柱溫、流量分別為210 nm、50 ℃、1.0 mL/min；流動相：A為98.5%甲醇，B為1.5%去離子水。

（2）標準品溶液的制備。稱取適量豆甾醇標準品與β-谷甾醇標準品溶于異丙醇中得混合標準品溶液，依次稀釋2、4、6、8、10、12、14倍，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾，按上述色譜條件進樣分析。

（3）樣品皂化處理。稱取2 g橄欖油樣加入5 mL KOH-95%乙醇溶液80 ℃水浴皂化1 h，皂化液冷卻至室溫，加飽和氯化鈉水溶液25 mL，移至分液漏斗分3次用石油醚30 mL提取，合并石油醚提取液，蒸餾水25 mL多次洗石油醚至中性，石油醚層用無水硫酸鈉脫水過濾，濾液70 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，殘渣用無水乙醇定容至5 mL待HPLC分析。

（4）HPLC分析。將溶液混勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后HPLC分析，進行3次重復(fù)試驗。采用標準曲線法進行定量，根據(jù)HPLC色譜圖峰面積及標準曲線方程求其含量。

1.2.4 脂肪酸組成的測定。包括甲酯化預(yù)處理、GC-MS分析2個步驟。

（1）甲酯化預(yù)處理。移取50 μL橄欖油于試管中，加入4.5 mL正己烷溶解，再加入4.5 ml 1 mol/L的KOH-甲醇溶液，混勻后靜置10 min，待分層，取上清液，無水碳酸鈉過濾除水，待GC-MS分析。

（2）GC-MS分析。色譜柱：Rtx-wax（30 m×0.25 mm ID，0.25 umdf）；GC：柱箱溫度60 ℃，進樣口溫度245 ℃，分流比1∶10；升溫程序：60 ℃持續(xù)5 min；150 ℃持續(xù)1.0 min，230 ℃持續(xù)7 min；MS：離子源溫度230 ℃，接口溫度245 ℃；質(zhì)譜掃描范圍45～550 m/z。取上清液過0.22 μm微孔濾膜后GC-MS分析。進行3次重復(fù)試驗。

2 結(jié)果與分析

2.1 多酚含量

在本試驗的色譜條件下，標準品中的沒食子酸、羥基酪醇、兒茶素、阿魏酸均能較好的分離，且峰型較好。沒食子酸、羥基酪醇、兒茶素、阿魏酸的質(zhì)量濃度分別為5.87、11.99、99.88、4.25 μg/mL，以峰面積（mAU）為縱坐標，4種多酚類化合物的含量（μg/g）為橫坐標進行線性回歸，得其線性方程和相關(guān)系數(shù)（表2），各物質(zhì)的峰面積和濃度之間呈良好的線性關(guān)系。經(jīng)計算，橄欖油樣品中沒食子酸、羥基酪醇、兒茶素、阿魏酸的含量分別為2.76、1.69 、0.19、1.43 μg/g。結(jié)果表明，樣品橄欖油中沒食子酸含量最高，兒茶素含量最低。

2.2 α-生育酚含量

α-生育酚標準品的質(zhì)量濃度為1.61 μg/mL，在本試驗的色譜條件下峰型較好。以峰面積（mAU）為縱坐標，含量（μg）為橫坐標進行線性回歸，得α-生育酚的線性方程為y=268.51x-13.01，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9，峰面積和含量之間呈正相關(guān)，線性關(guān)系良好。計算3次進樣測定的α-生育酚的峰面積平均值為165.70 mAU，根據(jù)上述線性方程計算得橄欖油樣品中α-生育酚的含量為166.39 μg/g。

2.3 豆甾醇和β-谷甾醇含量

在混合標準品溶液中，甾醇類化合物的質(zhì)量濃度分別為豆甾醇1 170.68 μg/mL、β-谷甾醇890.36 μg/mL，以峰面積（mAU）為縱坐標，甾醇類化合物的含量（μg/g）為橫坐標進行線性回歸，得甾醇類化合物的線性方程和相關(guān)系數(shù)具體見表3，得出各物質(zhì)的峰面積和濃度之間呈良好的線性關(guān)系。

經(jīng)計算，3次進樣測定的樣品橄欖油中，豆甾醇和β-谷甾醇的峰面積平均值為1 138.92 mAU和817.57 mAU，根據(jù)表3中線性方程計算得橄欖油樣品中甾醇類化合物的含量分別為豆甾醇492.03 μg/g，β-谷甾醇822.90 μg/g。

2.4 脂肪酸組成

利用GC-MS技術(shù)，對樣品橄欖油的脂肪酸組成進行分析，計算各成分的相對含量（表4）。結(jié)果表明，樣品橄欖油主要由10種脂肪酸組成，其中相對含量較高的4種脂肪酸分別是棕櫚酸（15.5%±0.17%）、硬脂酸（1.7%±0.09%）、油酸（63.7%±0.78%）和亞油酸（9.2%±0.71%），10種脂肪酸的相對含量均在國際橄欖油理事會制定的標準范圍內(nèi)。

3 結(jié)論與討論

本研究的試驗結(jié)果表明，涼山州引進油橄欖初榨油的4種多酚類物質(zhì)（沒食子酸、羥基酪醇、兒茶素、阿魏酸）、α-生育酚、豆甾醇和β-谷甾醇的含量均較高；樣品橄欖油主要由10種脂肪酸組成，其相對含量均在國際橄欖油理事會制定的標準范圍內(nèi)，其中亞油酸含量為9.20%，超過了世界衛(wèi)生組織（WHO）對保健型營養(yǎng)油脂的亞油酸含量8.00%[8]。因此，涼山州引進油橄欖初榨油具有較好的品質(zhì)，達到了優(yōu)質(zhì)保健型食用油的標準，值得推廣食用。

4 參考文獻

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