卜鑫玨，張 濤，王 馳，夏喜堅(jiān)，陳國松（1.重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，重慶 400016；.福安集團(tuán)重慶禮邦藥物開發(fā)有限公司，重慶 40111）

鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及無定型對制劑制備的影響

卜鑫玨1＊，張 濤2，王 馳1#，夏喜堅(jiān)2，陳國松2（1.重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，重慶 400016；2.福安集團(tuán)重慶禮邦藥物開發(fā)有限公司，重慶 401121）

目的：研究鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及無定型對制劑制備的影響，為其制劑開發(fā)及一致性評價(jià)提供理論基礎(chǔ)。方法：采用X-射線粉末衍射（XRD）、紅外分光光度（IR）和差式掃描量熱（DSC）法鑒定鹽酸樂卡地平的3種晶型；采用XRD法比較粉粹、研磨、加壓工藝，濕法制粒中黏合劑溶劑（水、乙醇）和干燥溫度（50、60、70℃）對鹽酸樂卡地平3種晶型穩(wěn)定性的影響；比較3種晶型鹽酸樂卡地平片在水、鹽酸、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液4種介質(zhì)中的體外溶出度。結(jié)果：XRD顯示，Ⅰ、Ⅱ晶型均有特征衍射峰，且2 θ值不一致，無定型無特征衍射峰；IR顯示，3種晶型具有不同的吸收強(qiáng)度和吸收峰數(shù)目；DSC顯示，Ⅰ、Ⅱ晶型分別在194.6、207.3℃有明顯吸熱峰，無定型在86.1℃有明顯吸熱峰、299.8℃有放熱峰。粉粹、研磨、加壓及干燥溫度對3種晶型轉(zhuǎn)變均無影響；濕法制粒時(shí)水對晶型轉(zhuǎn)變無影響，乙醇會引起Ⅰ晶型的晶型轉(zhuǎn)變。除在鹽酸中Ⅰ晶型與Ⅱ晶型片比較f2＝68外，4種介質(zhì)中3種晶型鹽酸樂卡地平片溶出度兩兩比較的f2均小于50。結(jié)論：XRD、IR、DSC法均能鑒定鹽酸樂卡地平的3種晶型。用Ⅰ晶型制備鹽酸樂卡地平片時(shí)，濕法制粒應(yīng)避免使用乙醇作為黏合劑溶劑，建議使用水。不同晶型會影響所制鹽酸樂卡地平片的體外溶出度。

鹽酸樂卡地平；Ⅰ晶型；Ⅱ晶型；無定型；鑒定；穩(wěn)定性；體外溶出

近年來，國際上對藥物的多晶型現(xiàn)象十分重視，藥品的不同晶型對藥品的臨床有效性、安全性、藥品質(zhì)量都有影響[1]。鹽酸樂卡地平屬于第三代二氫吡啶類鈣離子拮抗藥，是生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)（BCS）Ⅱ類藥品，已于2010年在中國上市，相對分子量為648.2。鹽酸樂卡地平口服吸收好，藥動學(xué)參數(shù)tmax為1.5～3 h、t1/2β為2～5 h，適用于輕、中度高血壓的治療，具有起效平緩、無耐受性、作用持久等特點(diǎn)[2]。

目前已發(fā)現(xiàn)鹽酸樂卡地平的晶型有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ晶型及無定型，其中無定型不穩(wěn)定，但溶解度高；Ⅰ、Ⅱ晶型較其他晶型穩(wěn)定，且Ⅱ晶型比Ⅰ晶型更穩(wěn)定，但其溶解性不如Ⅰ晶型。本文對鹽酸樂卡地平的Ⅰ、Ⅱ晶型及無定型進(jìn)行鑒定、穩(wěn)定性、體外溶出等研究，以期為鹽酸樂卡地平的制劑開發(fā)及一致性評價(jià)提供理論基礎(chǔ)。鹽酸樂卡地平的化學(xué)結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 鹽酸樂卡地平的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig 1 Chemical structure of lercanidipine hydrochloride

1 材料

1.1 儀器

LC-20AD高效液相色譜儀、XRD-6000粉末衍射儀、傅里葉紅外光譜（IR）儀、DTG-60H差式掃描量熱（DSC）儀（日本島津公司）。

1.2 藥品與試劑

鹽酸樂卡地平原料藥（Ⅰ晶型，批號：s160501，純度：98.8%；Ⅱ晶型，批號：s160504，純度：98.9%；無定型，批號：s160509，純度：98.8%）和鹽酸樂卡地平對照品（Ⅱ晶型，批號：s160528，純度：98.7%，水分：0.53%）

均由福安集團(tuán)重慶禮邦藥物開發(fā)有限公司提供；聚山梨酯80（重慶川東化工有限公司）；微晶纖維素（FMC）、乳糖（DMV）、羧甲基淀粉鈉（CMS-Na）均購自法國羅蓋特公司；聚乙烯吡咯烷酮（PVP）K30（美國亞什蘭公司）；硬脂酸鎂（安徽山河藥用輔料有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 含量測定

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Microspher C18（100 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.01 mol/L三乙胺溶液-乙酸銨（650∶350∶1，冰醋酸調(diào)pH至6.0）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：352 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μL。

2.1.2 專屬性 將空白輔料按比例制成空白片。取空白片和鹽酸樂卡地平片各10片，分別置于250 mL量瓶中，加0.01 mol/L鹽酸溶液25 mL，超聲使崩解，加甲醇100 mL，超聲并稀釋至刻度，搖勻，濾過；取續(xù)濾液2 mL，置于25 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為空白輔料溶液和供試品溶液。精密稱取鹽酸樂卡地平對照品10 mg，置于100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取10 mL，置于100 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜。結(jié)果表明，鹽酸樂卡地平的保留時(shí)間為（7.85±0.5）min，溶劑峰和輔料峰對其測定均無干擾，色譜圖見圖2。

圖2 高效液相色譜圖Fig 2 HPLC chromatograms

2.1.3 線性關(guān)系、定量限、精密度、回收率 分別將鹽酸樂卡地平對照品制備成質(zhì)量濃度為0.008 0、0.016 0、0.025 6、0.032 0、0.048 0 mg/mL的溶液，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以峰面積（A）對質(zhì)量濃度（c）作線性回歸，得回歸方程為A＝1×107c+3 563.8（r＝0.999 9），表明鹽酸樂卡地平檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為0.008 0～0.048 0 mg/mL。定量限為0.56×10－3mg/mL；精密度RSD為0.14%（n＝6）；高、中、低水平鹽酸樂卡地平溶液的回收率分別為99.7%、100.1%、98.6%（RSD分別為0.45%、0.21%、0.36%，n＝3）。

2.2 鑒定

2.2.1 XRD法 采用XRD法分析鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及無定型原料藥，掃描范圍（2 θ）：3.00～50.00°，掃描方式：連續(xù)掃描，管流：40 mA，管壓：40 kV，靶型：Cu，掃描速度：4.0 deg/min，結(jié)果見圖3。

圖3 XRD圖Fig 3 XRD diagram

由圖3可知，Ⅰ晶型的主要2 θ特征衍射峰分別位于5.34°、10.97°、14.17°、18.91°、21.50°、22.70°；Ⅱ晶型的主要2 θ特征衍射峰分別位于9.53°、14.72°、16.20°、19.07°、20.81°、23.57°；無定型的衍射圖譜為不規(guī)則圖形，無特征衍射峰。與專利文獻(xiàn)[3-4]中所載特征峰比較，可確定所測樣品分別為鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及無定型。這表明采用XRD法，根據(jù)特征峰的2 θ值可對鹽酸樂卡地平3種晶型進(jìn)行鑒定。

2.2.2 IR法 采用KBr壓片法制樣，IR法分析鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及無定型原料藥，光譜掃描范圍為4 000～ 400 cm－1，結(jié)果見圖4。

由圖4可知，Ⅱ晶型在1 701.1 cm－1、Ⅰ晶型在1 236.29 cm－1、無定型在3 500～3 250 cm－1處吸收峰有明顯區(qū)別，表明可采用IR法對鹽酸樂卡地平3種晶型進(jìn)行鑒定。這可能是因?yàn)辂}酸樂卡地平的3種晶型具有不同的晶格能，導(dǎo)致分子間作用力、作用方式及強(qiáng)度不同，從而造成吸收峰的締合、移動，使吸收強(qiáng)度及吸收峰數(shù)目發(fā)生變化[5]。

圖4 IR圖Fig 4 IR diagram

2.2.3 DSC法 分別取鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及無定型原料藥各5 mg于鋁坩堝中，采用DSC法進(jìn)行分析。以空白鋁坩堝為對照，升溫速度：10℃/min，氣氛：氮?dú)猓?0 mL/min），升溫范圍：30～350℃，結(jié)果見圖5。

圖5 DSC圖Fig 5 DSC diagram

由圖5可知，鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型分別在194.6℃和207.3℃處有明顯吸熱峰，均為熔點(diǎn)溫度；無定型在86.1℃有明顯吸熱峰，為熔點(diǎn)溫度，在299.8℃有放熱峰，表明其化學(xué)結(jié)構(gòu)已被破壞。這表明采用DSC法可對鹽酸樂卡地平3種晶型進(jìn)行鑒定。

2.3 穩(wěn)定性考察

2.3.1 粉碎、研磨和加壓對晶型的影響 稱取適量鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及無定型原料藥，分別進(jìn)行氣流粉碎（粉碎壓力：4 kg，進(jìn)料壓力：5 kg）、研磨（瑪瑙研缽內(nèi)研磨0.5 h）和壓片（硬度約為10 kg）后取樣，采用XRD法進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，經(jīng)處理后鹽酸樂卡地平無定型的XRD圖譜均為不規(guī)則圖形，無特征衍射峰出現(xiàn)；Ⅰ、Ⅱ晶型2 θ值的測定結(jié)果見表1。

由表1可知，Ⅰ、Ⅱ晶型經(jīng)處理后2 θ值與處理前比較無明顯變化，說明在上述處理?xiàng)l件下3種晶型均穩(wěn)定，未發(fā)生晶型轉(zhuǎn)變。

表1 經(jīng)粉碎、研磨和加壓后鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型2 θ值的測定結(jié)果Tab 1 Determination results of 2 θ ofⅠ，Ⅱcrystal formsoflercanidipinehydrochlorideafter crushing，grinding and pressing

2.3.2 濕法制粒對晶型的影響 （1）黏合劑溶劑水、乙醇的影響。將鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及無定型原料藥分別與輔料（DMV、FMC、CMS-Na）按一定比例（不含硬脂酸鎂）過篩混合均勻，分別以1%PVP K30水溶液、1% PVP K30乙醇溶液為黏合劑制備軟材，過30目制粒，60℃烘干。將所得顆粒取樣，進(jìn)行XRD法分析。結(jié)果顯示，經(jīng)處理后無定型的XRD圖譜均為不規(guī)則圖形，無特征衍射峰出現(xiàn)；Ⅰ、Ⅱ晶型2 θ值的測定結(jié)果見表2。

表2 水、乙醇處理后鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型2 θ值的測定結(jié)果Tab 2 Determination results of 2θ ofⅠ，Ⅱcrystal forms of lercanidipine hydrochloride after treated by water and ethanol

由表2可知，以PVP K30水溶液為黏合劑時(shí)，3種晶型均未發(fā)生晶型轉(zhuǎn)變；以PVP K30乙醇溶液為黏合劑時(shí)，Ⅰ晶型發(fā)生晶型轉(zhuǎn)變，無定型與Ⅱ晶型較穩(wěn)定。

（2）干燥溫度。將以PVP K30水溶液制得的鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型及無定型顆粒，分別于50、60、70℃下烘干，干燥失重控制在2%。將所得的顆粒取樣，進(jìn)行XRD法分析。結(jié)果顯示，經(jīng)干燥后無定型的XRD圖譜均為不規(guī)則圖形，無特征衍射峰出現(xiàn)；Ⅰ、Ⅱ晶型2 θ值的測定結(jié)果見表3。

表3 經(jīng)3種溫度干燥后鹽酸樂卡地平Ⅰ、Ⅱ晶型2 θ值的測定結(jié)果Tab 3 Determination results of 2θ ofⅠ，Ⅱ crystal forms oflercanidipine hydrochloride after dried by 3 kinds of temperature

?

由表3可知，Ⅰ晶型與Ⅱ晶型經(jīng)處理后2 θ值無明顯差異，說明在上述條件下3種晶型均未發(fā)生晶型轉(zhuǎn)變。

2.4 體外溶出度考察

2.4.1 溶出介質(zhì) 根據(jù)《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》，選用常規(guī)的4種溶出介質(zhì)，分別為水、0.1 mol/L鹽酸溶液、pH 4.5醋酸鹽緩沖液、pH 6.8磷酸鹽緩沖液。由于鹽酸樂卡地平原料藥在上述4種介質(zhì)中溶解度小，為保證其在溶液中溶解完全且制得的片劑在溶出介質(zhì)中有良好的溶解梯度，故向4種溶出介質(zhì)中加入0.3%的聚山梨酯80。

2.4.2 溶出方法 按專利處方[6]，在同一工藝條件下，采用濕法制粒，片質(zhì)量為100 mg，壓片硬度控制在4～6 kg。照溶出度測定法，設(shè)溶出介質(zhì)為900 mL，轉(zhuǎn)速為50 r/min，介質(zhì)溫度為（37±0.5）℃，依法操作。分別在5、10、15、30、45 min取樣，按“2.1.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，并采用外標(biāo)法計(jì)算溶出度（%）。根據(jù)《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》，采用非模型依賴的相似因子（f2）法比較3種晶型制得的鹽酸樂卡地平片在4種介質(zhì)中的溶出度[7-8]，結(jié)果見表4。

表4 Ⅰ、Ⅱ晶型和無定型鹽酸樂卡地平片的體外溶出結(jié)果Tab 4 Results of in vitro dissolution ofⅠ，Ⅱcrystal and amorphous forms of Lercanidipine hydrochloride tablet

美國FDA規(guī)定f2值在50～100時(shí)，可以認(rèn)為兩種處方制劑在同一釋藥條件下或同一處方制劑在不同釋藥條件下釋藥無差別[9-10]。由表4中f2值可知，除在鹽酸中Ⅰ晶型與Ⅱ晶型比較無差別外，3種晶型所制備片劑在4種溶出介質(zhì)中的其他溶出行為均有明顯差別。

3 討論

本文采用XRD、IR、DSC法對鹽酸樂卡地平的3種晶型進(jìn)行鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，晶型不同，藥物分子在晶格上排列方式不同，從而造成晶格內(nèi)部分子間作用力的差異，引起多晶型藥物不同晶型間各種理化性質(zhì)的變化。這提示應(yīng)加強(qiáng)原料藥的理化性質(zhì)、參比制劑的處方組成及制劑工藝的研究，避免由于主成分理化性質(zhì)不同或制劑因素所造成的療效差異。對原料藥的晶型進(jìn)行比較，保證仿制藥與原研藥的原料藥在療效上具有等效性[11]。

鹽酸樂卡地平3種晶型所制得片劑在4種溶出介質(zhì)中溶出行為大多數(shù)均有明顯差異，提示需要建立溶出度等制劑質(zhì)量檢查指標(biāo)與不同晶型之間的相關(guān)關(guān)系。

固體藥物大多是分子晶體，其晶格能差較小，容易發(fā)生轉(zhuǎn)型。對于某些難溶性藥物，由于穩(wěn)定型的生物利用度低，不能滿足臨床需要；而亞穩(wěn)定型表觀溶解度高，可得到較高的生物利用度，因而選擇亞穩(wěn)定型作為目標(biāo)晶型。這時(shí)，了解并掌握影響晶體穩(wěn)定性因素，對合理設(shè)計(jì)處方、制訂工藝方案，最大限度地減少低效、無效晶型的產(chǎn)生，使亞穩(wěn)定型穩(wěn)定化具有重要意義。同時(shí)，藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中必須建立能區(qū)分其晶型的溶出度試驗(yàn)方法，從而保證藥品質(zhì)量及臨床藥效，為仿制藥一致性評價(jià)打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)[12]。

[1] 呂揚(yáng)，杜冠華.晶型藥物[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：1-11.

[2] 韓寒.新一代二氫吡啶類鈣通道阻滯劑：鹽酸樂卡地平合成方法的研究[D].沈陽：沈陽藥科大學(xué)，2001.

[3] 劉意林，祁偉，楊琰，等.一種無定型鹽酸樂卡地平及其制備方法：中國，CN102558032[P].2012-07-11.

[4] 博尼法斯歐，卡姆帕納，德艾斯，等.新的鹽酸樂卡地平結(jié)晶多晶型物及其制備方法：中國，CN1538957[P]. 2004-10-20.

[5] 陳菲菲，滕再進(jìn)，束儉輝，等.鹽酸厄洛替尼晶型研究[J].藥學(xué)與臨床研究，2015，23（3）：249-253.

[6] Leonardi A，Sartani A，Sironi G，et al.Combination therapy for hypertension：US，20030180355[P].2003-09-23.

[7] 唐了平，產(chǎn)運(yùn)霞，馬貴紅，等.阿齊沙坦片國產(chǎn)品溶出度試驗(yàn)方法的建立及與原研品體外溶出行為比較[J].中國藥房，2014，25（17）：1609-1611.

[8] 謝沐風(fēng).溶出曲線相似性的評價(jià)方法[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2009，40（4）：308-310.

[9] 林蘭，牛劍釗，許明哲，等.國外仿制藥一致性評價(jià)比較分析[J].中國新藥雜志，2013，22（21）：2470-2474.

[10] Food and Drug Administration.Guidance for industry：dissolution testing of immediate release solid oral dosage forms[EB/OL].[2016-05-24].http：//www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/ Guidances/ucm070237.pdf.

[11] 張濤，趙先英.藥物研究和生產(chǎn)過程中的多晶型現(xiàn)象[J].中國新藥與臨床雜志，2003，22（10）：615-620.

[12] 陳桂良，李君嬋，彭興盛，等.藥物晶型及其質(zhì)量控制[J].藥物分析雜志，2012，32（8）：1503-1508.

（編輯：鄒麗娟）

Effects ofⅠ，ⅡCrystal and Amorphous Forms of Lercanidipine Hydrochloride on the Preparation

BU Xinjue1，ZHANG Tao2，WANG Chi1，XIA Xijian2，CHEN Guosong2（1.College of Pharmacy，Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China；2.Chongqing Lybon Pharm-tech Co.，Ltd.，F(xiàn)uan Pharmaceutical Group，Chongqing 401121，China）

OBJECTIVE：To study the effects ofⅠ，Ⅱ crystal and amorphous forms of lercanidipine hydrochloride on the preparation，and provide theoretical basis for its development and consistency evaluation.METHODS：X-ray powder diffraction（XRD），infrared spectrophotometry（IR）and differential scanning calorimetry（DSC）were adopted to identify the 3 crystal forms of lercanidipine hydrochloride.XRD was used to compare the effects of crushing，grinding，pressing technology，wetting granulation，adhesive solvents（water，ethanol）and drying temperature（50，60，70℃）on stability of 3 crystal forms of lercanidipine hydrochloride；the dissolution in vitro in water，hydrochloride，pH 4.5 acetate buffer，pH 6.8 phosphate buffer were compared among 3 crystal forms of Lercanidipine hydrochloride tablet.RESULTS：XRD showed bothⅠ，Ⅱcrystal forms had characteristic diffraction peak with inconsistent 2 θ values，amorphous had no characteristic diffraction peak；IR showed 3 crystal forms had different absorption intensity and absorption peak number；DSC showedⅠ，Ⅱ crystal forms had obvious endothermic peak in 194.6℃，207.3℃，respectively，amorphous had obvious endothermic peak in 86.1℃and exothermic peak in 299.8℃.Crushing，grinding，pressing and drying temperature had no effects on the stability of 3 crystal forms；water had no effect on the stability of crystal in wetting granulation，ethanol may cause the change ofⅠcrystal form.Except for the comparison betweenⅠ，Ⅱ crystal forms in hydrochloride（f2＝68），the dissolution f2of 3 crystal forms in 4 kinds of medium were lower than 50.CONCLUSIONS：XRD，IR，DSC methods can identify the 3 crystal forms of Lercanidipine hydrochloride tablet.When preparing lercanidipine hydrochloride byⅠcrystal form，wetting granulation should avoid using ethanol as a adhesive solvent，instead of water.Different crystal forms can affect the dissolution in vitro of prepared Lercanidipine hydrochloride tablet.

Lercanidipine hydrochloride；Ⅰcrystal form；Ⅱ crystal form；Amorphous；Identification；Stability；Dissolution in vitro

O742+.4；R972+.4

A

1001-0408（2017）10-1346-04

2016-06-16

2016-10-09）

＊藥師，碩士研究生。研究方向：靶向制劑。電話：023-61213572。E-mail：719001823@qq.com

#通信作者：副教授，碩士生導(dǎo)師，博士。研究方向：靶向制劑。電話：023-61213572。E-mail：1006653936@qq.com

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.10.13