王影超 廖 敏 姜 蓮 王海寧貴州省食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 貴陽 550004

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頭痛寧膠囊顯微鑒別及其落新婦苷HPLC法含量測(cè)定

王影超 廖 敏 姜 蓮 王海寧
貴州省食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 貴陽 550004

目的：提高頭痛寧膠囊的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用顯微鑒別方法對(duì)天麻進(jìn)行定性鑒別；用高效液相色譜法對(duì)土茯苓落新婦苷為指標(biāo)進(jìn)行定量檢測(cè)。色譜條件：用C18柱，以乙腈-0.1%冰醋酸(15∶85)為流動(dòng)相，流速1.0mL/min，檢測(cè)波長為291nm。結(jié)果：顯微鑒別可鑒定制劑中的天麻；含量測(cè)定中落新婦苷的平均回收率為100.14%，RSD為1.8%。結(jié)論：顯微鑒別特征性好，易于鑒別；HPLC法簡便快捷、重現(xiàn)性好，能有效的控制頭痛寧膠囊的質(zhì)量。

頭痛寧膠囊；定性定量；天麻；落新婦苷；顯微鑒別；高效液相色譜法

頭痛寧膠囊的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)為國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-11211(ZD-1211)-2002，處方由土茯苓、天麻、制何首烏、當(dāng)歸、防風(fēng)、全蝎等組成，具有熄風(fēng)滌痰、逐瘀止痛的功效，臨床用于偏頭痛，緊張性頭痛屬痰瘀阻絡(luò)癥。方中天麻息風(fēng)止痙，平抑肝陽，祛風(fēng)通絡(luò)[1]，廣泛用于頭痛眩暈的治療，為方中主藥之一。方中天麻為生藥粉投料，且天麻的顯微特征明顯，采用顯微鑒別操作簡便，結(jié)果可靠。土茯苓也為方中主藥之一，現(xiàn)代研究表明[2]，土茯苓含多種化學(xué)成分，有糖類、有機(jī)酸類、苯丙素類、黃酮和黃酮苷類、甾醇類、皂苷類及揮發(fā)油等，具有解毒利濕、涼血解毒、祛風(fēng)止痛的功效。其中落新婦苷為其主要化學(xué)成分，與土茯苓臨床療效一致，本研究采用HPLC法對(duì)制劑中落新婦苷進(jìn)行含量測(cè)定，能保證更有效地對(duì)頭痛寧膠囊進(jìn)行質(zhì)量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器 BX51顯微鏡(奧林巴斯)；安捷倫1260高效液相色譜儀；KQ-500DB型數(shù)控超聲波提取儀(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 材料 頭痛寧膠囊(陜西步長制藥有限公司)；落新婦苷對(duì)照品(批號(hào)：111798-201303，含量以92.4%計(jì)，中國藥品生物制品檢定院)。甲醇(色譜純，美國天地有限公司)、乙腈(色譜純，美國天地有限公司)、冰醋酸(分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司)、水(純化水、UPW-50N型超凈水器制備超純水)，其余試劑均為分析純。

2 顯微鑒別

取本品，置顯微鏡下觀察：草酸鈣針晶成束或散在，可見螺紋導(dǎo)管、網(wǎng)紋導(dǎo)管和環(huán)紋導(dǎo)管(天麻[1])。見圖1。

3 含量測(cè)定的方法與結(jié)果

3.1 測(cè)定波長的選擇 精密稱取適量落新婦苷對(duì)照品溶于60%甲醇溶液，在200～400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描波長，落新婦苷在291nm處有最大吸收，以此為檢測(cè)波長可獲得較高的靈敏度和良好的選擇性，故選擇291nm為檢測(cè)波長[1]。

3.2 色譜條件 Agilent C18色譜柱(5μm，4.6mm×250mm)，流動(dòng)相：乙腈-0.1%冰醋酸(15∶85)，柱溫35℃，流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長291nm，進(jìn)樣量10μL。

3.3 供試品溶液的制備 取本品10粒內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇溶液25mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率35kHz)30min，放冷，用60%甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。同法制備缺土茯苓的陰性樣品溶液。

3.4 對(duì)照品溶液的制備 取落新婦苷對(duì)照品適量，精密稱定，加60%甲醇制成每1mL含50μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.5 方法學(xué)驗(yàn)證

3.5.1 線性關(guān)系考察 按上述色譜條件，精密吸取落新婦苷對(duì)照品(49.2769μg/mL)1、2、6、10、14、18、20μL依次注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得出線性回歸方程為：Y=2158.5X-1.4116，R=0.9999，表明落新婦苷在0.04928～0.9855μg的范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

3.5.2 回收率試驗(yàn) 取已測(cè)定含量的頭痛寧膠囊(批號(hào)：140506)(平均含量1.6523mg/g)0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入落新婦苷對(duì)照品溶液(0.03555mg/mL)25mL，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，并按上述色譜條件測(cè)定落新婦苷的含量，計(jì)算回收率，落新婦苷平均回收率100.14%，RSD=1.8%，表明本方法準(zhǔn)確度較好，結(jié)果見表1。

表1 落新婦苷回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù) (n=6)

3.5.3 重復(fù)性 取同一批號(hào)頭痛寧膠囊樣品(批號(hào)：140506)，按供試品溶液制備方法制備6份，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算結(jié)果，落新婦苷含量測(cè)定的平均值為1.6523mg/g，RSD為1.0%，表明本方法重復(fù)性較好。

3.5.4 精密度 精密吸取同一落新婦苷對(duì)照品溶液(49.2769μg/mL)10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，落新婦苷峰面積測(cè)定的平均值為1079，RSD為0.95%，表明本方法精密度較好。

3.5.5 專屬性 取頭痛寧膠囊樣品(批號(hào)：140506)及缺土茯苓的陰性樣品按供試品溶液制備方法制備樣品溶液及陰性樣品溶液，按上述色譜條件，分別取對(duì)照品溶液、樣品溶液、陰性樣品溶液注入液相色譜儀，樣品溶液色譜在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置有相應(yīng)的色譜峰，且陰性無干擾，表明本方法專屬性較好，見圖2。

3.5.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液在0、4、9、12、17、24h分別進(jìn)樣10μL，記錄色譜峰面積，落新婦苷平均峰面積為1475，RSD為0.88%，表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

3.6 樣品測(cè)定 按擬定的色譜條件，分別測(cè)定3批樣品，結(jié)果見表2。

表2 頭痛寧膠囊中落新婦苷含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

本試實(shí)驗(yàn)在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了1個(gè)顯微鑒別和1個(gè)含量測(cè)定，能較好的控制產(chǎn)品質(zhì)量。

本試驗(yàn)考察了不同濃度的甲醇和乙醇為提取溶劑進(jìn)行超聲及回流提取對(duì)比研究，結(jié)果表明，本法選擇60%甲醇超聲提取30min效果最好。

本試驗(yàn)考察了不同溶劑系統(tǒng)甲醇-0.1%冰醋酸溶液[2]、乙腈-水-磷酸[3]、乙腈-0.1%冰醋酸為流動(dòng)相，結(jié)果表明，流動(dòng)相為乙腈-0.1%冰醋酸(15∶85)時(shí)，供試品中落新婦苷與其他雜質(zhì)峰能有效分離，峰形對(duì)稱。

本試驗(yàn)考察了不同品牌色譜柱對(duì)比研究，結(jié)果表明不同品牌十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱對(duì)含量測(cè)定無影響。

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2]王建平，張海燕，傅旭春．土茯苓的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J]．海峽藥學(xué)，2013，25(1):42-44.

[3]陳幸，李彬，黎萬壽，等．HPLC法測(cè)定土茯苓中落新婦苷的含量[J]．藥物分析雜志，2004，24(4):437-439．

The Research of Microscopical Identification and Content Determination (HPLC method) for Toutongning Capsule

WANG Yingchao LIAO Min JIANG Lian WANG Haining

Guizhou Institute for Food and Drug Control,Guiyang 550004,China

Objective To improve the quality control standard of Toutongning Capsule. Methods Adopting microscopic identification to make a qualitative identification of Gastrodiae Rhizoma.Using HPLC to determine Astilbin of Smilacis Glabrae Rhizoma.C18column was used with a mobile phase of acetonitrile-0.1%glacial acetic acid.The flow rate was 1.0 mL·min-1.The detection wavelength was at 291nm.Results Gastrodiae Rhizoma could be detected by microscopic identification.The average recovery of Astilbin was 100.14% withRSDof 1.8%.Conclusion Microscopic identification characteristic is good, easy to identify.The HPLC method is simple, good reproducibility, and can effectively control the quality of Toutongning Capsule.

Toutongning Capsule;Qualitative and Quantitative;Gastrodiae Rhizoma;Astilbin;Microscopic identification;HPLC

王影超(1987-)，女，漢族，本科，初級(jí)藥師，研究方向中藥、民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail:447406621@qq.com

R284.1

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1007-8517(2017)07-0018-03

2017-01-23 編輯：程鵬飛)