林春燕 董 媛 張赟華 任 潔 李忠瓊 張?chǎng)?周志宏1.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650000；.云南省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，云南 昆明 650000

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《中國(guó)藥典》(2015年版)蒲黃項(xiàng)下草蒲黃和蒲黃炭的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

林春燕1,2董 媛2張赟華2任 潔2李忠瓊2張?chǎng)?周志宏1*
1.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650000；2.云南省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，云南 昆明 650000

目的:完善2015年版《中國(guó)藥典》蒲黃項(xiàng)下草蒲黃和蒲黃炭的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法:收集整理草蒲黃和蒲黃炭現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)，增訂藥典中僅來(lái)源處提到的草蒲黃的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增訂了性狀、顯微鑒別、薄層鑒別、水分、總灰分和含量測(cè)定項(xiàng)目，同時(shí)增訂蒲黃炭的總灰分、雜質(zhì)項(xiàng)目。結(jié)果:草蒲黃增加的性狀、顯微鑒別、薄層鑒別、水分、總灰分、雜質(zhì)和含量測(cè)定項(xiàng)目，蒲黃炭增加的雜質(zhì)、總灰分等項(xiàng)目能有效反映草蒲黃與蒲黃炭的質(zhì)量情況；草蒲黃薄層色譜中斑點(diǎn)清晰，專屬性強(qiáng)；香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷分別在 0.048～0.951μg(r=0.9999) 、0.046～0.920μg(r=0.9999) 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率分別為 99.06% (RSD為1.25%) 、98.23%(RSD為1.40%)。結(jié)論:修訂后的標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確有效，可用于草蒲黃與蒲黃炭的質(zhì)量控制。

草蒲黃；蒲黃炭；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高

蒲黃為香蒲科植物水燭香蒲TyphaangustifoliaL.、東方香蒲TyphaorientalisPresl或同屬植物的干燥花粉。蒲黃性甘，平。歸肝、心包經(jīng)。具有止血，化瘀，通淋的功效[1]。其主要含有甾類成分、黃酮類成分、酸性成分等，其中黃酮類成分香蒲新苷和異鼠李素-3-O新橙皮苷為主要的質(zhì)控指標(biāo)[2]。文獻(xiàn)報(bào)道[3]，蒲黃止血化瘀作用明顯，對(duì)凝血過(guò)程有顯著影響，同時(shí)蒲黃提取液能改善心血管系統(tǒng)微循環(huán)，降血脂，對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化也有一定的改善作用。在臨床上主要用于治療心血管疾病，眼出血以及婦科疾病。

草蒲黃與蒲黃植物來(lái)源一致，同為中藥蒲黃入藥。有效成分基本相同[4]、藥理作用、臨床功效主治也基本一致。二者不同之處在于，蒲黃為純花粉，而草蒲黃則為帶有雄花的花粉，即花藥、花絲和花粉的混合物[1,5]。草蒲黃雖收載于藥典蒲黃項(xiàng)下，但無(wú)任何質(zhì)量控制指標(biāo)；收載于寧夏、甘肅等多個(gè)地方標(biāo)準(zhǔn)[6-9]，但同樣存在項(xiàng)目設(shè)置不全的問(wèn)題，見表1。故對(duì)藥典中草蒲黃質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行增訂研究，解決草蒲黃標(biāo)準(zhǔn)缺失的問(wèn)題。

蒲黃炭為“凈蒲黃照炒炭法(附錄Ⅱ D)炒至棕褐色”的炮制品。在功效方面增強(qiáng)了蒲黃的止血作用，偏于涼血止血。蒲黃炭作為飲片收載于藥典蒲黃項(xiàng)下，但與蒲黃藥材相比檢驗(yàn)項(xiàng)目較少，缺少雜質(zhì)、灰分等質(zhì)量控制關(guān)鍵性指標(biāo)，所以對(duì)藥典中蒲黃炭的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究增訂。

表1 各地草蒲黃標(biāo)準(zhǔn)匯總

1 儀器與材料

1.1 儀器 Aglient 1260高效液相色譜儀， TB-215D電子分析天平。

1.2 材料 香蒲新苷(批號(hào)：111573-201405)、異鼠李素-3-O-新橙皮苷對(duì)照品(批號(hào)：111571-201205)購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

草蒲黃樣品4批，蒲黃炭樣品11批，均來(lái)自2015年藥材及飲片國(guó)家評(píng)價(jià)性抽樣。樣品均由云南省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院中藥所張?chǎng)嵥L(zhǎng)鑒定，為草蒲黃藥材及蒲黃炭飲片，來(lái)源為香蒲科植物水燭香蒲TyphaangustifoliaL.、東方香蒲TyphaorientalisPresl或同屬植物的干燥花粉。見表2。

表2 樣品信息匯總表

2 草蒲黃

2.1 性狀 本品為花粉、花藥及花絲的混合品，花粉占多數(shù)，呈黃色粉末，細(xì)膩，手捻有光滑感，易附于手指上?；ㄋ幎叹€狀，長(zhǎng)0.2～0.3cm，棕黃色，具四棱，棱槽明顯，頂端呈褐色至黑褐色，手捻易碎，有的花藥已碎斷?；ńz絲狀，不規(guī)則彎曲或纏繞成團(tuán)，棕黃色，手捻易成團(tuán)。氣微，味淡[1,7]。

2. 2 顯微鑒別 取草蒲黃粉末，置顯微鏡下觀察：本品粉末黃色?；ǚ哿ｎ悎@形或橢圓形，直徑17～29μm，表面有網(wǎng)狀雕紋，周邊輪廓線光滑，呈凸波狀或齒輪狀，具單孔，不甚明顯，花藥、花絲薄壁細(xì)胞中含有草酸鈣針晶?；ǚ勰覂?nèi)壁細(xì)胞具螺旋狀紋理[1, 7]。

2. 3 薄層色譜鑒別 取本品2g，加80%乙醇50mL，冷浸24h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?mL使溶解，濾過(guò)，濾液加水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次5mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)右掖?mL使溶解作為供試品溶液。另取異鼠李素-3-O-新橙皮苷對(duì)照品、香蒲新苷對(duì)照品，加乙醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(2015版藥典四部0502)試驗(yàn)吸取上述兩種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以丙酮-水(1∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)[1,5,10]。見圖2。

2.3.1 點(diǎn)樣量的考察 考察對(duì)照品的不同點(diǎn)樣量，點(diǎn)樣量為1～3μL時(shí)都能取得較好的效果，4uL時(shí)已經(jīng)有過(guò)載的現(xiàn)象，故樣品點(diǎn)樣量選擇為2μL。

2.3.2 檢測(cè)限的考察 當(dāng)大于或者等于混合對(duì)照溶液(香蒲新苷濃度為0.1017 mg/mL，異鼠李素-3-O-新橙皮苷濃度為0.1052 mg/mL)濃度時(shí)，可見香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷斑點(diǎn)。故定香蒲新苷檢出限為0.1μg，異鼠李素-3-O-新橙皮苷檢出限為0.2μg。

2.4 水分 據(jù)藥典2015版通則0832第二法測(cè)定，結(jié)果見表3。4批草蒲黃水分平均值為8.0%。草蒲黃與蒲黃植物來(lái)源一致，水分限度可參照藥典中蒲黃藥材水分限度(不得過(guò)13.0%)制定，結(jié)果顯示4批草蒲黃水分均在該限度范圍內(nèi)。故草蒲黃水分限度定為：不得過(guò)13.0%。

2.5 總灰分 據(jù)藥典2015版通則2302測(cè)定，結(jié)果見表3。4批草蒲黃總灰分平均值為7.9%。草蒲黃與蒲黃植物來(lái)源一致，總灰分限度可參照藥典中蒲黃藥材總灰分限度(不得過(guò)10.0%)制定，結(jié)果顯示4批草蒲黃總灰分均在該限度范圍內(nèi)。故草蒲黃總灰分限度定為：不得過(guò)10.0%。

2.6 酸不溶性灰分 據(jù)藥典2015版通則2302測(cè)定，結(jié)果見表3。4批草蒲黃酸不溶性灰分平均值為1.4%。草蒲黃與蒲黃植物來(lái)源一致，酸不溶性灰分限度可參照藥典中蒲黃藥材酸不溶性灰分限度(不得過(guò)4.0%)制定，結(jié)果顯示4批草蒲黃酸不溶性灰分均在該限度范圍內(nèi)。故草蒲黃酸不溶性灰分限度定為：不得過(guò)4.0%。

表3 草蒲黃水分、總灰分、酸不溶性灰分的測(cè)定結(jié)果

2.7 含量測(cè)定

2.7.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱為Agilent ZORBAX C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；以乙腈-0.05%磷酸溶液(15∶85)為流動(dòng)相，等度洗脫,洗脫時(shí)間為35min；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。流速為1.0mL/min，柱溫35℃；進(jìn)樣量5μL。理論板數(shù)按異鼠李素-3-O-新橙皮苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000[1,7,10-11]。

2.7.2 對(duì)照品溶液的制備 取異鼠李素-3-O-新橙皮苷對(duì)照品、香蒲新苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL各含50μg的溶液，即得[8]。

2.7.3 供試品溶液的制備 取本品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定重量，冷浸12h后加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.7.4 專屬性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果表明香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷對(duì)照品分離度良好，空白溶劑無(wú)干擾。見圖3。

2.7.5 線性關(guān)系考察 精密稱取香蒲新苷0.01226g，異鼠李素-3-O-新橙皮苷0.01234g。分別至50mL容量瓶，加甲醇溶解，并定容至刻度，搖勻，得儲(chǔ)備液，濃度分別為香蒲新苷237.84400μg/mL，異鼠李素-3-O-新橙皮苷230.01760μg/mL。分別精密量取5mL至同一25mL容量瓶，加甲醇定容至刻度，搖勻，得混合對(duì)照品溶液，濃度為香蒲新苷47.56880μg/mL，異鼠李素-3-O-新橙皮苷46.00352μg/mL。分別精密吸取各對(duì)照品溶液1、4、8、10、20μL注入液相色譜儀，依法測(cè)定，以峰面積積分值Y為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的對(duì)照品進(jìn)樣量X(μg) 為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。香蒲新苷回歸方程為 y=1575.8x-25.195(r=0. 9999),在0.048～0.951μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；異鼠李素-3-O-新橙皮苷的直線回歸方程為y=2008.2x-24.698 (r=0. 999 9),在 0.046～0.920μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣 6 次，依法測(cè)定，結(jié)果香蒲新苷的RSD為0.39% 、異鼠李素-3-O-新橙皮苷的RSD為 0.40%,表明本法進(jìn)樣精密度良好。

2.7.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一份供試品溶液(樣品2),分別于0、6、12、18、24、30、36、42、48h進(jìn)樣，依法測(cè)定峰面積，結(jié)果香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷峰面積的RSD分別為 0.56%、0.16%,表明制備的供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)的供試品(樣品2)適量，按“2.7.3”項(xiàng)下方法制備 6 份供試液，依法測(cè)定并計(jì)算香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷的總量，結(jié)果 6 份供試品的平均含量為0.58%，其RSD為0.57%，表明本法重復(fù)性良好。

2.7.9 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批已知含量的供試品(樣品2) 6 份，精密稱定，每份約0.25g，分別精密加入香蒲新苷對(duì)照品溶液( 濃度為237.84400μg/mL)2.7mL和異鼠李素-3-O-新橙皮苷(濃度為230.01760μg/mL) 3.2mL，低溫蒸干，按“2.7.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷的含量并分別計(jì)算回收率，結(jié)果香蒲新苷的平均回收率為99.06%，其RSD為 1.25%；異鼠李素-3-O-新橙皮苷的平均回收率為98.25%，其RSD為1.40%。結(jié)果表明回收率良好。

2.7.10 樣品測(cè)定 取4批樣品，按 “2. 7. 3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算。另外，蒲黃花粉粒大小為17～29μm，能夠通過(guò)九號(hào)篩，而其他植物組織粉碎后也較難通過(guò)九號(hào)篩。所以測(cè)定樣品能通過(guò)9號(hào)篩的百分比能大概了解花粉在草蒲黃中所占比例。結(jié)果見表4。

表4 草蒲黃含量測(cè)定結(jié)果

3 蒲黃炭

3.1 雜質(zhì) 據(jù)藥典2015版通則2301測(cè)定，結(jié)果見表5，蒲黃炭雜質(zhì)不得過(guò)10.0%。

3.2 總灰分 據(jù)藥典2015版通則2302測(cè)定，結(jié)果見表5，蒲黃炭總灰分不得過(guò)10.0%[1,11]。

表5 蒲黃炭雜質(zhì)與灰分測(cè)定結(jié)果

2015版藥典中未對(duì)蒲黃炭飲片的總灰分和雜質(zhì)進(jìn)行控制，依據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，11批次蒲黃炭都符合規(guī)定，但是根據(jù)顯微觀察結(jié)果，多批蒲黃炭大量混雜非花粉類的物質(zhì)。

對(duì)11批次蒲黃炭樣品依據(jù)藥典方法進(jìn)行總灰分及雜質(zhì)的測(cè)定，結(jié)果顯示總灰分與雜質(zhì)測(cè)定結(jié)果高的樣品都為摻雜較多的樣品。如圖4，雜質(zhì)檢測(cè)結(jié)果高的樣品多為摻入花絲、花藥或其他未知植物組織的碎片，這些碎片一般較大難以通過(guò)七號(hào)篩。總灰分檢測(cè)結(jié)果高的樣品在顯微鏡下常見亮片狀物質(zhì)，疑似為無(wú)機(jī)物摻假，無(wú)機(jī)物在高溫下無(wú)法炭化，導(dǎo)致總灰分較高?？梢婋s質(zhì)和總灰分是蒲黃炭飲片質(zhì)量控制的兩個(gè)關(guān)鍵因素，必須進(jìn)行控制，故增訂了這兩個(gè)項(xiàng)目。由于蒲黃炭的炮制過(guò)程并不會(huì)對(duì)灰分，雜質(zhì)等項(xiàng)目產(chǎn)生很大影響，所以參考蒲黃藥材在2015版藥典中的限度，將限度值暫定為“雜質(zhì)不得過(guò)10.0%，總灰分不得過(guò)10.0%”。

4 討論

草蒲黃為花粉、花藥、花絲的混合品，故性狀和顯微鑒別項(xiàng)下應(yīng)有對(duì)花藥、花絲的描述。參考地方藥材標(biāo)準(zhǔn)，增加了對(duì)花藥、花絲的描述，考察樣品情況，與之相符。

鑒于草蒲黃與蒲黃同來(lái)源，薄層色譜鑒別和含量測(cè)定的方法應(yīng)該同樣適用于草蒲黃，故采用，并對(duì)這兩個(gè)方法進(jìn)行詳細(xì)的方法學(xué)驗(yàn)證，證明對(duì)于草蒲黃樣品的適用性。

本研究考察了三根不同商品規(guī)格的同類填料色譜柱(Welch C18柱(4.6mm×250mm)和Agilent C18(4.6mm×150mm))測(cè)定同一批草蒲黃樣品(樣2),結(jié)果兩種色譜柱的理論板數(shù)均大于10000，各主峰間的分離度良好，測(cè)得含量分別為0.584%、0.585%，其RSD為 0.15%，表明本色譜條件的耐用性良好。

由于草蒲黃為花粉、花絲和花藥的混合物，草蒲黃雜質(zhì)較蒲黃高屬正?，F(xiàn)象，同時(shí)4批草蒲黃樣品雜質(zhì)差異較大，抽自河南的樣品雜質(zhì)最高(達(dá)53%)，但香蒲新苷和異鼠李素-3-O-新橙皮苷的含量與其他批次草蒲黃相比并不低，表明雜質(zhì)不是草蒲黃質(zhì)量控制的關(guān)鍵因素。故未對(duì)草蒲黃的雜質(zhì)項(xiàng)進(jìn)行控制。

藥典中規(guī)定蒲黃含量測(cè)定結(jié)果為：“本品按干燥品計(jì)算，含異鼠李素-3-O-新橙皮苷(C28H32O16)和香蒲新苷(C34H42O20)的總量不得少于0.50%?！?，表4結(jié)果顯示，除1批次草蒲黃樣品的含量為0.42%偏低外， 其余樣品含量均高于0.5%。根據(jù)能通過(guò)9號(hào)篩的百分比，大略可知草蒲黃中所含花粉質(zhì)量均大于50%，考慮到不同來(lái)源的草蒲黃的含量差異及測(cè)定誤差，結(jié)合實(shí)測(cè)值，擬定草蒲黃按干燥品計(jì)算，含異鼠李素-3-O-新橙皮苷(C28H32O16)和香蒲新苷(C34H42O20)的總量不得少于0.25%。

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Study on the Quality Standard of Pollen Typhae with Staminate Flower and Carbo of Typhae Pollen in Chinese Pharmacopoeia (2015 Edition)

LIN Chunyan1,2DONG Yuan2ZHANG Yunhua2LI Zhongqiong2ZHANG Wenjie2ZHOU Zhihong1*

1. Yunnan University of TCM, Kunming 650000, China； 2.Yunnan Insitute for Food and Drug Control, Kunming 650000, China

Objective To improve the quality standard of Pollen Typhae with staminate flower and Carbonized Typhae Pollen .Methods the current standards of Pollen Typhae with staminate flower and Carbonized Typhae Pollen are collected.Descriptive Information,The micro-identification,TLC identification, the water inspection, the total ash inspection and HPLC determination of total contents of Typhaneoside and Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside in Pollen Typhae with staminate flower were added.At the same time, the total ash and impurity inspection in Carbonized Typhae Pollen were added. Results These added items of Pollen Typhae with staminate flower and Carbonized Typhae Pollen can effectively reflect their quality situation. The sports were fairly clear and visible in TLC of Pollen Typhae with staminate flower,The contents of Typhaneoside and Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside showed a good linear relationship in the range of 0.048 ～0.951μg (r= 0. 999 9) and 0.046 ～0.920μg(r=0. 999 9),respectively.The average recoveries were 99.06% withRSDof 1. 25% and 98.23% withRSDof 1.40%，respectively. Conclusion The revised standard is accurate，effective and can be usd to control the quality of Pollen Typhae with staminate flower and Carbonized Typhae Pollen.

Pollen Typhae with Staminate Flower; Carbonized Typhae Pollen; Quality Standard Improvemen

林春燕(1990-)，女，漢族，本科，藥師，研究方向?yàn)橹兴幟褡逅庂|(zhì)量控制及標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail:lcy.doc@163.com

周志宏(1971-)，男，漢族，博士，副研究員，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)、中藥質(zhì)量控制。E-mail:13888166960@163.com

R284.1

A

1007-8517(2017)07-0010-05

2017-01-24 編輯：程鵬飛)