李燕思，魯 毅，楊 波，司梁宏

藥學(xué)

氣相色譜法測(cè)定經(jīng)大孔樹脂醇制備的二仙湯樣品中殘留有機(jī)溶劑

李燕思，魯 毅，楊 波，司梁宏＊

氣相色譜法；有機(jī)溶劑殘留；二仙湯

二仙湯是張伯訥教授50年代創(chuàng)制的方劑，全方由溫腎益精養(yǎng)血藥仙茅、淫羊藿、八戟天、當(dāng)歸和滋陰瀉火藥知母、黃檗組成，主要用于更年期綜合征的治療和抗衰老，臨床應(yīng)用40余年，療效確切，載入多部中醫(yī)方劑學(xué)著作。近年來(lái)其藥理活性不斷有文獻(xiàn)報(bào)道，而有關(guān)提取、洗脫工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的報(bào)道卻較少。大孔樹脂作為一種有效的分離純化手段，運(yùn)用于中藥有效成分的提取分離中，并取得了良好的效果。但有不少人提出大孔樹脂苯系列殘留物安全性問題［1，2］。因此，為了考察經(jīng)大孔樹脂制備的中藥二仙湯樣品中殘留物乙醇、正己烷、苯、甲苯、對(duì)二甲苯、苯乙烯和二乙烯苯等七種有機(jī)溶劑的安全性，采用氣相色譜（GC）法進(jìn)行測(cè)定。

1 材料與儀器

1.1 儀器島津GC-14B氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器，N2000色譜工作站；Mettler AE 240型電子天平（瑞士梅特勒—托利多有限公司）；KQ3200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥二仙湯樣品（四五四醫(yī)院自制）；乙醇、正己烷、苯、甲苯、對(duì)二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯、正庚烷、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)SupeLcoWAX10 30m×0.25mm×0.25μm毛細(xì)管柱，F(xiàn)ID檢測(cè)。載氣為高純氮（99.99%），分流比30∶1，進(jìn)樣量為0.2μl。毛細(xì)管柱初始柱溫60℃，進(jìn)樣口溫度180℃，檢測(cè)器溫度220℃。升溫程序?yàn)?0℃恒溫1.1min，40℃/min升溫至200℃，保持5min［3］。在上述色譜條件下，正己烷、乙醇、苯、甲苯、對(duì)二甲苯、苯乙烯和二乙烯苯色譜峰的理論塔板數(shù)不低于5000；且與內(nèi)標(biāo)物正庚烷的色譜峰分離度均>1.5，對(duì)照品及供試品的色譜圖見圖1。

圖1 二仙湯GC色譜圖

2.2 溶液配制

2.2.1 供試品溶液 精密稱取醇提二仙湯原料藥1.0 g，用DMF溶解并定容于10.0ml量瓶中，依法配制成待測(cè)供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液 精密稱取正己烷502.8mg、無(wú)水乙醇507.9mg、苯10.78mg、甲苯505.6mg、對(duì)二甲苯507.6mg、苯乙烯503.2mg和二乙烯苯502.6mg，以DMF溶解并定容至100ml量瓶中，作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液；精密稱取分析純正庚烷509.1mg，以DMF溶解并定容于100ml量瓶中，作為內(nèi)標(biāo)物儲(chǔ)備液。

2.3 線性關(guān)系考察精密吸取上述標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0和10.0ml，分別置于6個(gè)50ml量瓶，加入2.0ml內(nèi)標(biāo)物儲(chǔ)備液，DMF定容至刻度，混勻，配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。依法進(jìn)行測(cè)定，以待測(cè)組分與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比（A）與對(duì)相應(yīng)的待測(cè)組分濃度（C）進(jìn)行線性回歸，分別得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及線性范圍：A正己烷=0.0083C-0.0456（r=0.9999），10.06～1006.0μg/ml；A乙醇=0.0051C+0.0574 （r= 0.9977），10.16～1016.0μg/ml；A苯=0.1183C+0.0342（r=0.9968），0.2156～21.56μg/ml；A甲苯=0.0115C+ 0.1705 （r=0.9975），10.11～1011.0μg/ml；A對(duì)二甲苯= 0.0116C+0.1556（r=0.9975），10.15～1015.0μg/ml；A苯乙烯=0.012C+0.1493（r=0.9975），10.05～1005.0μg/ ml；A二乙烯苯=0.0098C+0.1477 （r=0.9979），10.05～1005.0μg/ml。

2.4 檢測(cè)限考察精密移取“2.3”項(xiàng)下的最低濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過(guò)不同比例稀釋后進(jìn)行測(cè)定，信噪比值約為3時(shí)，為最低檢測(cè)限。正己烷檢測(cè)限約為5.030μg/ml， 乙醇約為 5.080μg/ml， 苯約為0.1294μg/ml，甲苯約為5.055μg/ml，對(duì)二甲苯約為5.075μg/ml，苯乙烯約為5.03μg/ml，二乙烯苯約為5.540μg/m l。

2.5 精密度試驗(yàn)精密移取“2.3”項(xiàng)下的中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，按氣相色譜測(cè)定條件連續(xù)進(jìn)樣5次，計(jì)算正己烷、乙醇、苯、甲苯、對(duì)二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯和內(nèi)標(biāo)物正庚烷的峰面積比值，結(jié)果表明RSD分別為2.80%，3.48%，2.39%，3.97%，3.40%，4.83%，3.45%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密稱取供試品原料藥，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，室溫放置，分別于0、4、8、12、24 h按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分析。計(jì)算正己烷、乙醇、苯、甲苯、對(duì)二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯和內(nèi)標(biāo)物正庚烷的峰面積比值，結(jié)果表明RSD分別為 2.83%，2.52%，3.70%，3.16，%，0.97%，2.18%，3.24%。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已知含量的供試品1.0 g，加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品儲(chǔ)備液和內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，按“2.2.1”項(xiàng)下方法配制成加樣回收率溶液，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1。

2.8 含量測(cè)定按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定3個(gè)批次的有機(jī)溶劑殘留量，見表2。

表1 加樣回收率測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 溶劑的選擇由于待測(cè)的有機(jī)溶劑種類多且含量少，導(dǎo)致峰面積較小，故先后摸索了幾種溶劑，如水、DMF和DMSO?？紤]二仙湯原料藥難溶于水，大多數(shù)有機(jī)溶劑在水中溶解度小，在DMF、DMSO中溶解度較大，但DMSO對(duì)眼睛、皮膚等更具刺激性，且故采用DMF作為溶劑。

3.2 進(jìn)樣方式的選擇頂空進(jìn)樣適用于容易揮發(fā)的樣品［4］，待定的有機(jī)溶劑種類較多，沸點(diǎn)差距較大；若采用頂空進(jìn)樣法，平衡時(shí)間較長(zhǎng)［5，6］，考慮檢測(cè)效率，采用直接進(jìn)樣方式。

表2 醇提二仙湯原料藥殘留量測(cè)定結(jié)果（μg/m l）

3.3 程序升溫速率的選擇對(duì)不同程序升溫速率（10、30、40、60、80℃/min）進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)升溫速率越快，基線的漂移就越嚴(yán)重，乙醇峰和苯峰會(huì)出現(xiàn)重疊［7，8］，為了縮短分析時(shí)間且各峰不相互干擾，最終選定40℃/min程序升溫，使7種有機(jī)溶劑得到完全分離，60℃保持1min，讓沸點(diǎn)低的溶劑正己烷和正庚烷（內(nèi)標(biāo)）析出，40℃/min升溫至200℃，讓乙醇、苯、甲苯、對(duì)二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯依次分離，200℃保持5min，讓沸點(diǎn)高雜質(zhì)溶劑沖出柱子，以確保試驗(yàn)準(zhǔn)確，選用正庚烷做內(nèi)標(biāo)不僅可以和待測(cè)組分有效分離，又能避免由于進(jìn)樣體積誤差對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，從而獲得比外標(biāo)法更好的測(cè)定精密度和回收率［9］。

［1］高 青，張 喆，車寶泉.殘留溶劑GC檢查方法的設(shè)計(jì)與驗(yàn)證［J］.中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2007，8（3）：10-13.

［2］武曉靜，徐 慧，莊件兵，等.氣相色譜法測(cè)定銀杏內(nèi)酯衍生物中有機(jī)溶劑殘留量［J］.中國(guó)野生植物資源，2008，27（6）：67-69.

［3］李 薇，李小敏.頭孢特侖新戊酯中有機(jī)溶劑殘留量的毛細(xì)管GC測(cè)定［J］.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，38（10）：729-730.

［4］蔡振華，金松子，蔣慶峰.頂空氣相色譜法測(cè)定黃芪提取物中大孔樹脂郵寄溶劑殘留［J］.現(xiàn)代儀器與醫(yī)療，2016，22（1）：81-84.

［5］魯晉南，王 麗，張國(guó)平，等.溶劑萃取-氣相色譜法測(cè)定水果中二流代氨基甲酸鹽類農(nóng)藥殘留方法研究［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2016，26（19）：2770-2772.

［6］孔祥虹，劉學(xué)芝，何 強(qiáng)，等.頂空氣相色譜法測(cè)定植物提取物中 19中有機(jī)溶劑殘留量［J］.理化檢測(cè)：化學(xué)分冊(cè)，2013，49（8）：924-930.

［7］張 超，馬曉麗，謝登龍，等.氣相色譜法測(cè)定乙二醛溶液中的乙二醇［J］.山東化工，2016，17（45）：72-74.

［8］曹忠波，趙婉婧，高 巖，等.固相萃取-氣相色譜-質(zhì)譜法檢測(cè)水中16種鄰苯二甲酸酯［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2016，26（18）：2607-2610.

［9］霍建富，連建科，申云飛，等.氣相色譜法測(cè)定人胎盤肝細(xì)胞生長(zhǎng)素中有機(jī)溶劑殘留量［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，47（4）：348-351.

［2016－09－18收稿，2016－10－15修回］

［本文編輯：劉一洋］

R917

B

10.14172/j.issn1671-4008.2017.04.025

210002江蘇南京，解放軍454醫(yī)院藥學(xué)部（李燕思，魯毅，楊波，司梁宏）

司梁宏，Email：1127153496@qq.com