藍(lán) 草，鄒 游，歐陽少倫，吳映璇，邵琳智

（廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心，廣東廣州 510623）

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動物源性食品中硝基咪唑類藥物殘留量的不確定度評估

藍(lán) 草，鄒 游，歐陽少倫，吳映璇，邵琳智

（廣東出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心，廣東廣州 510623）

建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動物源性食品中5種硝基咪唑類藥物殘留量的不確定度評估數(shù)學(xué)模型，以甲硝唑為例，分別對測量過程中的樣品稱量、樣品前處理、標(biāo)準(zhǔn)曲線定量、重現(xiàn)性和偏差及儀器定量等不同來源的不確定度進(jìn)行分析評定，計算得到該方法測定硝基咪唑類藥物殘留量的相對合成不確定度和擴(kuò)展不確定度。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)曲線定量和儀器定量對該方法不確定度的貢獻(xiàn)最大。

不確定度；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；硝基咪唑類

硝基咪唑（Nitroimidazoles）類藥物是近年來廣泛使用的一類抗菌素和抗原蟲藥，能抑制細(xì)胞DNA合成、破壞DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)或阻斷其轉(zhuǎn)錄復(fù)制，從而使細(xì)胞死亡，達(dá)到殺菌和控制感染的目的。但是，由于硝基咪唑類藥物含有的硝基雜環(huán)類化合物具有細(xì)胞誘變性，從而導(dǎo)致此類藥物具有致癌和潛在致畸作用，被大多數(shù)國家列為禁止使用或允許使用但必須嚴(yán)格監(jiān)控的藥物[1]。

試驗建立了同時檢測動物源性食品中5種硝基咪唑類藥物殘留量的液質(zhì)聯(lián)用法，并對分析測試結(jié)果的不確定度進(jìn)行評定，以驗證方法的準(zhǔn)確性[2]。

測量不確定度是表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)，是度量化學(xué)分析工作結(jié)果的可信度，即期望結(jié)果與分析結(jié)果的相吻合程度，以此來證明結(jié)果適宜性的有用方法[3]。

測量不確定度是對測量結(jié)果質(zhì)量的定量表征[4]，一個完整的測量結(jié)果，除了給出被測量的最佳估計值之外，還應(yīng)同時給出測量結(jié)果的不確定度[5]。檢測結(jié)果的不確定度反映了結(jié)果的可靠性，同時可以反映出檢測實驗室人員的技術(shù)和儀器設(shè)備的水平[6]。試驗參考《CNALS-GL06化學(xué)分析中不確定度的評估指南》中不確定度的理論依據(jù)，建立了液質(zhì)聯(lián)用法檢測動物源性食品中5種硝基咪唑類藥物殘留量的不確定度評估數(shù)學(xué)模型，分別對測量過程中的樣品稱量、樣品前處理、標(biāo)準(zhǔn)曲線定量、重現(xiàn)性和偏差及儀器定量等不同來源的不確定度進(jìn)行分析評定，計算得到該方法測定硝基咪唑類藥物殘留量的相對合成不確定度和擴(kuò)展不確定度。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

QTRAP5500型四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，美國AB質(zhì)譜公司產(chǎn)品；LC-20AD型液相色譜儀（二元高壓梯度輸液泵，自動進(jìn)樣器，柱溫箱，電噴霧離子源，Valco二位流路切換閥），島津公司產(chǎn)品；Analyst儀器控制及數(shù)據(jù)處理軟件，AB公司產(chǎn)品；CPA22SD型分析天平、BT 124S型分析天平，Sartorius公司產(chǎn)品；Zymark TurboVapLV吹氮濃縮儀，配有35 mL大號氮吹濃縮管、16 mL中號氮吹濃縮管；SiGMA 3-18K型低溫高速離心機(jī)、1-14型高速離心機(jī)；肉類組織搗碎機(jī)；勻漿機(jī)，轉(zhuǎn)速滿足12 000 r/min以上，配備直徑19 mm勻漿刀；MS3 basic型漩渦振蕩器，IKA公司產(chǎn)品；Heidolph型水平振蕩器；固相萃取裝置及真空泵。

1.2 試劑與材料

甲硝唑、羥基甲硝唑、二甲硝咪唑、羥甲基甲硝咪唑和洛硝噠唑等5種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度均大于98%，德國Dr.E公司提供；乙腈、甲醇為HPLC級，F(xiàn)isher Scientific公司提供；甲酸為專業(yè)分析級，Merck公司提供；所用試劑除注明外均為分析純；水為超純水；混合型陽離子交換固相萃取柱（MCX），60 mg/mL（Waters OasisMCX）。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲備液

分別稱取10 mg（準(zhǔn)確至0.01 mg）硝基咪唑類標(biāo)準(zhǔn)品至25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混勻。此儲備液質(zhì)量濃度為400 mg/L，置于-18℃冰箱中保存，保存期1年。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)中間液

分別吸取0.625 mL各標(biāo)準(zhǔn)儲備液（詳見1.3.1）至25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，混勻。此標(biāo)準(zhǔn)中間液質(zhì)量濃度為10.0 mg/L，保存期6個月。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A

準(zhǔn)確吸取0.250 mL標(biāo)準(zhǔn)中間液（詳見1.3.2）至25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，混勻。此標(biāo)準(zhǔn)混合液質(zhì)量濃度為100 μg/L，保存期3個月。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B

在玻璃試管中準(zhǔn)確加入0.900 mL甲醇溶液和0.100 mL標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A（詳見1.3.3），混勻。此標(biāo)準(zhǔn)混合液質(zhì)量濃度為10.0 μg/L，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3.5 同位素內(nèi)標(biāo)儲備液

分別稱取10 mg（準(zhǔn)確至0.01 mg）硝基咪唑類同位素內(nèi)標(biāo)至25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，混勻。此同位素內(nèi)標(biāo)儲備液質(zhì)量濃度為400 mg/L，置于-18℃冰箱中保存，保存期1年。

1.3.6 同位素內(nèi)標(biāo)中間液

分別吸取0.625 mL各同位素內(nèi)標(biāo)儲備液（詳見1.3.5）至25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，混勻。此同位素內(nèi)標(biāo)中間液質(zhì)量濃度為10.0 mg/L，保存期0.5年。

1.3.7 同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液

準(zhǔn)確吸取0.250 mL同位素內(nèi)標(biāo)中間液（詳見1.3.3）至25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，混勻。此同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液質(zhì)量濃度為100 μg/L，保存期3個月。

1.3.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

標(biāo)準(zhǔn)曲線配制見表1，標(biāo)準(zhǔn)曲線配制見表2。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

按表1和表2準(zhǔn)確吸取一定量的硝基咪唑類標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A（詳見1.3.3）和標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B（詳見1.3.4）、同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液（詳見1.3.7）、定容液于液相色譜進(jìn)樣瓶中，搖勻備用。該標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液即配即用。

1.4 提取與凈化

稱取5 g制備好的樣品（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入100 μL質(zhì)量濃度為100 μg/L的同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液，靜置10~30 min。加入12 mL乙酸乙酯，在勻漿機(jī)中以轉(zhuǎn)速12 000 r/min勻漿30 s，取另1個50 mL離心管，加入12 mL乙酸乙酯洗滌勻漿刀10 s，不合并。提取液以轉(zhuǎn)速4 500 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至35 mL氮吹濃縮管中，40℃氮吹濃縮至大約剩余2 mL。洗滌液轉(zhuǎn)入前1個含樣品的離心管中，用玻棒搗碎下層殘渣，在水平振蕩器上振蕩10 min，以轉(zhuǎn)速4 500 r/min離心5 min，上清液合并至氮吹濃縮管中，于40℃條件下繼續(xù)吹氮濃縮至干。

向上述已吹干的濃縮管中加入5 mL正己烷，渦旋振蕩1 min溶解殘渣，轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中。再向氮吹濃縮管中加入5 mL的0.1 mol/L鹽酸溶液，渦旋振蕩1 min，合并至正己烷的離心管中。水平振蕩離心管10 min，以轉(zhuǎn)速4 500 r/min離心5 min，將上層正己烷去除干凈，下清液備用。

將下清液通過已用3 mL甲醇和3 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液活化的MCX柱中，流速維持在1 mL/min。然后依次用3 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液、2 mL淋洗液（2%甲酸+甲醇，95+5，V/V）淋洗，真空抽干。用3 mL洗脫液（甲醇+水+氨水，80+20+2，V/V）洗脫，流速維持在1 mL/min，真空抽干，收集洗脫液，于40℃條件下氮?dú)獯蹈?。殘渣?.0 mL定容液（5 mmol/L甲酸溶液+甲醇，9+1，V/V）溶解定容，漩渦振蕩器上振蕩2 min，經(jīng)0.2 μm濾膜過濾后上機(jī)測定。

2 數(shù)學(xué)模型

式中：X——樣品中被測組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，μg/kg；

C——回歸方程擬合得到的樣品溶液質(zhì)量濃度，μg/mL；

V——樣液最終定容體積，mL；

m——所稱樣品的質(zhì)量，g；

D——稀釋因子，該方法中D=1；

fr——重現(xiàn)性和偏差影響因子，由方法規(guī)定其值為1；

fQ——液質(zhì)聯(lián)用儀定量校正影響因子，由方法規(guī)定其值為1。

3 不確定度來源及其評定

參考相關(guān)文獻(xiàn)[7-8]，以甲硝唑為例，根據(jù)試驗方法和數(shù)學(xué)模型分析，測量的不確定度主要來源于樣品稱量、樣品前處理、標(biāo)準(zhǔn)曲線定量、重現(xiàn)性和偏差及儀器定量。

不確定度分量來源見圖1。

圖1 不確定度分量來源

3.1 樣品稱量引入的不確定度Umrel

3.1.1 取樣

試驗將待測樣品用組織粉碎機(jī)搗碎，均分成2份，作為試樣，可認(rèn)為樣品是均勻的、代表性充分，由此導(dǎo)致的不確定度忽略不計。

3.1.2 稱質(zhì)量

精度為0.01 g的天平計量檢定證書給出的擴(kuò)展不確定度Um為0.03 g，屬于正態(tài)分布，對于大約95%的置信水平，包含因子k值為2，稱質(zhì)量5.00 g，按B類評定，其相對不確定度為：

3.2 樣品前處理引入的不確定度Uvrel

分析該方法樣品前處理過程，可以發(fā)現(xiàn)影響試驗不確定度的操作主要有3個，即內(nèi)標(biāo)溶液的加入，標(biāo)準(zhǔn)工作液的加入和樣品的定容，分別對這3個來源進(jìn)行分析。

3.2.1 樣品溶液同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液加入引起的不確定度

樣品溶液同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液加入引起的不確定度主要包括移液槍誤差、實驗室溫度不同引起的體積差異所帶來的不確定度。已知200 μL移液槍的容量允差為±1.33 μL，移液槍誤差引入不確定度屬于矩形分布，按B類評定，

實驗室溫度變化為±3℃，甲醇在20℃的膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時（K=1.96） 體積變化區(qū)間為±（100×3×0.001 2）= ±0.36 μL，轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即：

故樣品溶液同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液加入引起的相對不確定度為：

3.2.2 樣品溶液標(biāo)準(zhǔn)工作液加入引起的不確定度

與同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液加入引起的不確定度相同，標(biāo)準(zhǔn)工作液加入引起的不確定度包括移液槍誤差、溫度不同引起的體積差異所帶來的不確定度。省略計算過程，得到標(biāo)準(zhǔn)工作液加入引起的相對不確定度為：

3.2.3 樣品溶液定容引起的不確定度

樣品溶液定容引起的不確定度同樣包括移液槍誤差、溫度不同引起的體積差異所帶來的不確定度。1 000 μL移液槍的容量允差為±4.44 μL，屬于矩形分布，按B類評定，

實驗室溫度變化為±3℃，水溶液在20℃的膨脹系數(shù)為0.000 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時（K=1.96）體積變化區(qū)間為±（1 000×3×0.000 2）=± 0.6 μL，轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即：

樣品溶液定容引起的相對不確定度為：

故樣品前處理引入的相對不確定度為：

3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線定量引入的不確定度Ucrel

標(biāo)準(zhǔn)曲線定量引入的不確定度主要包括原始標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制、標(biāo)準(zhǔn)曲線配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合等所帶來的不確定度，內(nèi)標(biāo)溶液的配制過程不影響結(jié)果的不確定度。

3.3.1 原始標(biāo)準(zhǔn)物的不確定度

甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書標(biāo)明的純度為98.7%，給出的擴(kuò)展不確定度U為0.5%，屬于正態(tài)分布，對于大約95%的置信水平，包含因子k值為2。按B類評定，故甲硝唑原始標(biāo)準(zhǔn)物的不確定度為：

3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過程引入的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過程主要分為標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制、標(biāo)準(zhǔn)中間液配制、標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A配制及標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B配制，分別對這4個過程的不確定度進(jìn)行評估。

（1）標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制引入的不確定度主要包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱質(zhì)量和容量瓶定容所帶來的不確定度，其中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱質(zhì)量采用的是精度為0.1 mg的天平，其計量檢定證書給出的是其擴(kuò)展不確定度Ux為0.05 mg，屬于正態(tài)分布，對于大約95%的置信水平，包含因子k值為2。

稱質(zhì)量10 mg，按B類評定，其相對不確定度為：

采用25.00 mL容量瓶定容，A級容量允差為±0.000 04 mL，屬于矩形分布，按B類評定，容量瓶誤差帶來的不確定度：

容量瓶定容變異系數(shù)為0.000 24，定容至刻度變動性引起的不確定度：

u2(2)=容量瓶體積×定容變異系數(shù)

=25.00 mL×0.000 24=0.006 0 mL.

實驗室溫度變化為±3℃，甲醇在20℃的體積膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時（K=1.96）體積變化區(qū)間為±（25.00×3×0.001 2）=±0.09 mL，溫度變化引起的不確定度為：

故25.00 mL容量瓶定容過程引起的相對不確定度為：

標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制引入的不確定度為：

（2）標(biāo)準(zhǔn)中間液配制引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)中間液配制引入的不確定度主要包括容量瓶定容及1 mL移液槍移液625 μL所產(chǎn)生的不確定度，其中25.00 mL容量定容引入的相對不確定度計算方法同上；而移液槍移液引入的不確定度主要包括移液槍誤差、溫度不同引起的體積差異所帶來的不確定度。1 mL移液槍的容量允差為±4.44 μL，屬于矩形分布，按B類評定，

實驗室溫度變化為±3℃，甲醇在20℃的體積膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時（K=1.96）體積變化區(qū)間為±（625×3×0.001 2）= ±2.25 μL，轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即：

由1 mL移液槍移液625 μL引起的相對不確定度為：

故標(biāo)準(zhǔn)中間液配制引起的相對不確定度為：

（3）標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A配制引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A配制引入的不確定度同樣包括容量瓶定容及移液槍移液所產(chǎn)生的不確定度，計算方法同3.3.2（2），結(jié)果如下：

由1 mL移液槍移液250 μL引起的相對不確定度為：

標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A配制引起的相對不確定度為：

（4）標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B配制引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B配制引入的不確定度主要包括1 mL移液槍移液900 μL及200 μL移液槍移液100 μL所產(chǎn)生的不確定度。

1 mL移液槍的容量允差為±4.44 μL，屬于矩形分布，按B類評定，

實驗室溫度變化為±3℃，甲醇在20℃的體積膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時（K=1.96）體積變化區(qū)間為±（900×3×0.001 2）=±3.24 μL，轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即：

由1 mL移液槍移液900 μL引起的相對不確定度為：

200 μL移液槍容量允差為±1.33 μL，屬于矩形分布，按B類評定，

實驗室溫度變化為±3℃，甲醇在20℃的膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時（K=1.96）體積變化區(qū)間為±（100×3×0.001 2）= ±0.36 μL，轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即：

由200 μL移液槍移液100 μL引起的相對不確定度為：

故標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B配制引起的相對不確定度為：

3.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制引入的不確定度

標(biāo)準(zhǔn)曲線配制的不確定度主要是移液槍移液所產(chǎn)生，實驗室溫度變化為±3℃，水溶液在20℃的膨脹系數(shù)為0.000 2℃-1，屬于正態(tài)分布，則95%置信概率時（k=1.96）吸取900，850，800，700 μL體積變化區(qū)間分別為±0.54 μL，±0.51 μL，±0.48 μL，±0.42 μL，計算其標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.28，0.26，0.24，0.21 μL。由此可得1 mL移液槍分別吸取900，850，800，700 μL水溶液時的相對不確定度分別為0.29%，0.30%，0.32%，0.37%。同理，已知甲醇在20℃的膨脹系數(shù)為0.000 2℃-1，可得200 μL移液槍分別吸取200，100，50 μL甲醇溶液時的相對不確定度分別為0.42%，0.79%，1.55%。

根據(jù)其移液次數(shù)，可得標(biāo)準(zhǔn)曲線配制引入的相對不確定度為：

3.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度

測定5個濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到相應(yīng)的待測物峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值，用最小二乘法擬合得到直線方程y=a+bx。

最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果見表3。

對樣品液進(jìn)行15次測定，由直線方程求得平均質(zhì)量濃度xpred=7.59μg/kg，則xpred的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為yobs

表3 最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果

式中：uXpred——最小二乘法擬合曲線引入的不確定度；

S(y)——標(biāo)準(zhǔn)溶液待測物質(zhì)信號殘差的標(biāo)準(zhǔn)差（貝塞爾公式）；

P——樣品溶液測定次數(shù)；

n——標(biāo)準(zhǔn)溶液測定次數(shù)；

a——截距；

b——斜率；

xpred——樣品溶液中待測物質(zhì)的含量；

x——標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測物質(zhì)含量的測定平均值；

xpredi——標(biāo)準(zhǔn)溶液各點(diǎn)的待測物質(zhì)含量；

yobs——標(biāo)準(zhǔn)溶液各點(diǎn)的待測物質(zhì)信號響應(yīng)值；

y——根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得到的待測物質(zhì)信

號響應(yīng)回歸值。

其中，a=-0.005 65，b=0.093 2，P=15，n=6，

故標(biāo)準(zhǔn)曲線定量引起的相對不確定度為：

3.4 重現(xiàn)性和偏差引入的不確定度

3.4.1 精密度研究

在樣品中添加0.5 μg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，做6個平行樣品測定甲硝唑的回收率。標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

6個平行樣品中甲硝唑的加標(biāo)回收及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表4。

3.4.2 偏差引入的不確定度

表4 6個平行樣品中甲硝唑的加標(biāo)回收及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差

分析程序的偏差是通過在實驗室內(nèi)部確認(rèn)研究中使用標(biāo)準(zhǔn)添加樣品來進(jìn)行研究的。將收集的2015年連續(xù)12個月共36個批次的標(biāo)準(zhǔn)添加回收。

甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)添加回收結(jié)果見表5。

表5 甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)添加回收結(jié)果

故重現(xiàn)性和偏差引起的相對不確定度為：

3.5 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀定量引入的不確定度urel(fQ)

參照J(rèn)JF 1317—2011液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)規(guī)范用5 μg/L的硝基咪唑標(biāo)準(zhǔn)溶液和10 μg/L的內(nèi)標(biāo)溶液對液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行校準(zhǔn)，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣體積為5 μL。

6次信噪比比值結(jié)果見表6。

表6 6次信噪比值結(jié)果

試驗標(biāo)準(zhǔn)偏差S=0.032。其中，測量重復(fù)性為A類不確定度，其他為B類不確定度。

3.5.1 測量重復(fù)性urA

測量重復(fù)性可以通過計算6次測量平均值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差得到

式中：z——甲硝唑信噪比測量結(jié)果與甲硝唑內(nèi)標(biāo)信噪比測量結(jié)果的比值，為6次測量的平均值；

zj——第j次測量的信噪比比值；

j——測量次數(shù)

s——試驗標(biāo)準(zhǔn)偏差。

3.5.2 溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量濃度的相對不確定度ur(c)

包括前面標(biāo)準(zhǔn)溶液配制所帶來的所有誤差、稀釋至5 μg/L移液槍誤差、溫度不同引起的體積差異所帶來的不確定度，以及內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至10 μg/L移液槍誤差、實驗室溫度不同引起的體積差異所帶來的不確定度，計算過程同上，結(jié)果如下：

標(biāo)準(zhǔn)工作液加入引起的相對不確定度為：

內(nèi)標(biāo)溶液加入引起的相對不確定度為：u9rel=0.79%故溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量濃度的相對不確定度為：

3.5.3 進(jìn)樣體積的相對不確定度

采用的進(jìn)樣量V=5 μL，容量允差為±0.015 μL，屬于矩形分布，按B類評定，

3.5.4 噪聲強(qiáng)度測量的不確定度ur(Hn)

噪聲強(qiáng)度的A類不確定度已經(jīng)在“測量重復(fù)性”中計算，該項為噪聲強(qiáng)度的B類不確定度。在實際計算中，將譜圖放大后從軟件上讀取噪聲強(qiáng)度，該項不確定度極小，可忽略。

故液質(zhì)儀器校準(zhǔn)引起的不確定度為：

3.6 相對合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和相對擴(kuò)展不確定度

甲硝唑測量不確定度分量見表7。

表7 甲硝唑測量不確定度分量

不考慮以上各不確定度的相關(guān)性，可得動物源性食品中甲硝唑殘留的相對合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

在95%置信區(qū)間，取包含因子k=2，甲硝唑的測定含量相對擴(kuò)展不確定度為：

通過同樣的計算過程可以得到在95%置信區(qū)間，羥基甲硝唑、二甲硝咪唑、羥甲基甲硝咪唑和洛硝噠唑的相對擴(kuò)展不確定度分別為11.0%，11.4%，11.2%，11.3%。

4 結(jié)論

通過對動物源性食品中硝基咪唑類藥物殘留檢測方法不確定度各來源的評定，可以知道該方法的不確定度主要是由標(biāo)準(zhǔn)曲線定量和液質(zhì)聯(lián)用儀器定量引起，樣品稱量的不確定幾乎可以忽略不計。因此在實際工作中，應(yīng)加強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程訓(xùn)練，減少試驗過程中人為因素產(chǎn)生的誤差，并定期對試驗儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù)，保持穩(wěn)定的狀態(tài)。在實際檢測中，某動物源性食品的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測量甲硝唑的含量結(jié)果為0.49 μg/kg，經(jīng)考慮其測量不確定度=0.49 μg/kg×10.6%=0.05 μg/kg，則其結(jié)果應(yīng)表達(dá)為0.49±0.05 μg/kg。

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Evaluation of Uncertainty in Determination of Nitroimidazoles Residues in Foodstuffs of Animal Origin by LC-MS/MS

LAN Cao，ZOU You，OUYANG Shaolun，WU Yingxuan，SHAO Linzhi
（Inspection and Quarantine Technology Center，Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Guangzhou，Guangdong 510623，China）

This study establish a mathematical model for evaluation of the uncertainty in determination of 5 kinds of nitroimidazoles residues in foodstuffs of animal origin by high performance liquid-MS/MS（LC-MS/MS），and analyze the uncertainty of different sources such as sample weighting，filtrating，the standard curve fitting，measuring repeatability and LC-MS/MS quantify.By calculating the components of all uncertainties，relative combined standard uncertaintyand expand uncertainty，we obtain a report of uncertainty of nitroimidazoles.The results show that the main source of the uncertainty comes from the standard curve fitting and LC-MS/MS quantify.

uncertainty；liquid chromatography-tandem mass spectrometry；nitroimidazoles

TS254.7

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.02.038

1671-9646（2017）02b-0035-06

2017-01-18

廣東省省級科技計劃項目（2015A030401075）；廣東檢驗檢疫局科技計劃項目（2015GDK10）。

藍(lán) 草（1988— ），女，碩士，助理工程師，研究方向為獸藥殘留檢測。