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        液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中硝基咪唑類藥物殘留量的不確定度評(píng)估

        2017-04-18 02:55:04歐陽(yáng)少倫吳映璇邵琳智
        農(nóng)產(chǎn)品加工 2017年4期
        關(guān)鍵詞:移液咪唑類工作液

        藍(lán) 草,鄒 游,歐陽(yáng)少倫,吳映璇,邵琳智

        (廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心,廣東廣州 510623)

        液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中硝基咪唑類藥物殘留量的不確定度評(píng)估

        藍(lán) 草,鄒 游,歐陽(yáng)少倫,吳映璇,邵琳智

        (廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心,廣東廣州 510623)

        建立了液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源性食品中5種硝基咪唑類藥物殘留量的不確定度評(píng)估數(shù)學(xué)模型,以甲硝唑?yàn)槔謩e對(duì)測(cè)量過(guò)程中的樣品稱量、樣品前處理、標(biāo)準(zhǔn)曲線定量、重現(xiàn)性和偏差及儀器定量等不同來(lái)源的不確定度進(jìn)行分析評(píng)定,計(jì)算得到該方法測(cè)定硝基咪唑類藥物殘留量的相對(duì)合成不確定度和擴(kuò)展不確定度。結(jié)果表明,標(biāo)準(zhǔn)曲線定量和儀器定量對(duì)該方法不確定度的貢獻(xiàn)最大。

        不確定度;液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;硝基咪唑類

        硝基咪唑(Nitroimidazoles)類藥物是近年來(lái)廣泛使用的一類抗菌素和抗原蟲(chóng)藥,能抑制細(xì)胞DNA合成、破壞DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)或阻斷其轉(zhuǎn)錄復(fù)制,從而使細(xì)胞死亡,達(dá)到殺菌和控制感染的目的。但是,由于硝基咪唑類藥物含有的硝基雜環(huán)類化合物具有細(xì)胞誘變性,從而導(dǎo)致此類藥物具有致癌和潛在致畸作用,被大多數(shù)國(guó)家列為禁止使用或允許使用但必須嚴(yán)格監(jiān)控的藥物[1]。

        試驗(yàn)建立了同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物源性食品中5種硝基咪唑類藥物殘留量的液質(zhì)聯(lián)用法,并對(duì)分析測(cè)試結(jié)果的不確定度進(jìn)行評(píng)定,以驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性[2]。

        測(cè)量不確定度是表征合理地賦予被測(cè)量之值的分散性,與測(cè)量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù),是度量化學(xué)分析工作結(jié)果的可信度,即期望結(jié)果與分析結(jié)果的相吻合程度,以此來(lái)證明結(jié)果適宜性的有用方法[3]。

        測(cè)量不確定度是對(duì)測(cè)量結(jié)果質(zhì)量的定量表征[4],一個(gè)完整的測(cè)量結(jié)果,除了給出被測(cè)量的最佳估計(jì)值之外,還應(yīng)同時(shí)給出測(cè)量結(jié)果的不確定度[5]。檢測(cè)結(jié)果的不確定度反映了結(jié)果的可靠性,同時(shí)可以反映出檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員的技術(shù)和儀器設(shè)備的水平[6]。試驗(yàn)參考《CNALS-GL06化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南》中不確定度的理論依據(jù),建立了液質(zhì)聯(lián)用法檢測(cè)動(dòng)物源性食品中5種硝基咪唑類藥物殘留量的不確定度評(píng)估數(shù)學(xué)模型,分別對(duì)測(cè)量過(guò)程中的樣品稱量、樣品前處理、標(biāo)準(zhǔn)曲線定量、重現(xiàn)性和偏差及儀器定量等不同來(lái)源的不確定度進(jìn)行分析評(píng)定,計(jì)算得到該方法測(cè)定硝基咪唑類藥物殘留量的相對(duì)合成不確定度和擴(kuò)展不確定度。

        1 材料與方法

        1.1 主要儀器

        QTRAP5500型四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀,美國(guó)AB質(zhì)譜公司產(chǎn)品;LC-20AD型液相色譜儀(二元高壓梯度輸液泵,自動(dòng)進(jìn)樣器,柱溫箱,電噴霧離子源,Valco二位流路切換閥),島津公司產(chǎn)品;Analyst儀器控制及數(shù)據(jù)處理軟件,AB公司產(chǎn)品;CPA22SD型分析天平、BT 124S型分析天平,Sartorius公司產(chǎn)品;Zymark TurboVapLV吹氮濃縮儀,配有35 mL大號(hào)氮吹濃縮管、16 mL中號(hào)氮吹濃縮管;SiGMA 3-18K型低溫高速離心機(jī)、1-14型高速離心機(jī);肉類組織搗碎機(jī);勻漿機(jī),轉(zhuǎn)速滿足12 000 r/min以上,配備直徑19 mm勻漿刀;MS3 basic型漩渦振蕩器,IKA公司產(chǎn)品;Heidolph型水平振蕩器;固相萃取裝置及真空泵。

        1.2 試劑與材料

        甲硝唑、羥基甲硝唑、二甲硝咪唑、羥甲基甲硝咪唑和洛硝噠唑等5種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度均大于98%,德國(guó)Dr.E公司提供;乙腈、甲醇為HPLC級(jí),F(xiàn)isher Scientific公司提供;甲酸為專業(yè)分析級(jí),Merck公司提供;所用試劑除注明外均為分析純;水為超純水;混合型陽(yáng)離子交換固相萃取柱(MCX),60 mg/mL(Waters OasisMCX)。

        1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

        1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

        分別稱取10 mg(準(zhǔn)確至0.01 mg)硝基咪唑類標(biāo)準(zhǔn)品至25 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,混勻。此儲(chǔ)備液質(zhì)量濃度為400 mg/L,置于-18℃冰箱中保存,保存期1年。

        1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)中間液

        分別吸取0.625 mL各標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(詳見(jiàn)1.3.1)至25 mL容量瓶中,用甲醇稀釋并定容至刻度,混勻。此標(biāo)準(zhǔn)中間液質(zhì)量濃度為10.0 mg/L,保存期6個(gè)月。

        1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A

        準(zhǔn)確吸取0.250 mL標(biāo)準(zhǔn)中間液(詳見(jiàn)1.3.2)至25 mL容量瓶中,用甲醇稀釋并定容至刻度,混勻。此標(biāo)準(zhǔn)混合液質(zhì)量濃度為100 μg/L,保存期3個(gè)月。

        1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B

        在玻璃試管中準(zhǔn)確加入0.900 mL甲醇溶液和0.100 mL標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A(詳見(jiàn)1.3.3),混勻。此標(biāo)準(zhǔn)混合液質(zhì)量濃度為10.0 μg/L,現(xiàn)配現(xiàn)用。

        1.3.5 同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液

        分別稱取10 mg(準(zhǔn)確至0.01 mg)硝基咪唑類同位素內(nèi)標(biāo)至25 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,混勻。此同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液質(zhì)量濃度為400 mg/L,置于-18℃冰箱中保存,保存期1年。

        1.3.6 同位素內(nèi)標(biāo)中間液

        分別吸取0.625 mL各同位素內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液(詳見(jiàn)1.3.5)至25 mL容量瓶中,用甲醇稀釋并定容至刻度,混勻。此同位素內(nèi)標(biāo)中間液質(zhì)量濃度為10.0 mg/L,保存期0.5年。

        1.3.7 同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液

        準(zhǔn)確吸取0.250 mL同位素內(nèi)標(biāo)中間液(詳見(jiàn)1.3.3)至25 mL容量瓶中,用甲醇稀釋并定容至刻度,混勻。此同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液質(zhì)量濃度為100 μg/L,保存期3個(gè)月。

        1.3.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

        標(biāo)準(zhǔn)曲線配制見(jiàn)表1,標(biāo)準(zhǔn)曲線配制見(jiàn)表2。

        表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

        表2 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制

        按表1和表2準(zhǔn)確吸取一定量的硝基咪唑類標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A(詳見(jiàn)1.3.3)和標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B(詳見(jiàn)1.3.4)、同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液(詳見(jiàn)1.3.7)、定容液于液相色譜進(jìn)樣瓶中,搖勻備用。該標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液即配即用。

        1.4 提取與凈化

        稱取5 g制備好的樣品(精確至0.01 g)于50 mL離心管中,準(zhǔn)確加入100 μL質(zhì)量濃度為100 μg/L的同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液,靜置10~30 min。加入12 mL乙酸乙酯,在勻漿機(jī)中以轉(zhuǎn)速12 000 r/min勻漿30 s,取另1個(gè)50 mL離心管,加入12 mL乙酸乙酯洗滌勻漿刀10 s,不合并。提取液以轉(zhuǎn)速4 500 r/min離心5 min,上清液轉(zhuǎn)移至35 mL氮吹濃縮管中,40℃氮吹濃縮至大約剩余2 mL。洗滌液轉(zhuǎn)入前1個(gè)含樣品的離心管中,用玻棒搗碎下層殘?jiān)?,在水平振蕩器上振?0 min,以轉(zhuǎn)速4 500 r/min離心5 min,上清液合并至氮吹濃縮管中,于40℃條件下繼續(xù)吹氮濃縮至干。

        向上述已吹干的濃縮管中加入5 mL正己烷,渦旋振蕩1 min溶解殘?jiān)?,轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中。再向氮吹濃縮管中加入5 mL的0.1 mol/L鹽酸溶液,渦旋振蕩1 min,合并至正己烷的離心管中。水平振蕩離心管10 min,以轉(zhuǎn)速4 500 r/min離心5 min,將上層正己烷去除干凈,下清液備用。

        將下清液通過(guò)已用3 mL甲醇和3 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液活化的MCX柱中,流速維持在1 mL/min。然后依次用3 mL 0.1 mol/L鹽酸溶液、2 mL淋洗液(2%甲酸+甲醇,95+5,V/V)淋洗,真空抽干。用3 mL洗脫液(甲醇+水+氨水,80+20+2,V/V)洗脫,流速維持在1 mL/min,真空抽干,收集洗脫液,于40℃條件下氮?dú)獯蹈伞堅(jiān)?.0 mL定容液(5 mmol/L甲酸溶液+甲醇,9+1,V/V)溶解定容,漩渦振蕩器上振蕩2 min,經(jīng)0.2 μm濾膜過(guò)濾后上機(jī)測(cè)定。

        2 數(shù)學(xué)模型

        式中:X——樣品中被測(cè)組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù),μg/kg;

        C——回歸方程擬合得到的樣品溶液質(zhì)量濃度,μg/mL;

        V——樣液最終定容體積,mL;

        m——所稱樣品的質(zhì)量,g;

        D——稀釋因子,該方法中D=1;

        fr——重現(xiàn)性和偏差影響因子,由方法規(guī)定其值為1;

        fQ——液質(zhì)聯(lián)用儀定量校正影響因子,由方法規(guī)定其值為1。

        3 不確定度來(lái)源及其評(píng)定

        參考相關(guān)文獻(xiàn)[7-8],以甲硝唑?yàn)槔?,根?jù)試驗(yàn)方法和數(shù)學(xué)模型分析,測(cè)量的不確定度主要來(lái)源于樣品稱量、樣品前處理、標(biāo)準(zhǔn)曲線定量、重現(xiàn)性和偏差及儀器定量。

        不確定度分量來(lái)源見(jiàn)圖1。

        圖1 不確定度分量來(lái)源

        3.1 樣品稱量引入的不確定度Umrel

        3.1.1 取樣

        試驗(yàn)將待測(cè)樣品用組織粉碎機(jī)搗碎,均分成2份,作為試樣,可認(rèn)為樣品是均勻的、代表性充分,由此導(dǎo)致的不確定度忽略不計(jì)。

        3.1.2 稱質(zhì)量

        精度為0.01 g的天平計(jì)量檢定證書(shū)給出的擴(kuò)展不確定度Um為0.03 g,屬于正態(tài)分布,對(duì)于大約95%的置信水平,包含因子k值為2,稱質(zhì)量5.00 g,按B類評(píng)定,其相對(duì)不確定度為:

        3.2 樣品前處理引入的不確定度Uvrel

        分析該方法樣品前處理過(guò)程,可以發(fā)現(xiàn)影響試驗(yàn)不確定度的操作主要有3個(gè),即內(nèi)標(biāo)溶液的加入,標(biāo)準(zhǔn)工作液的加入和樣品的定容,分別對(duì)這3個(gè)來(lái)源進(jìn)行分析。

        3.2.1 樣品溶液同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液加入引起的不確定度

        樣品溶液同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液加入引起的不確定度主要包括移液槍誤差、實(shí)驗(yàn)室溫度不同引起的體積差異所帶來(lái)的不確定度。已知200 μL移液槍的容量允差為±1.33 μL,移液槍誤差引入不確定度屬于矩形分布,按B類評(píng)定,

        實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃,甲醇在20℃的膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1,屬于正態(tài)分布,則95%置信概率時(shí)(K=1.96) 體積變化區(qū)間為±(100×3×0.001 2)= ±0.36 μL,轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即:

        故樣品溶液同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液加入引起的相對(duì)不確定度為:

        3.2.2 樣品溶液標(biāo)準(zhǔn)工作液加入引起的不確定度

        與同位素內(nèi)標(biāo)混合工作液加入引起的不確定度相同,標(biāo)準(zhǔn)工作液加入引起的不確定度包括移液槍誤差、溫度不同引起的體積差異所帶來(lái)的不確定度。省略計(jì)算過(guò)程,得到標(biāo)準(zhǔn)工作液加入引起的相對(duì)不確定度為:

        3.2.3 樣品溶液定容引起的不確定度

        樣品溶液定容引起的不確定度同樣包括移液槍誤差、溫度不同引起的體積差異所帶來(lái)的不確定度。1 000 μL移液槍的容量允差為±4.44 μL,屬于矩形分布,按B類評(píng)定,

        實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃,水溶液在20℃的膨脹系數(shù)為0.000 2℃-1,屬于正態(tài)分布,則95%置信概率時(shí)(K=1.96)體積變化區(qū)間為±(1 000×3×0.000 2)=± 0.6 μL,轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即:

        樣品溶液定容引起的相對(duì)不確定度為:

        故樣品前處理引入的相對(duì)不確定度為:

        3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線定量引入的不確定度Ucrel

        標(biāo)準(zhǔn)曲線定量引入的不確定度主要包括原始標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制、標(biāo)準(zhǔn)曲線配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合等所帶來(lái)的不確定度,內(nèi)標(biāo)溶液的配制過(guò)程不影響結(jié)果的不確定度。

        3.3.1 原始標(biāo)準(zhǔn)物的不確定度

        甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)標(biāo)明的純度為98.7%,給出的擴(kuò)展不確定度U為0.5%,屬于正態(tài)分布,對(duì)于大約95%的置信水平,包含因子k值為2。按B類評(píng)定,故甲硝唑原始標(biāo)準(zhǔn)物的不確定度為:

        3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程引入的不確定度

        標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過(guò)程主要分為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制、標(biāo)準(zhǔn)中間液配制、標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A配制及標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B配制,分別對(duì)這4個(gè)過(guò)程的不確定度進(jìn)行評(píng)估。

        (1)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制引入的不確定度主要包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱質(zhì)量和容量瓶定容所帶來(lái)的不確定度,其中標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稱質(zhì)量采用的是精度為0.1 mg的天平,其計(jì)量檢定證書(shū)給出的是其擴(kuò)展不確定度Ux為0.05 mg,屬于正態(tài)分布,對(duì)于大約95%的置信水平,包含因子k值為2。

        稱質(zhì)量10 mg,按B類評(píng)定,其相對(duì)不確定度為:

        采用25.00 mL容量瓶定容,A級(jí)容量允差為±0.000 04 mL,屬于矩形分布,按B類評(píng)定,容量瓶誤差帶來(lái)的不確定度:

        容量瓶定容變異系數(shù)為0.000 24,定容至刻度變動(dòng)性引起的不確定度:

        u2(2)=容量瓶體積×定容變異系數(shù)

        =25.00 mL×0.000 24=0.006 0 mL.

        實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃,甲醇在20℃的體積膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1,屬于正態(tài)分布,則95%置信概率時(shí)(K=1.96)體積變化區(qū)間為±(25.00×3×0.001 2)=±0.09 mL,溫度變化引起的不確定度為:

        故25.00 mL容量瓶定容過(guò)程引起的相對(duì)不確定度為:

        標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制引入的不確定度為:

        (2)標(biāo)準(zhǔn)中間液配制引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)中間液配制引入的不確定度主要包括容量瓶定容及1 mL移液槍移液625 μL所產(chǎn)生的不確定度,其中25.00 mL容量定容引入的相對(duì)不確定度計(jì)算方法同上;而移液槍移液引入的不確定度主要包括移液槍誤差、溫度不同引起的體積差異所帶來(lái)的不確定度。1 mL移液槍的容量允差為±4.44 μL,屬于矩形分布,按B類評(píng)定,

        實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃,甲醇在20℃的體積膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1,屬于正態(tài)分布,則95%置信概率時(shí)(K=1.96)體積變化區(qū)間為±(625×3×0.001 2)= ±2.25 μL,轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即:

        由1 mL移液槍移液625 μL引起的相對(duì)不確定度為:

        故標(biāo)準(zhǔn)中間液配制引起的相對(duì)不確定度為:

        (3)標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A配制引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A配制引入的不確定度同樣包括容量瓶定容及移液槍移液所產(chǎn)生的不確定度,計(jì)算方法同3.3.2(2),結(jié)果如下:

        由1 mL移液槍移液250 μL引起的相對(duì)不確定度為:

        標(biāo)準(zhǔn)混合工作液A配制引起的相對(duì)不確定度為:

        (4)標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B配制引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B配制引入的不確定度主要包括1 mL移液槍移液900 μL及200 μL移液槍移液100 μL所產(chǎn)生的不確定度。

        1 mL移液槍的容量允差為±4.44 μL,屬于矩形分布,按B類評(píng)定,

        實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃,甲醇在20℃的體積膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1,屬于正態(tài)分布,則95%置信概率時(shí)(K=1.96)體積變化區(qū)間為±(900×3×0.001 2)=±3.24 μL,轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即:

        由1 mL移液槍移液900 μL引起的相對(duì)不確定度為:

        200 μL移液槍容量允差為±1.33 μL,屬于矩形分布,按B類評(píng)定,

        實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃,甲醇在20℃的膨脹系數(shù)為0.001 2℃-1,屬于正態(tài)分布,則95%置信概率時(shí)(K=1.96)體積變化區(qū)間為±(100×3×0.001 2)= ±0.36 μL,轉(zhuǎn)換成標(biāo)準(zhǔn)偏差即:

        由200 μL移液槍移液100 μL引起的相對(duì)不確定度為:

        故標(biāo)準(zhǔn)混合工作液B配制引起的相對(duì)不確定度為:

        3.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制引入的不確定度

        標(biāo)準(zhǔn)曲線配制的不確定度主要是移液槍移液所產(chǎn)生,實(shí)驗(yàn)室溫度變化為±3℃,水溶液在20℃的膨脹系數(shù)為0.000 2℃-1,屬于正態(tài)分布,則95%置信概率時(shí)(k=1.96)吸取900,850,800,700 μL體積變化區(qū)間分別為±0.54 μL,±0.51 μL,±0.48 μL,±0.42 μL,計(jì)算其標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.28,0.26,0.24,0.21 μL。由此可得1 mL移液槍分別吸取900,850,800,700 μL水溶液時(shí)的相對(duì)不確定度分別為0.29%,0.30%,0.32%,0.37%。同理,已知甲醇在20℃的膨脹系數(shù)為0.000 2℃-1,可得200 μL移液槍分別吸取200,100,50 μL甲醇溶液時(shí)的相對(duì)不確定度分別為0.42%,0.79%,1.55%。

        根據(jù)其移液次數(shù),可得標(biāo)準(zhǔn)曲線配制引入的相對(duì)不確定度為:

        3.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入的不確定度

        測(cè)定5個(gè)濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液,得到相應(yīng)的待測(cè)物峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值,用最小二乘法擬合得到直線方程y=a+bx。

        最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果見(jiàn)表3。

        對(duì)樣品液進(jìn)行15次測(cè)定,由直線方程求得平均質(zhì)量濃度xpred=7.59μg/kg,則xpred的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為yobs

        表3 最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果

        式中:uXpred——最小二乘法擬合曲線引入的不確定度;

        S(y)——標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)物質(zhì)信號(hào)殘差的標(biāo)準(zhǔn)差(貝塞爾公式);

        P——樣品溶液測(cè)定次數(shù);

        n——標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定次數(shù);

        a——截距;

        b——斜率;

        xpred——樣品溶液中待測(cè)物質(zhì)的含量;

        x——標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)物質(zhì)含量的測(cè)定平均值;

        xpredi——標(biāo)準(zhǔn)溶液各點(diǎn)的待測(cè)物質(zhì)含量;

        yobs——標(biāo)準(zhǔn)溶液各點(diǎn)的待測(cè)物質(zhì)信號(hào)響應(yīng)值;

        y——根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的待測(cè)物質(zhì)信

        號(hào)響應(yīng)回歸值。

        其中,a=-0.005 65,b=0.093 2,P=15,n=6,

        故標(biāo)準(zhǔn)曲線定量引起的相對(duì)不確定度為:

        3.4 重現(xiàn)性和偏差引入的不確定度

        3.4.1 精密度研究

        在樣品中添加0.5 μg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液,做6個(gè)平行樣品測(cè)定甲硝唑的回收率。標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:

        相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:

        6個(gè)平行樣品中甲硝唑的加標(biāo)回收及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見(jiàn)表4。

        3.4.2 偏差引入的不確定度

        表4 6個(gè)平行樣品中甲硝唑的加標(biāo)回收及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

        分析程序的偏差是通過(guò)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部確認(rèn)研究中使用標(biāo)準(zhǔn)添加樣品來(lái)進(jìn)行研究的。將收集的2015年連續(xù)12個(gè)月共36個(gè)批次的標(biāo)準(zhǔn)添加回收。

        甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)添加回收結(jié)果見(jiàn)表5。

        表5 甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)添加回收結(jié)果

        故重現(xiàn)性和偏差引起的相對(duì)不確定度為:

        3.5 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀定量引入的不確定度urel(fQ)

        參照J(rèn)JF 1317—2011液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀校準(zhǔn)規(guī)范用5 μg/L的硝基咪唑標(biāo)準(zhǔn)溶液和10 μg/L的內(nèi)標(biāo)溶液對(duì)液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行校準(zhǔn),連續(xù)進(jìn)樣6次,每次進(jìn)樣體積為5 μL。

        6次信噪比比值結(jié)果見(jiàn)表6。

        表6 6次信噪比值結(jié)果

        試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差S=0.032。其中,測(cè)量重復(fù)性為A類不確定度,其他為B類不確定度。

        3.5.1 測(cè)量重復(fù)性u(píng)rA

        測(cè)量重復(fù)性可以通過(guò)計(jì)算6次測(cè)量平均值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差得到

        式中:z——甲硝唑信噪比測(cè)量結(jié)果與甲硝唑內(nèi)標(biāo)信噪比測(cè)量結(jié)果的比值,為6次測(cè)量的平均值;

        zj——第j次測(cè)量的信噪比比值;

        j——測(cè)量次數(shù)

        s——試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

        3.5.2 溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量濃度的相對(duì)不確定度ur(c)

        包括前面標(biāo)準(zhǔn)溶液配制所帶來(lái)的所有誤差、稀釋至5 μg/L移液槍誤差、溫度不同引起的體積差異所帶來(lái)的不確定度,以及內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至10 μg/L移液槍誤差、實(shí)驗(yàn)室溫度不同引起的體積差異所帶來(lái)的不確定度,計(jì)算過(guò)程同上,結(jié)果如下:

        標(biāo)準(zhǔn)工作液加入引起的相對(duì)不確定度為:

        內(nèi)標(biāo)溶液加入引起的相對(duì)不確定度為:u9rel=0.79%故溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)量濃度的相對(duì)不確定度為:

        3.5.3 進(jìn)樣體積的相對(duì)不確定度

        采用的進(jìn)樣量V=5 μL,容量允差為±0.015 μL,屬于矩形分布,按B類評(píng)定,

        3.5.4 噪聲強(qiáng)度測(cè)量的不確定度ur(Hn)

        噪聲強(qiáng)度的A類不確定度已經(jīng)在“測(cè)量重復(fù)性”中計(jì)算,該項(xiàng)為噪聲強(qiáng)度的B類不確定度。在實(shí)際計(jì)算中,將譜圖放大后從軟件上讀取噪聲強(qiáng)度,該項(xiàng)不確定度極小,可忽略。

        故液質(zhì)儀器校準(zhǔn)引起的不確定度為:

        3.6 相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和相對(duì)擴(kuò)展不確定度

        甲硝唑測(cè)量不確定度分量見(jiàn)表7。

        表7 甲硝唑測(cè)量不確定度分量

        不考慮以上各不確定度的相關(guān)性,可得動(dòng)物源性食品中甲硝唑殘留的相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:

        在95%置信區(qū)間,取包含因子k=2,甲硝唑的測(cè)定含量相對(duì)擴(kuò)展不確定度為:

        通過(guò)同樣的計(jì)算過(guò)程可以得到在95%置信區(qū)間,羥基甲硝唑、二甲硝咪唑、羥甲基甲硝咪唑和洛硝噠唑的相對(duì)擴(kuò)展不確定度分別為11.0%,11.4%,11.2%,11.3%。

        4 結(jié)論

        通過(guò)對(duì)動(dòng)物源性食品中硝基咪唑類藥物殘留檢測(cè)方法不確定度各來(lái)源的評(píng)定,可以知道該方法的不確定度主要是由標(biāo)準(zhǔn)曲線定量和液質(zhì)聯(lián)用儀器定量引起,樣品稱量的不確定幾乎可以忽略不計(jì)。因此在實(shí)際工作中,應(yīng)加強(qiáng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程訓(xùn)練,減少試驗(yàn)過(guò)程中人為因素產(chǎn)生的誤差,并定期對(duì)試驗(yàn)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)和維護(hù),保持穩(wěn)定的狀態(tài)。在實(shí)際檢測(cè)中,某動(dòng)物源性食品的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)量甲硝唑的含量結(jié)果為0.49 μg/kg,經(jīng)考慮其測(cè)量不確定度=0.49 μg/kg×10.6%=0.05 μg/kg,則其結(jié)果應(yīng)表達(dá)為0.49±0.05 μg/kg。

        [1]汪紀(jì)倉(cāng),王大菊,楊自軍,等.硝基咪唑類藥物殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展 [J].中國(guó)獸藥雜志,2007,41(8):31-33.

        [2]魏博娟,吳成業(yè),錢卓真.液質(zhì)聯(lián)用法測(cè)定水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物殘留量的不確定度評(píng)定 [J].南方水產(chǎn)科學(xué),2012,8(3):59-64.

        [3]中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì).CNAS-GL06化學(xué)分析中不確定度的評(píng)估指南 [S].北京:中國(guó)計(jì)量出版社,2006.

        [4]伊魁宇,王猛.標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量檢測(cè)的不確定度來(lái)源分析 [J].廣州化工,2012,40(9):143-144,153.

        [5]卞永東,王德祥,湯勇,等.LC-MS法測(cè)定動(dòng)物源性食品中抗生素殘留的不確定度評(píng)定 [J].福建分析測(cè)試,2011,20(2):49-54.

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        [7]楊洋,徐春祥,車文軍.高效液相色譜法測(cè)定奶粉中的三聚氰胺及其不確定度分析 [J].食品科學(xué),2010,31(4):250-253.

        [8]趙健亞,陳丹,謝懷根,等.高效液相色譜法測(cè)定雞肉中磺胺類藥物殘留的不確定度評(píng)定 [J].食品科學(xué),2013,34(10):144-147.

        Evaluation of Uncertainty in Determination of Nitroimidazoles Residues in Foodstuffs of Animal Origin by LC-MS/MS

        LAN Cao,ZOU You,OUYANG Shaolun,WU Yingxuan,SHAO Linzhi
        (Inspection and Quarantine Technology Center,Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Guangzhou,Guangdong 510623,China)

        This study establish a mathematical model for evaluation of the uncertainty in determination of 5 kinds of nitroimidazoles residues in foodstuffs of animal origin by high performance liquid-MS/MS(LC-MS/MS),and analyze the uncertainty of different sources such as sample weighting,filtrating,the standard curve fitting,measuring repeatability and LC-MS/MS quantify.By calculating the components of all uncertainties,relative combined standard uncertaintyand expand uncertainty,we obtain a report of uncertainty of nitroimidazoles.The results show that the main source of the uncertainty comes from the standard curve fitting and LC-MS/MS quantify.

        uncertainty;liquid chromatography-tandem mass spectrometry;nitroimidazoles

        TS254.7

        A

        10.16693/j.cnki.1671-9646(X).2017.02.038

        1671-9646(2017)02b-0035-06

        2017-01-18

        廣東省省級(jí)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015A030401075);廣東檢驗(yàn)檢疫局科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015GDK10)。

        藍(lán) 草(1988— ),女,碩士,助理工程師,研究方向?yàn)楂F藥殘留檢測(cè)。

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