陳兵兵 梁昌祥 吳桂容

賀州學(xué)院食品與生物工程學(xué)院 廣西壯族自治區(qū)賀州市 542899

大果山楂黃酮提取的方法研究

陳兵兵 梁昌祥 吳桂容

賀州學(xué)院食品與生物工程學(xué)院 廣西壯族自治區(qū)賀州市 542899

據(jù)調(diào)查，在成熟的大果山楂果實(shí)里面，含有十分豐富的黃酮類物質(zhì)。其有著天然無毒與多種生物活性等優(yōu)點(diǎn)。在大果山楂黃酮的提取方面，不同的方法對(duì)結(jié)果有著較大影響。通過乙醇回流法與超聲法對(duì)大果山楂黃酮提取結(jié)果的對(duì)比分析，得到最有效的提取工藝及各類參數(shù)。結(jié)果顯示，超聲法是提取大果山楂中黃酮的最佳方法，其具有操作簡單與純度高的優(yōu)勢(shì)。

大果山楂；黃酮；提取

1 引言

大果山楂在植物當(dāng)中，被劃歸為薔薇科的一類。適應(yīng)我國南北種植。山楂是我國原有和特有的栽培果樹，其果實(shí)營養(yǎng)豐富，食用與藥用價(jià)值都很高，已被國家衛(wèi)生部確定為藥食兩用食品。在2015年版的《中國藥典》中，再一次將大果山楂收錄。它有著消食健胃與活血化瘀的良好療效，臨床常用于消化不良與產(chǎn)后腹痛等癥狀的緩解。其主要功能除了消食健胃與活血化瘀，還包括腹痛腹脹、腸胃不順、經(jīng)閉、心腹疼痛以及高血脂癥等癥狀的治療[1]。近些年來，大果山楂在臨床上，也廣泛被用于治療高血壓、冠心病以及高脂血癥等一系列的心血管疾病，并取得了良好的療效。其藥理研究中也顯示，大果山楂中的關(guān)鍵成分即黃酮。

相關(guān)的統(tǒng)計(jì)顯示，2016年全國大果山楂種植面積突破600萬畝，總產(chǎn)量突破60萬噸。但是大果山楂的食用與藥用量僅占到總產(chǎn)量的一成。怎樣改善大果山楂的利用率，是大果山楂加工業(yè)與醫(yī)藥領(lǐng)域發(fā)展面臨的重點(diǎn)問題。提取大果山楂中的黃酮，同時(shí)對(duì)剩余物進(jìn)行有效利用，是解決該問題的科學(xué)手段[2]。

本文通過乙醇回流提取法與超聲法這兩類不同的方法，研究了這兩種不同方法對(duì)大果山楂黃酮提取效率的結(jié)果。借助于比色法測定提取的黃酮含量，最后得出大果山楂黃酮提取的最佳方法與工藝條件[3]。

2 原料與方法

2.1 材料與試劑

大果山楂：選擇成熟度良好均勻，外觀圓潤，沒有病蟲害的廣西賀州地區(qū)的大果山植實(shí)施黃酮提取實(shí)驗(yàn)分析。

試劑：主要包括福林酚、無水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、無水碳酸鈉、葡萄糖、鹽酸、鋅粉、醋酸鉛、三氯化鐵、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品等等。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 材料的預(yù)處理

大果山楂進(jìn)行采摘后，對(duì)其清洗，再預(yù)冷并分級(jí)別篩選。歸類后，盛放在聚乙稀薄膜保鮮袋中。將袋口進(jìn)行折疊，放在冰箱，以2-4℃進(jìn)行冷藏。

2.2.2 選用儀器及設(shè)備

表1：提取溫度因素

表2：料液比因素

表3：提取時(shí)間因素

表4：超聲波頻率因素

表5：超聲波作用時(shí)間因素

表6：物料比因素

紫外分光光度計(jì)，由上海天翔光學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。索氏提取器，由上海爭巧科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)。DWF-100植物粉碎機(jī)，由青州市新航機(jī)械設(shè)備有限公司生產(chǎn)。DT5-1離心機(jī)，由北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司生產(chǎn)。YP100電子天平，由上海四藍(lán)儀器設(shè)備股份有限公司生產(chǎn)。

2.2.3 提取液的制備方法

用電子天平稱取5g已經(jīng)粉碎去核的大果山楂，放置平底燒瓶內(nèi)。依據(jù)一定的料液比加入配制的提取溶劑，在預(yù)先設(shè)定的提取溫度與時(shí)間下，展開水浴回流提取實(shí)驗(yàn)。對(duì)提取液進(jìn)行真空抽濾，進(jìn)行前后兩次提取后，進(jìn)行合并。濾液在50℃以下工況，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至小于25mL，倒入100mL容量瓶中，再借助于提取劑定容至指定刻度[4]。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法

依次精密吸取蘆丁對(duì)照液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml，即含有蘆丁0、150、300、450、600、750μg，倒入12.5ml比色管內(nèi)。加入30%的乙醇，直到其容量達(dá)到5ml。再加入5%濃度的亞硝酸鈉溶液0.30ml，經(jīng)過搖勻后放置5分鐘。接著再添加10%濃度的硝酸鋁溶液0.3ml，同樣經(jīng)過搖勻后放置6分鐘。接著加入1.0mol/LNaOH的溶液2.00ml，通過30%的乙醇定容至指定刻度，進(jìn)行搖勻處理，再放置15分鐘，通過空白管調(diào)零[5]。搖勻后，借助于1cm的比色杯，在510nm波長處對(duì)吸光度進(jìn)行測定，總計(jì)3次，算出其平均值，再進(jìn)行回歸處理。得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程與相關(guān)系數(shù)，即Y=7.19×10-4X-3.31×10-2，得出 r=0.9879。得到蘆丁含量（μg）和吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.3 結(jié)果與分析

2.3.1 乙醇回流提取法

（1）提取條件。首先將大果山楂粉碎過20目篩，在105℃環(huán)境下干燥2小時(shí)，取出粉末1g，放置在回流提取器內(nèi)?；亓魈崛∏昂蠊灿?jì)3次，再對(duì)提取液進(jìn)行合并，回收乙醇，得到大果山楂黃酮提取液。將容量定至100ml，測出其吸光度。

依次改變提取溫度、料液比以及提取時(shí)間等參數(shù)，進(jìn)行對(duì)比分析。

（2）提取溫度。實(shí)驗(yàn)過程中，溫度高低，反映了分子無規(guī)則運(yùn)動(dòng)的劇烈狀況如何。通過對(duì)比分析得知，伴隨著溫度的提升，黃酮在乙醇溶液里面的溶解度也得到了增加，由此提取率逐漸提高。但是假如溫度過高，那么雜質(zhì)也會(huì)大量溶出，使提取效率受到一定的影響。見表1。

（3）料液比。從實(shí)驗(yàn)中得知，伴隨著料液比的增加，提取率也相應(yīng)增加。但是如果料液比，即質(zhì)量與體積的比值大于1:9時(shí)，那么提取率的增速放緩。這時(shí)再增加液料比時(shí)，那么提取率的變化不明顯。黃酮的提取此時(shí)充分。見表2。

（4）提取時(shí)間。由表3可見，在其它條件均相同的基礎(chǔ)上，延長提取時(shí)間，但黃酮的提取率并非始終增高。2小時(shí)后，提取率還有著下降的狀況。這也許是黃酮提取物受到了氧化的影響。所以將實(shí)驗(yàn)的時(shí)間安排在2小時(shí)比較適宜。

2.3.2 超聲提取法

（1）超聲波頻率。由表4可見，隨著超聲波頻率的增大，提取作用得到增強(qiáng)，提取率也隨之增加。但也不是始終在增加。當(dāng)超聲波頻率超過40kHz時(shí)，提取率出現(xiàn)了下降趨勢(shì)。

（2）超聲波作用時(shí)間。由表5可見，伴隨著超聲波作用時(shí)間的不斷增加，黃酮提取率也呈現(xiàn)出正態(tài)分布的特征。一旦時(shí)間超過15分鐘，提取率發(fā)生了下降的現(xiàn)象。由于超聲波作用時(shí)間增加，黃酮提取物也將受到氧化的影響。其最佳時(shí)間是15分鐘。

（3）物料比。通過對(duì)比分析，得知物料比對(duì)黃酮提取含量的影響，見表6所示。

通常從理論上來說，料液比越大，那么提取率也就相應(yīng)越大。如果料液比超過40，那么提取率將變得穩(wěn)定，即相應(yīng)的溶劑已經(jīng)把有效的成分溶解出去。

3 結(jié)論

本文通過乙醇回流提取法與超聲波法的對(duì)比分析，得出大果山楂黃酮提取的最佳工藝方法。

（1）材料預(yù)處理，包括大果山楂去核、干燥、粉碎、添加乙醇溶液、過濾、濃縮、提純、冷藏等。

（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法方面，首先取干燥大果山楂粉末2.5g，添加70%的乙醇100ml，進(jìn)行前后三次超聲波震蕩，每次15分鐘，并間隔15后進(jìn)行下一次。接著再合并提取液，對(duì)乙醇進(jìn)行回收處理，最終得到大果山楂黃酮的提取液。將其容量定至100ml，測出其吸光度。

（3）工藝參數(shù)設(shè)定方面：需要70%濃度的乙醇。超聲波頻率設(shè)定為40kHz最佳，作用時(shí)間應(yīng)保持15分鐘。料液比設(shè)定為1:40。

通過本文的分析可見，針對(duì)大果山楂黃酮提取，超聲波法典型的優(yōu)勢(shì)是步驟簡單，易于操作。僅需少量的有機(jī)溶劑，同時(shí)選擇的試劑對(duì)人體無毒無害，所以適用于大批量生產(chǎn)。

[1]郭國華.臨床中藥辭典[M].長沙:湖南科學(xué)技術(shù)出版社,2008.

[2]張黎明,楊鑫,曹宇等.山楂葉總黃酮的水浸提和純化工藝研究[J].食品研究與開發(fā),2010,31(01):12-16.

[3]汪春軍,陳紅艷,宋可珂.植物黃酮類化合物的提取分離研究進(jìn)展[J].廣東化工,2011,6(39):91-92.

[4]宋卓悅.東北山里紅黃酮BBD優(yōu)化高效提取及季節(jié)動(dòng)態(tài)研究[D].哈爾濱:東北林業(yè)大學(xué),2015.

[5]劉璐,付明哲,王俠等.植物黃酮類化合物提取及測定方法研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2011,32(06):151-155.

陳兵兵（1968-），女，廣西壯族自治區(qū)浦北縣人。現(xiàn)為賀州學(xué)院食品與生物工程學(xué)院高級(jí)講師，醫(yī)學(xué)學(xué)士學(xué)位，從事保健品、食品開發(fā)方面的研究。

賀州學(xué)院科研項(xiàng)目2014YBZK16。