劉興鈴，董文斌，李清平，雷小平，張蓮玉，盧佑英，趙帥

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，四川瀘州646000)

胎齡<37周出生的活產(chǎn)嬰兒稱為早產(chǎn)兒或未成熟兒。由于早產(chǎn)兒肺臟發(fā)育常不成熟，多需要進(jìn)行呼吸支持，而隨著機(jī)械通氣和吸氧治療(以下簡稱氧療)時(shí)間的延長，可導(dǎo)致早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病甚至早產(chǎn)兒支氣管肺發(fā)育不良(BPD)的發(fā)生[1]?；钚匝醮?ROS)是細(xì)胞線粒體呼吸過程中產(chǎn)生的一個(gè)導(dǎo)致氧化損傷和老化的破壞性產(chǎn)物，是氧化應(yīng)激反應(yīng)過程中的重要指標(biāo)。本課題組前期研究證實(shí)[2]，高濃度的氧暴露可誘導(dǎo)早產(chǎn)兒外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)中產(chǎn)生大量的ROS，促進(jìn)氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，但其機(jī)制尚不明確。沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1(SIRT1)是一種應(yīng)激反應(yīng)性分子，作為底物參與SUMO化反應(yīng)，發(fā)揮其去乙?；谋Ｗo(hù)作用，避免氧化應(yīng)激等損傷[3]。SUMO特異性蛋白酶家族(SENPs)參與SUMO蛋白共價(jià)結(jié)合(被切斷)到靶蛋白賴氨酸殘基上的動(dòng)態(tài)可逆過程，目前研究較多的是SENP1， SIRT1又可以被SENP1去SUMO化，抑制SIRT1的去乙酰化活性[3]。p53是SIRT1的非組蛋白底物，乙?；痯53的促凋亡作用可以被SIRT1的去乙?；饔镁徑?，達(dá)到抑制凋亡的作用[4]。目前，對(duì)SIRT1信號(hào)通路在高氧對(duì)低體質(zhì)量早產(chǎn)兒氧化應(yīng)激損傷中的作用尚不清楚。2015年6月～2016年7月，我們對(duì)80例低體質(zhì)量早產(chǎn)兒采用不同濃度氧療，觀察PBMCs內(nèi)SIRT1通路相關(guān)蛋白的表達(dá)變化，探討氧暴露對(duì)早產(chǎn)兒氧化應(yīng)激損傷的影響及其機(jī)制，為BPD的防治提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 試劑及儀器 人淋巴細(xì)胞分離液(灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司)；MitoSOXTMRed(Invitrogen公司)；DAPI(北京索萊寶公司)；抗熒光淬滅封片劑(碧云天公司)；兔抗人SIRT1抗體(Abcam公司)；二抗羊抗兔IgG、羊抗小鼠IgG(Abcam公司)；5×SDS上樣緩沖液(上海生工)；蛋白裂解液(美國碧云天公司)；內(nèi)參一抗(Abcam公司)；牛血清白蛋白(Amersham Pharmacia Biotech公司，美國)；PVDF膜(Bio-Rad公司，美國)等。低溫高速離心機(jī)GS-15R(Beckman公司)；超凈工作臺(tái)(Thermo公司)；倒置相差顯微鏡(Olympus公司)；TCSSP5激光共聚焦顯微鏡(Leica公司)；全光譜分光光度儀(Eppendorf公司)；GDS8000凝膠掃描系統(tǒng)(UVP公司)。

1.2 臨床資料 選取2015年6月～2016年7月生后即入住我院新生兒科的低體質(zhì)量早產(chǎn)兒80例，男44例、女36例，胎齡(29.82±0.79)周，入院時(shí)間為生后(4.51±2.21)h，出生體質(zhì)量(1 152±117)g。納入標(biāo)準(zhǔn)：胎齡<32周；出生體質(zhì)量<1 500 g[11]；入院時(shí)診斷為新生兒呼吸窘迫綜合征且需要立即氧療；出生24 h內(nèi)入院且存活至生后住院時(shí)間28 d以上。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并復(fù)雜型先天性心臟病及其他先天畸形。按氧暴露水平進(jìn)行前瞻性隊(duì)列分組，根據(jù)吸氧濃度分為對(duì)照組、低濃度吸氧組、中濃度吸氧組、高濃度吸氧組各20例。四組患兒性別、胎齡、出生體質(zhì)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，征得家屬同意并簽署知情同意書。

1.3 氧療方法 四組均于出生后即開始進(jìn)行氧療，采用低氧無創(chuàng)CPAP輔助通氣或有創(chuàng)呼吸機(jī)機(jī)械通氣(氣管插管)。對(duì)照組吸氧濃度FiO2=21%或以FiO2>21%吸氧，但總吸氧時(shí)間<24 h；低濃度吸氧組FiO2>21%，吸氧時(shí)間>24 h，或因病情需要FiO2>30%的吸氧時(shí)間<24 h；中濃度吸氧組FiO2為30%～<40%，吸氧時(shí)間>24 h，或因病情需要FiO2>40%的吸氧時(shí)間<24 h；高濃度吸氧組為FiO2≥40%且吸氧時(shí)間>24 h。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 PBMCs分離 分別于生后0、7、14、28 d時(shí)，均經(jīng)橈動(dòng)脈采血2 mL，置于EDTA抗凝管中，采用Ficoll密度梯度離心法分離PBMCs。

1.4.2 PBMCs中ROS水平檢測 采用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)。將分離出的PBMCs調(diào)整細(xì)胞數(shù)為2×106/mL。取200 μL細(xì)胞懸液小心均勻涂于黏附載玻片上待干；滴加40 g/L多聚甲醛固定20 min，按說明書配制Mito SOX探針，滴加800 μL均勻覆蓋于細(xì)胞層上，37 ℃濕盒孵育30 min。取10 μg/mL DAPI 80 μL藍(lán)色熒光染料染細(xì)胞核5 min，滴加20 μL抗熒光淬滅劑封片。采用激光共聚焦顯微鏡檢測紅色熒光(激發(fā)波長510 nm、發(fā)射波長580 nm)，采用Image Pro Plus6.0圖像分析軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析處理，測定平均熒光強(qiáng)度，從而反映ROS水平。

1.4.3 PBMCs中SIRT1定位檢測 采用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)。細(xì)胞涂片和固定同上，滴加80 μL 0.2%TritonX-100室溫下穿透細(xì)胞15 min，滴加正常山羊血清工作液，滴加抗體稀釋液稀釋的兔抗人SIRT1抗體(1∶80)， 4 ℃孵育過夜。避光滴加FITC記山羊抗小兔IgG(1∶800)，37 ℃孵育1 h。DAPI染核，抗熒光淬滅劑封片，用激光共聚焦顯微鏡檢測紅色熒光(激發(fā)波長488 nm)，反映SIRT1定位情況[12]。DAPI染細(xì)胞核標(biāo)記藍(lán)色熒光，兩種熒光合成為紫色熒光。運(yùn)用Image Pro Plus 中的line profile測定細(xì)胞內(nèi)紫色熒光強(qiáng)度分布，出現(xiàn)熒光強(qiáng)度向靠近胞膜側(cè)增高而在胞核中降低的細(xì)胞即為發(fā)生SIRT1轉(zhuǎn)位的陽性細(xì)胞。取8個(gè)視野，以陽性細(xì)胞數(shù)占細(xì)胞總數(shù)的構(gòu)成比計(jì)算轉(zhuǎn)位率。

1.4.4 PBMCs內(nèi)胞核SIRT1蛋白表達(dá)檢測 采用Western blot法。懸浮細(xì)胞離心，棄上清留下細(xì)胞沉淀，PMSF的細(xì)胞質(zhì)蛋白抽提試劑A，把細(xì)胞沉淀完全懸浮并分散開，冰?。患尤爰?xì)胞質(zhì)蛋白抽提試劑B 10 μL，得到細(xì)胞質(zhì)蛋白。添加PMSF細(xì)胞核蛋白抽提試劑，震蕩、離心后得到細(xì)胞核蛋白。SDS-PAGE電泳、封閉，取出聚偏二氟乙烯膜，顯影后晾干。采用UVP凝膠圖像處理系統(tǒng)Lakworks4.6軟件分析目的條帶的灰度值，結(jié)果以胞核SIRT1/GAPDH表示。

1.4.5 PBMCs內(nèi)SENP1、乙?；痯53蛋白表達(dá)檢測 采用Western blot法。淋巴細(xì)胞分離，收集細(xì)胞離心，加入細(xì)胞裂解液(RIPA)，充分振蕩，離心吸取上清，Bradford方法蛋白定量后加入等體積2×上樣緩沖液，煮沸5 min，短暫離心后-20 ℃保存。取50 μg蛋白樣品行8% SDSPAGE電泳。用濕轉(zhuǎn)法將膠上蛋白轉(zhuǎn)移至NC膜上，加入鼠源一抗，4 ℃過夜后，加入HRP標(biāo)記的兔抗鼠二抗。緩沖液沖洗后，進(jìn)入暗室，顯影、晾干后，采用UVP凝膠圖像處理系統(tǒng)Lakworks4.6軟件分析目的條帶的灰度值，結(jié)果以SIRT1、乙?；痯53與GAPDH的比值表示蛋白表達(dá)量。

2 結(jié)果

2.1 各組不同時(shí)間PBMCs中ROS水平比較 低、中、高濃度吸氧組各時(shí)點(diǎn)PBMCs中ROS水平均高于對(duì)照組，中、高濃度吸氧組各時(shí)點(diǎn)ROS水平均高于低濃度吸氧組，高濃度吸氧組各時(shí)點(diǎn)ROS水平均高于中濃度吸氧組(P均<0.05)；在各時(shí)點(diǎn)，PBMCs中ROS水平隨氧濃度增高而增高(F= 889.085，P<0.01)。生后7、14、28 d時(shí)各吸氧組PBMCs中ROS水平均高于生后0 d，生后14、28 d時(shí)各吸氧組PBMCs中ROS水平均高于生后7 d，生后28 d各吸氧組PBMCs中ROS水平均高于生后14 d(P均<0.05)；各吸氧組PBMCs中ROS水平隨氧療時(shí)間增加而增高(F=368.535，P<0.01)。吸氧濃度和時(shí)點(diǎn)有交互效應(yīng)(F=177.832，P<0.01)，隨著時(shí)間的變化，不同氧濃度組各時(shí)點(diǎn)PBMCs中ROS的生成量變化趨勢不同。隨著吸入氧濃度的程度增加、生后時(shí)間的延長，ROS水平增加。見表1。

表1 各組不同時(shí)間PBMCs中ROS水平比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與低濃度吸氧組比較，△P<0.05；與中濃度吸氧組比較，#P<0.05；與同組生后0 d比較，aP<0.05；與同組生后7 d比較，bP<0.05；與同組生后14 d比較，cP<0.05。

2.2 各組PBMCs中SIRT1定位 低、中、高濃度吸氧組各時(shí)點(diǎn)PBMCs中SIRT1轉(zhuǎn)位率均高于對(duì)照組，中、高濃度吸氧組各時(shí)點(diǎn)SIRT1轉(zhuǎn)位率均高于低濃度吸氧組，高濃度吸氧組各時(shí)點(diǎn)SIRT1轉(zhuǎn)位率均高于中濃度吸氧組(P均<0.05)。生后7 d、生后14 d、生后28 d各吸氧組PBMCs中SIRT1轉(zhuǎn)位率均高于生后0 d，生后14 d、生后28 d各吸氧組PBMCs中SIRT1轉(zhuǎn)位率均高于生后7 d，生后28 d各吸氧組PBMCs中SIRT1轉(zhuǎn)位率均高于生后14 d(P均<0.05)。吸氧濃度和時(shí)點(diǎn)有交互效應(yīng)(F=347.299，P<0.01)，隨著吸入氧濃度的濃度增加及生后時(shí)間的延長，SIRT1轉(zhuǎn)位率增加。見表2。

表2 各組PBMCs中SIRT1轉(zhuǎn)位率比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與低濃度吸氧組比較，△P<0.05；與中濃度吸氧組比較，#P<0.05；與同組生后0 d比較，aP<0.05；與同組生后7 d比較，bP<0.05；與同組生后14 d比較，cP<0.05。

2.3 各組PBMCs中胞核SIRT1蛋白表達(dá)比較 低、中、高濃度吸氧組除生后0 d外，其余時(shí)點(diǎn)上PBMCs中胞核SIRT1蛋白表達(dá)均低于對(duì)照組(P均<0.05)，中、高濃度吸氧組除生后0 d外，其余時(shí)點(diǎn)PBMCs中胞核SIRT1蛋白表達(dá)均低于低濃度吸氧組(P均<0.05)，高濃度吸氧組生后7 d、生后14 d、生后28 d的PBMCs中胞核SIRT1蛋白表達(dá)均低于中濃度吸氧組(P均<0.05)。與生后0 d比較，生后7 d各吸氧組的PBMCs中胞核SIRT1蛋白表達(dá)均無明顯改變(P均>0.05)，生后14、28 d各吸氧組PBMCs中胞核SIRT1蛋白表達(dá)均低于生后7 d(P均<0.05)，生后28 d的各吸氧組PBMCs中胞核SIRT1蛋白表達(dá)均低于生后14 d(P均<0.05)。吸氧濃度和時(shí)點(diǎn)有交互效應(yīng)(F=3.117，P<0.05)，隨著吸入氧濃度的濃度增加及生后時(shí)間的延長，SIRT1轉(zhuǎn)位率增加。見表3。

表3 各組PBMCs中胞核SIRT1蛋白表達(dá)比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與低濃度吸氧組比較，△P<0.05；與中濃度吸氧組比較，#P<0.05；與同組生后0 d比較，aP<0.05；與同組生后7 d比較，bP<0.05；與同組生后14 d比較，cP<0.05。

2.4 各組PBMCs中SENP1蛋白表達(dá)比較 中、高濃度吸氧組除生后0 d外，其余時(shí)點(diǎn)PBMCs中SENP1蛋白表達(dá)均高于低濃度吸氧組(P均<0.05)，高濃度吸氧組生后7、14、28 d的PBMCs中SENP1蛋白表達(dá)均高于中濃度吸氧組(P均<0.05)。中、高濃度吸氧組生后14、28 d的PBMCs中SENP1蛋白表達(dá)均高于生后7 d(P均<0.05)，中、高濃度吸氧組生后28 d的PBMCs中SENP1蛋白表達(dá)均高于生后14 d(P均<0.05)。吸氧濃度和時(shí)點(diǎn)有交互效應(yīng)(F=7.400，P<0.05)，隨著吸入氧濃度的增加及生后時(shí)間的延長，SENP1蛋白表達(dá)增加。見表4。

表4 各組PBMCs中SENP1蛋白表達(dá)比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與低濃度吸氧組比較，△P<0.05；與中濃度吸氧組比較，#P<0.05；與同組生后0 d比較，aP<0.05；與同組生后7 d比較，bP<0.05；與同組生后14 d比較，cP<0.05。

2.5 各組PBMCs中乙?；痯53蛋白表達(dá)比較 中、高濃度吸氧組各時(shí)點(diǎn)PBMCs中乙?；痯53蛋白表達(dá)均高于低濃度吸氧組(P均<0.05)，高濃度吸氧組各時(shí)點(diǎn)PBMCs中乙?；痯53蛋白表達(dá)均高于中濃度吸氧組(P均<0.05)。生后7、14、28 d的中、高濃度吸氧組的PBMCs中乙酰化p53蛋白表達(dá)均高于生后0 d(P均<0.05)，生后14、28 d的中、高濃度吸氧組PBMCs中乙?；痯53蛋白表達(dá)均高于生后7 d(P均<0.05)，生后28 d的中、高濃度吸氧組PBMCs中乙酰化p53蛋白表達(dá)均高于生后14 d(P均<0.05)。吸氧濃度和時(shí)點(diǎn)有交互效應(yīng)(F=8.6037，P<0.05)，隨著吸入氧濃度的濃度增加及生后時(shí)間的延長，乙?；痯53蛋白增加。見表5。

表5 各組PBMCs中乙酰化p53蛋白表達(dá)比較

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與低濃度吸氧組比較，△P<0.05；與中濃度吸氧組比較，#P<0.05；與同組生后0 d比較，aP<0.05；與同組生后7 d比較，bP<0.05；與同組生后14 d比較，cP<0.05。

3 討論

近年來，隨著產(chǎn)前糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用、生后呼吸支持技術(shù)的發(fā)展、新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房的建立等，極早早產(chǎn)兒、極低體質(zhì)量兒存活率明顯提高[5]。但由于早產(chǎn)低體質(zhì)量兒肺處于發(fā)育不成熟的階段，肺表面活性物質(zhì)分泌不足、肺順應(yīng)性低，故生后早期就有氧療指征，常需行機(jī)械通氣及氧療，置于長時(shí)間用氧環(huán)境中[6]。但氧療在提高存活率的同時(shí)，由于早產(chǎn)兒各系統(tǒng)發(fā)育不成熟，高濃度氧療可導(dǎo)致氧損傷或氧中毒，其最常見的并發(fā)癥是肺損傷。發(fā)生氧中毒時(shí)，可直接損傷肺泡上皮細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，使肺泡毛細(xì)血管通透性增加，最終可誘發(fā)早產(chǎn)兒BPD的產(chǎn)生[7]。目前，對(duì)長時(shí)間及高濃度氧療導(dǎo)致的氧損傷機(jī)制尚不明確。

研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激反應(yīng)在高氧肺損傷中起著重要作用，氧化應(yīng)激時(shí)線粒體的ROS生成增加，當(dāng)累積超過正常生理水平時(shí)，會(huì)損傷線粒體內(nèi)膜及DNA，影響線粒體的生物合成，破壞氧化呼吸鏈NAD+與NADH的相互轉(zhuǎn)換[8]。研究證明，當(dāng)高氧暴露后，由于這類早產(chǎn)兒肺發(fā)育極不成熟，缺乏抵抗氧化應(yīng)激的能力，高氧誘導(dǎo)的大量ROS不能被機(jī)體抗氧化應(yīng)激酶所清除，造成氧化應(yīng)激損傷，甚至這些ROS會(huì)上調(diào)促凋亡蛋白的表達(dá)，激活Casepse凋亡途徑，導(dǎo)致高氧肺損傷[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，吸氧濃度和時(shí)點(diǎn)有交互效應(yīng)，說明隨著時(shí)間的變化，不同氧濃度組各時(shí)點(diǎn)PBMCs中ROS的生成量變化趨勢不同，故PBMCs中ROS水平隨氧濃度的增高而增高，各吸氧組PBMCs中ROS水平隨氧療時(shí)間的增加而增高。

SIRT1是一種依賴酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD+的組蛋白/非組蛋白去乙?；?，正常生理情況下，SIRT1可維持足夠的NAD+，對(duì)活性氧簇的產(chǎn)生具有抑制作用。SIRT1在哺乳動(dòng)物細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中均有表達(dá)，尤以細(xì)胞核為主，細(xì)胞核較細(xì)胞質(zhì)明顯多，并且核內(nèi)SIRT1亞細(xì)胞定位受Ⅱ類去乙?；负?漿穿梭中機(jī)制調(diào)節(jié)，與細(xì)胞增殖、分化、衰老、凋亡和代謝密切相關(guān)。Yang等[10]研究發(fā)現(xiàn)，人類SIRT1蛋白在生理調(diào)節(jié)下定位于細(xì)胞核。有研究顯示[11]，在細(xì)胞核中SIRT1表達(dá)是抗凋亡作用，而在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)是促凋亡作用，所以核內(nèi)SIRT1在機(jī)體損傷后升高顯得更加有保護(hù)意義。隨著ROS升高，會(huì)使生物膜脂質(zhì)氧化，膜的正常結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞后，膜的通透性和流動(dòng)性發(fā)生改變，導(dǎo)致SIRT1發(fā)生核質(zhì)穿梭，細(xì)胞核中SIRT1減少，其在胞核中發(fā)揮的去乙?；饔脺p弱，對(duì)細(xì)胞的保護(hù)性作用減弱，并且轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)的SIRT1是促凋亡因子。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，高氧可誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生增加，使SIRT1發(fā)生核質(zhì)穿梭[2]。本研究發(fā)現(xiàn)，在免疫熒光檢測中，SIRT1的轉(zhuǎn)位率，在吸氧濃度和時(shí)點(diǎn)有交互效應(yīng)，提示隨著吸氧濃度的增加、生后時(shí)間延長SIRT1發(fā)生核-質(zhì)穿梭的細(xì)胞數(shù)也增加，會(huì)出現(xiàn)去乙?；饔脺p弱，與SIRT1結(jié)合的組蛋白，發(fā)生乙?；磻?yīng)，會(huì)啟動(dòng)參與細(xì)胞損傷的過程。并且也發(fā)現(xiàn)，SIRT1蛋白在細(xì)胞核的表達(dá)在在吸氧濃度和時(shí)點(diǎn)有交互效應(yīng)，說明隨著吸氧濃度增加、生后時(shí)間的延長， ROS增加，細(xì)胞氧化應(yīng)激程度加重，脂質(zhì)氧化后通透性增加，各吸氧組各時(shí)點(diǎn)PBMCs中SIRT1蛋白發(fā)生轉(zhuǎn)位后，在細(xì)胞核表達(dá)減少，而細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)逐漸增多，細(xì)胞損傷進(jìn)行性加重。

SENPs在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中有6個(gè)成員，目前研究較多的是SENP1。SIRT1是SUMO的底物蛋白，能被SUMO化修飾，形成SIRT1/SUMO蛋白復(fù)合物，參與應(yīng)對(duì)抗凋亡等保護(hù)作用[12]。研究證實(shí)[3,13]，當(dāng)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激等刺激時(shí)，SENP1不僅參與SUMO化可逆過程，還參與催熟SUMO-1前體，參與SUMO化反應(yīng)，一方面，SUMO化修飾SIRT1是SUMO-1，SENP1參與該動(dòng)態(tài)反應(yīng)的過程，另一方面，SIRT1又可以被SENP1去SUMO化，因此，SIRT1的去乙?；钚詴?huì)受到抑制。本研究結(jié)果顯示，吸氧濃度和時(shí)點(diǎn)有交互效應(yīng)，說明隨著生后時(shí)間的變化，不同吸氧濃度組各時(shí)點(diǎn)PBMCs中SENP1蛋白表達(dá)不同。隨著吸入氧濃度的濃度增加及生后時(shí)間的延長，SENP1蛋白表達(dá)增加,提示隨著SENP1的升高，發(fā)生去SUMO化和SUMO化反應(yīng)的失衡，SIRT1/SUMO蛋白復(fù)合物解體，下調(diào)SIRT1的去乙?；饔?，SIRT1也將發(fā)生核質(zhì)穿梭。

SIRT1可以通過去乙酰化作用于靶蛋白如p53、FOXO家族等，發(fā)揮其抗氧化應(yīng)激、抗炎、抗凋亡等保護(hù)細(xì)胞的作用[3]。研究表明，SIRT1多作用于p53的第373和382賴氨酸位點(diǎn)，SIRT1可能使p53在第373和382賴氨酸位點(diǎn)去乙酰化，進(jìn)而通過抑制p53的轉(zhuǎn)錄活性，從而阻止氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。乙?；痯53的促凋亡作用可以被SIRT1的去乙酰化作用緩解，達(dá)到抑制凋亡的作用[10]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，在低濃度吸氧組生后7 d時(shí)，細(xì)胞乙?；痯53的表達(dá)并無差異，這可能是機(jī)體p53蛋白保護(hù)作用并未失衡；此外，吸氧濃度和時(shí)點(diǎn)有交互效應(yīng)，說明隨著生后時(shí)間的變化，不同吸氧濃度組各時(shí)點(diǎn)PBMCs中乙?；痯53蛋白表達(dá)不同;隨著吸入氧濃度的濃度增加及生后時(shí)間的延長，乙酰化p53蛋白增加,表明氧化應(yīng)激過度時(shí)，SENP1改變，胞核SIRT1發(fā)生轉(zhuǎn)位后，SIRT1去乙?；饔檬艿揭种?，相應(yīng)地，乙?；痯53升高。

綜上所述，隨著氧暴露的程度增加及生后時(shí)間的延長，ROS表達(dá)超過機(jī)體清除能力，發(fā)生氧化應(yīng)激,一方面導(dǎo)致脂質(zhì)膜通透性發(fā)生改變，另一方面使SENP1參與的SUMO化動(dòng)態(tài)可逆過程受到抑制，SIRT1核質(zhì)穿梭更加明顯，胞核SIRT1去乙?；档?，損傷因子乙?；痯53表達(dá)增加，最終導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷。此外，SUMO化SIRT1的改變是否受到氧暴露的時(shí)間影響，機(jī)制尚不清楚，是否還受到其他位點(diǎn)蛋白的參與調(diào)控等均待進(jìn)一步研究證明。