李欣焱，吳淑華，孫晨博，李揚(yáng)揚(yáng)，高向前，何 雙

Raptor、Rictor與結(jié)直腸癌血管生成的相關(guān)性及其臨床意義

李欣焱，吳淑華，孫晨博，李揚(yáng)揚(yáng)，高向前，何 雙

目的 檢測(cè)Raptor、Rictor與血管生成相關(guān)因子HIF-1α、HIF-2α以及VEGF在結(jié)直腸癌中的表達(dá)，探討Raptor、Rictor與結(jié)直腸癌血管生成的相關(guān)性及其臨床意義。方法 采用免疫組化、Western blot、RT-PCR法檢測(cè)120例結(jié)直腸癌組織及60例正常結(jié)直腸黏膜組織中Raptor、Rictor及HIF-1α、HIF-2α、VEGF的表達(dá)及其差異；CD34標(biāo)記微血管密度(microvascular density, MVD)；分析各指標(biāo)間的相關(guān)性以及與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α和VEGF蛋白在結(jié)直腸癌中的陽(yáng)性率均明顯高于正常結(jié)直腸黏膜組織(P<0.05)。Raptor、Rictor在中、低分化結(jié)直腸癌中的表達(dá)高于高分化結(jié)直腸癌(P<0.05)，同時(shí)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)；HIF-1α、HIF-2α和VEGF在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05)；Raptor、Rictor陽(yáng)性的結(jié)直腸癌組織中MVD明顯高于Raptor、Rictor陰性的結(jié)直腸癌組織(P<0.05)；Raptor與HIF-1α、VEGF在結(jié)直腸癌中表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.01)，Rictor與HIF-2α、VEGF表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.01)，Raptor與Rictor在結(jié)直腸癌中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。結(jié)論 mTOR核心分子Raptor、Rictor與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及血管生成密切相關(guān)，兩者以不同途徑協(xié)同促進(jìn)結(jié)直腸癌的血管生成。

結(jié)直腸腫瘤；Raptor；Rictor；HIF-1α；HIF-2α；VEGF

血管生成是腫瘤賴(lài)以生存的基礎(chǔ)，并與腫瘤轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)密切相關(guān)；干預(yù)腫瘤血管生成已成為腫瘤靶向治療的重要手段之一，如貝伐單抗等。然而，臨床研究和應(yīng)用結(jié)果表明[1]，抗腫瘤血管生成藥物的療效沒(méi)有臨床前研究中預(yù)期的好，常因腫瘤產(chǎn)生耐藥性導(dǎo)致治療失敗。因此，進(jìn)一步探索阻斷腫瘤血管形成的途徑和靶點(diǎn)具有重要意義。眾所周知，腫瘤血管形成機(jī)制復(fù)雜，始于諸多血管生成因子和抗血管生成因子平衡的打破，并且許多細(xì)胞信號(hào)通路參與調(diào)控并影響腫瘤血管形成[2]。研究表明，哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)是PI3K/AKT/mTOR通路中的關(guān)鍵分子，在調(diào)控細(xì)胞增殖、凋亡、遷徙以及腫瘤血管的生成過(guò)程中發(fā)揮重要作用[3]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)結(jié)直腸癌標(biāo)本中mTOR的核心分子Raptor、Rictor與缺氧誘導(dǎo)因子(hypoxia inducible facter, HIF)家族成員HIF-1α、HIF-2α、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表達(dá)以及腫瘤微血管密度(microvascular density, MVD)的相關(guān)性，觀察結(jié)直腸癌中Raptor、Rictor與血管生成的關(guān)系及意義，旨在進(jìn)一步明確結(jié)直腸癌血管生成機(jī)制，為以阻斷血管治療策略的結(jié)直腸癌個(gè)性化治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1 材料 選取濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2013年1月～2015年7月手術(shù)切除的120例結(jié)直腸癌標(biāo)本，其中男性63例，女性57例；年齡28～84歲，中位年齡58歲；腫瘤直徑≥5 cm者52例，<5 cm者68例；結(jié)腸49例，直腸71例；高分化74例，中分化27例，低分化19例；浸潤(rùn)深度：黏膜及黏膜下層60例，肌層17例，漿膜或外膜43例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者33例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移者87例。所有病例均為首次發(fā)現(xiàn)，術(shù)前均未行任何放、化療，術(shù)后均進(jìn)行了聯(lián)合化療。選取60例正常結(jié)直腸黏膜組織(距病變邊緣>5 cm)作為對(duì)照。所有標(biāo)本均分別及時(shí)放入液氮中凍存和經(jīng)用甲醛固定、石蠟包埋。根據(jù)WHO(2010)消化系統(tǒng)腫瘤分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，由兩位以上資深病理專(zhuān)家經(jīng)雙盲法重新閱片。

1.2 試劑 鼠抗人VEGF(ab1316)抗體、兔抗人Raptor(ab40768)、Rictor(ab104838)、HIF-1α(ab51608)及HIF-2α(ab199)抗體均購(gòu)自Abcam公司；鼠抗人CD34抗體及免疫組化試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋公司；Western blot實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑購(gòu)自碧云天公司；RT-PCR實(shí)驗(yàn)所需的RNAiso Plus、RT試劑盒及PCR試劑盒均購(gòu)自Takara公司，Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α及VEGF特異性引物序列由Takara公司合成。

1.3 方法

1.3.1 免疫組化及結(jié)果判定 采用免疫組化EnVision法染色，石蠟標(biāo)本切片、脫蠟、水化，3%H2O2孵育30 min，高壓熱修復(fù)抗原，滴加一抗(Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α、VEFG均以1 ∶100濃度配比)4 ℃過(guò)夜，加二抗37 ℃孵育30 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，1%鹽酸乙醇分化，返藍(lán)，脫水，透明，封固。HIF-1α、HIF-2α、VEGF用已知結(jié)直腸癌的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，Raptor、Rictor用睪丸癌切片作為陽(yáng)性對(duì)照，均用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。Rictor、HIF-2α及VEGF表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，Raptor、HIF-1α表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)/核，以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性標(biāo)志，每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍(×400)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)判實(shí)驗(yàn)結(jié)果。(1)按細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分：無(wú)染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。(2)按陽(yáng)性細(xì)胞比例評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。將兩項(xiàng)得分結(jié)果相乘：≥4分為陽(yáng)性，<4分為陰性。

1.3.2 結(jié)直腸癌組織中MVD計(jì)數(shù) 采用免疫組化EnVision法染色，以CD34標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞，胞質(zhì)棕黃色視為陽(yáng)性。MVD的判定標(biāo)準(zhǔn)參照Weidner法[4]：將單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞簇和圍成管腔者以及含有1～2層平滑肌的血管視為微血管進(jìn)行計(jì)數(shù)；低倍鏡下(×40)選擇微血管分布最高密度區(qū)即“熱點(diǎn)”區(qū)，計(jì)數(shù)5個(gè)高倍鏡視野(×200)內(nèi)的微血管數(shù)，取其平均值，即該例的MVD值。

1.3.3 Western blot法檢測(cè)及結(jié)果判定 冰上提取組織蛋白，經(jīng)BCA法蛋白定量后上樣，SDS-PAGE電泳分離蛋白質(zhì)，PVDF轉(zhuǎn)膜1.5 h，5%脫脂奶粉溶液封閉1.5 h，加一抗(Raptor、Rictor、HIF-2α均以1 ∶1 000濃度配比； VEFG、HIF-1α均以1 ∶500濃度配比)4 ℃過(guò)夜，加二抗(羊抗兔IgG 1 ∶5 000)37 ℃孵育1.5 h，PBST洗膜，暗室曝光、顯影、定影，室溫晾干、掃描。用Quantity One軟件分析目的蛋白和β-actin的吸光度值，以目的蛋白與β-actin吸光度值的比值作為目的蛋白的相對(duì)表達(dá)值。

1.3.4 RT-PCR檢測(cè)及結(jié)果判定 按照Trizol試劑盒說(shuō)明書(shū)提取組織RNA并檢測(cè)其濃度，在37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s條件下將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。PCR反應(yīng)采用SYBR Green相對(duì)定量PCR法，按照說(shuō)明書(shū)配置25 μL體系反應(yīng)液，在CFX96T RT-PCR Detection System C1000上進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件：95 ℃ 30 s GOTO 39(共40個(gè)循環(huán))，95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s。用系統(tǒng)軟件分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果：采用ΔΔCt法檢測(cè)，樣品相對(duì)表達(dá)量用2-△△Ct表示，ΔΔCt=結(jié)直腸癌ΔCt-正常結(jié)直腸黏膜組織ΔCt，ΔCt=目的基因Ct值-GAPDH Ct值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果取其平均值。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)直腸癌中Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α和VEGF的表達(dá) 免疫組化結(jié)果顯示：Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α和VEGF主要表達(dá)于結(jié)直腸癌細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中，其陽(yáng)性率分別為52.50%、60.00%、69.17%、48.33%和74.17%，均明顯高于正常結(jié)直腸黏膜組織，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖1)。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示：Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α和VEGF蛋白在結(jié)直腸癌組織和正常結(jié)直腸黏膜組織中的相對(duì)表達(dá)量顯著不同，其差異有顯著性(P<0.05，圖2)。RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：結(jié)直腸癌中Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α和VEGF的相對(duì)表達(dá)量均高于正常黏膜組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖3)。

2.2 Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α和VEGF蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的相關(guān)性 結(jié)直腸癌標(biāo)本中Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α和VEGF蛋白表達(dá)水平與患者年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤部位和浸潤(rùn)深度均無(wú)相關(guān)性。Raptor、Rictor蛋白表達(dá)與結(jié)直腸癌的分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性，Raptor、Rictor蛋白在中、低分化結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)明顯高于高分化結(jié)直腸癌組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，差異有顯著性(P<0.05)；HIF-1α、HIF-2α和VEGF蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，HIF-1α、HIF-2α和VEGF在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織的表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P<0.05，表1)。

2.3 結(jié)直腸癌組織中Raptor、Rictor表達(dá)與MVD的相關(guān)性 免疫組化標(biāo)記CD34來(lái)表示腫瘤組織內(nèi)微血管并計(jì)數(shù)，結(jié)果顯示：結(jié)直腸癌中CD34標(biāo)記陽(yáng) 性微血管數(shù)目Rictor、Raptor平均在 25.24±6.34～41.32±9.56之間；Raptor、Rictor陽(yáng)性的結(jié)直腸癌組織中MVD(41.32±9.56、33.47±7.38)高于Raptor、Rictor陰性者(29.73±6.63、25.24±6.34)，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Spearman相關(guān)性分析顯示，結(jié)直腸癌中Raptor、Rictor均與MVD呈正相關(guān)(rs=0.432，P<0.05；rs=0.313，P<0.05)，即隨著Raptor、Rictor表達(dá)的增強(qiáng)，MVD隨之升高(表2)。

表1 Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α和VEGF表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系

*P<0.05

圖1 結(jié)直腸癌中Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α、VEGF和CD34的表達(dá)：A.Raptor在結(jié)直腸癌細(xì)胞胞質(zhì)中呈強(qiáng)陽(yáng)性；B.Rictor在結(jié)直腸癌細(xì)胞胞質(zhì)中呈強(qiáng)陽(yáng)性；C.HIF-1α在結(jié)直腸癌細(xì)胞胞核與胞質(zhì)中呈強(qiáng)陽(yáng)性；D.HIF-2α在結(jié)直腸癌細(xì)胞胞質(zhì)呈強(qiáng)陽(yáng)性；E.VEGF在結(jié)直腸癌細(xì)胞胞質(zhì)中呈強(qiáng)陽(yáng)性；F.結(jié)直腸癌組織內(nèi)CD34陽(yáng)性微血管，EnVision法

圖2 Western blot法檢測(cè)Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α和VEGF蛋白在結(jié)直腸癌和正常結(jié)直腸黏膜組織中的表達(dá)

圖3 RT-PCR檢測(cè)Raptor、Rictor、HIF-1α、HIF-2α、VEGF mRNA在結(jié)直腸癌和正常結(jié)直腸黏膜組織中的表達(dá)

2.4 結(jié)直腸癌組織中Raptor、Rictor與HIF-1α、HIF-2α和VEGF蛋白表達(dá)的相關(guān)性 Spearman相關(guān)性分析顯示：結(jié)直腸癌中Raptor與HIF-1α的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.557，P<0.05)，而與HIF-2α無(wú)明顯相關(guān)性(rs=0.085，P>0.05)。Rictor與HIF-2α的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.551，P<0.05)，而與HIF-1α無(wú)明顯相關(guān)性(rs=-0.177，P>0.05，表2)。Raptor、Rictor的表達(dá)與VEGF表達(dá)均具有明顯正相關(guān)性(rs=0.233，P<0.05；rs=0.248，P<0.05)。Raptor與Rictor兩者表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.402，P<0.05)。

3 討論

結(jié)直腸癌的發(fā)展過(guò)程可分為無(wú)血管和有血管兩個(gè)階段。無(wú)血管階段時(shí)，結(jié)直腸癌細(xì)胞主要依靠臨近血管系統(tǒng)的簡(jiǎn)單物理彌散，其生長(zhǎng)緩慢、凋亡率高，腫瘤體積一般不超過(guò)2～3 mm3。一旦進(jìn)入有血管階段，腫瘤體積快速增大并可發(fā)生轉(zhuǎn)移。由此可見(jiàn)，血管生成直接影響結(jié)直腸癌的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移。因而，腫瘤血管生成關(guān)鍵因子及其調(diào)控機(jī)制成為研究腫瘤靶向治療的熱點(diǎn)之一。研究表明，PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路與腫瘤血管生成密切相關(guān)。Miyazawa等[5]發(fā)現(xiàn)，PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路是調(diào)控血管生成的重要通路，有“血管生成調(diào)節(jié)中心”之稱(chēng)，活化的PI3K可磷酸化下游的AKT而促進(jìn)其激活，從而激活其下游調(diào)控血管生成的關(guān)鍵分子mTOR，并進(jìn)一步磷酸化p70S6K和4E-BP1，從而增加HIF的表達(dá)，繼而上調(diào)VEGF的表達(dá)，最終促進(jìn)血管生成。因此，以雷帕霉素、渥蔓青霉素為代表的mTOR阻斷劑的臨床應(yīng)用研究倍受關(guān)注，然而其療效不佳。

表2 結(jié)直腸癌中Raptor、Rictor與HIF-1α、HIF-2α、VEGF表達(dá)及MVD的相關(guān)性

*P<0.05

研究發(fā)現(xiàn)，mTOR為大分子復(fù)合物，其中mTORC1和mTORC2為主要發(fā)揮作用的兩個(gè)亞型，分別在調(diào)控蛋白質(zhì)合成、代謝以及細(xì)胞增殖、血管生成和自噬等過(guò)程中發(fā)揮作用[6-7]。mTORC1復(fù)合物由mTOR、mLST8、PRAS40和Raptor組成，在多種腫瘤中發(fā)揮促進(jìn)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、生長(zhǎng)的作用[8]。而mTORC2復(fù)合物由mTOR、mLST8和Rictor組成，可通過(guò)調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞骨架改變、血管內(nèi)皮遷移，促進(jìn)腫瘤血管形成[9]。新近研究證實(shí)，Raptor和Rictor分別是mTORC1和mTORC2的核心分子，對(duì)于保持其分子的完整性和功能必不可少，兩者的表達(dá)水平可以直觀反映mTORC1和mTORC2的生物學(xué)活性，并且其特異性和敏感性高于復(fù)合分子[10-11]。但兩者與結(jié)直腸癌以及腫瘤血管生成的相關(guān)性研究鮮見(jiàn)報(bào)道。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌中Raptor和Rictor的陽(yáng)性率分別為52.50%、63.33%，均明顯高于正常結(jié)直腸黏膜組織，并且與MVD呈正相關(guān)；兩者與結(jié)直腸癌臨床病理特征的相關(guān)性分析顯示，Raptor、Rictor過(guò)表達(dá)與結(jié)直腸癌的分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示Raptor、Rictor不僅與腫瘤血管形成密切相關(guān)，并且結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)。

HIF家族成員HIF-1α、HIF-2α是PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路下游重要的靶基因[5,12]，是調(diào)節(jié)細(xì)胞缺氧應(yīng)答反應(yīng)的重要因子，可有效激活其下游VEGF的表達(dá)，促進(jìn)血管生成進(jìn)而緩解局部組織缺氧。Sun等[13]的研究結(jié)果證實(shí)激活mTORC1可上調(diào)血管肉瘤細(xì)胞中HIF-1α的表達(dá)，從而增加其血管生成。Cejka等[14]研究結(jié)果證實(shí)，抑制胃癌細(xì)胞mTORC1的表達(dá)可以下調(diào)HIF-1α的水平，從而減少胃癌細(xì)胞血管生成。Ilhan等[15]研究結(jié)果證實(shí)，在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中通過(guò)mTORC2調(diào)控HIF-2α的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)其血管生成。然而，有關(guān)mTORC1、mTORC2的核心分子Raptor、Rictor與HIF-1α、HIF-2α在腫瘤中的相互關(guān)系研究較少。本實(shí)驗(yàn)同步檢測(cè)了Raptor、Rictor與HIF-1α、HIF-2α和VEGF以及MVD在結(jié)直腸癌中表達(dá)，并分析其相關(guān)性。結(jié)果顯示，Raptor、Rictor在結(jié)直腸癌中的表達(dá)均與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)，但Raptor僅與HIF-1α表達(dá)呈正相關(guān)，與HIF-2α表達(dá)無(wú)相關(guān)性；Rictor則與HIF-2α表達(dá)呈正相關(guān)，與HIF-1α表達(dá)無(wú)相關(guān)性，提示Raptor、Rictor通過(guò)不同途徑參與調(diào)控腫瘤血管生成。作者認(rèn)為，Raptor通過(guò)上調(diào)HIF-1α，進(jìn)而增加VEGF的表達(dá)，從而促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖；而Rictor則可上調(diào)HIF-2α的表達(dá)，參與細(xì)胞骨架的改建，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移，并同時(shí)上調(diào)VEGF，最終促進(jìn)血管生成。

大量研究結(jié)果表明[16]，腫瘤血管生成有多種方式，包括腫瘤性毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞芽生、血管生成擬態(tài)、脈管共同選擇等形式。結(jié)直腸癌中影響血管生成最主要的方式是腫瘤性毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞芽生，并受多種因子調(diào)控，其中VEGF是最有效的促血管生長(zhǎng)因子。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在結(jié)直腸癌中VEGF呈高表達(dá)，并且與Raptor和Rictor的表達(dá)以及腫瘤MVD呈正相關(guān)，而Raptor與Rictor兩者的表達(dá)則呈負(fù)相關(guān)。新近研究表明[17]，在PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路中Raptor與Rictor的功能和作用位點(diǎn)不同，兩者之間存在負(fù)反饋調(diào)節(jié)環(huán)路。Raptor負(fù)向調(diào)控Rictor的活性，當(dāng)Raptor被阻斷時(shí)，Rictor可被激活，并通過(guò)負(fù)反饋通路激活上游的AKT，繼而重新激活其下游的Raptor。因此，作者認(rèn)為，在腫瘤缺血、缺氧啟動(dòng)血管生成的過(guò)程中，Raptor與Rictor兩者相互協(xié)調(diào)、互為調(diào)控。Raptor高表達(dá)可促進(jìn)血管生成，而當(dāng)Raptor受到抑制時(shí)，則可激活Rictor，進(jìn)而上調(diào)HIF-2α的表達(dá)，促進(jìn)血管生成，緩解缺氧。同時(shí)Rictor通過(guò)負(fù)反饋通路可重新激活Raptor，繼而上調(diào)HIF-1α及VEGF的表達(dá)，重新促進(jìn)血管生成。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，在PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路中Raptor與Rictor同為mTOR的核心分子，兩者在腫瘤血管生成中互為調(diào)控，協(xié)同促進(jìn)結(jié)直腸癌的血管生成。針對(duì)Raptor與Rictor的不同功能，探索新的靶點(diǎn)阻斷劑和治療方案，可成為研發(fā)腫瘤血管生成阻斷劑的新思路。

綜上所述，Raptor、Rictor在結(jié)直腸癌中呈高表達(dá)，并且與HIF-1α、HIF-2α、VEGF密切相關(guān)，是調(diào)控結(jié)直腸癌血管生成的重要基因，同時(shí)與結(jié)直腸癌的分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征相關(guān)。因此，聯(lián)合檢測(cè)Raptor、Rictor在結(jié)直腸癌中的表達(dá)有助于評(píng)估病變進(jìn)展及合理選擇個(gè)性化治療方案，對(duì)于提高抗腫瘤血管藥物的臨床療效具有重要價(jià)值。

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Relationships of Raptor and Rictor expression with angiogenesis in colorectal cancer and their clinical significance

LI Xin-yan, WU Shu-hua, SUN Chen-bo, LI Yang-yang, GAO Xiang-qian, HE Shuang

(DepartmentofPathology,BinzhouMedicalUniversityHospital,Binzhou256603,China)

Purpose To detect the expression of Raptor, Rictor, angiogenesis-related factors HIF-1α, HIF-2α and VEGF and to investigate their relationship and significance in colorectal cancer (CRC). Methods Immunohistochemistry, Western blot and RT-PCR were employed to detect the expression of Raptor, Rictor, HIF-1α, HIF-2α and VEGF in 120 cases of CRC and 60 cases of normal colorectal mucosa. CD34 labeled microvascular density (MVD) was also observed. The correlations between Raptor, Rictor, HIF-1α, HIF-2α, VEGF expression and the patients’ clinicopathological features were analyzed. Results The positive rates of Raptor, Rictor, HIF-1α, HIF-2α and VEGF in CRC were significantly higher than those in normal colorectal mucosa (P<0.05). Raptor and Rictor expression was correlated with the degree of tumor differentiation and lymph node metastasis, respectively. The expression of HIF-1α, HIF-2α and VEGF was higher in patients with lymph node metastasis than those in patients without lymph node metastasis (P<0.05). The MVD was higher in patients with Raptor or Rictor positive than that in patients with Raptor or Rictor negative (P<0.05). The expression of Raptor was positively correlated with HIF-1α and VEGF (P<0.01), the expression of Rictor was positively correlated with HIF-2α and VEGF (P<0.01), but the expression of Raptor was negatively correlated with Rictor (P<0.01). Conclusion The expression of mTOR core molecules Raptor and Rictor is related to the initiation and development of colorectal cancer and angiogenesis, and they promote angiogenesis in colorectal cancer by different ways.

colorectal neoplasms; Raptor; Rictor; HIF-1α; HIF-2α; VEGF

時(shí)間：2017-2-27 10:14

http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170227.1014.008.html

山東省科技發(fā)展計(jì)劃(2010GSF10259)

濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，濱州 256603

李欣焱，女，碩士研究生。Tel: (0543)3258654，E-mail: lixinyan0528@126.com 吳淑華，女，教授，碩士生導(dǎo)師，通訊作者。E-mail：wsh6108@126.com

R 735.3

A

1001-7399(2017)02-0129-06

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.02.003

接受日期：2016-12-16