摘要：本文以虎杖苷、川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量和提取物得率為指標(biāo)，在對提取條件進行單因素考察的基礎(chǔ)上，采用正交試驗法優(yōu)化提取工藝，以確定愈骨散的最佳提取條件。試驗結(jié)果表明，料液比對提取影響最大，最佳提取條件為：提取溶劑為75%乙醇、料液比1∶10、提取時間2h，提取2次。在最優(yōu)條件下所得提取物得率為1625%，虎杖苷含量為7401mg，川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量為1472mg。該提取方法可為愈骨散的進一步研究和開發(fā)提供支撐。

關(guān)鍵詞：愈骨散；提取工藝；單因素；正交試驗

中圖分類號：R2842

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1008-0457（2017）03-0029-04國際DOI編碼：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2017.03.005

Abstract：This study is aimed to establish the optimal extraction procedure of YugusanThe contents of polydatin，Asperosaponin VI and extraction rates were used as comprehensive evaluation indexesBased on the results of the single factor experiment，the extraction conditions of Yugusan were further optimized by orthogonal designThe extracting ratio of solidliquid ratio had main effects on the comprehensive extraction procedureThe optimal procedure was obtained as follows：75% ethanol，solidliquid ratio 1∶10，extraction time 2h for 2 timesUnder the optimal conditions it could reach the content of polydatin and Asperosaponin VI 7400mg，14720mg separately and extraction rates were 1625%This extraction procedure could be used for the further research and development of Yugusan

Key words： Yugusan；extraction procedure； single factor experiment； orthogonal experimental design

愈骨散為我國民間用于治療骨折的傳統(tǒng)驗方，在民間有較長的應(yīng)用歷史，具有良好的療效。該驗方主要由虎杖（Polygonum cuspidatum Siebet Zucc）、川續(xù)斷（Dipsacus asperoides CYCheng et TMAi）、補骨脂（Psoralea corylifolia L）等8味中藥材組成，為外用藥，其中君藥為虎杖、川續(xù)斷等，在治療跌打損傷，續(xù)筋接骨方面具有一定的療效。

愈骨散傳統(tǒng)的使用方法是直接將藥材粉碎成粉末后加以適當(dāng)?shù)妮o料調(diào)敷于患處。該法存在著療效不穩(wěn)定、使用不便、對皮膚具有刺激性、且會弄臟衣服等缺點，嚴(yán)重影響了該驗方的推廣使用。本文擬在原有驗方基礎(chǔ)上，將其開發(fā)為安全有效、質(zhì)量可控、使用方便、刺激性小的現(xiàn)代制劑貼膏劑[1]。

將愈骨散驗方制備成貼膏劑前，需對其提取工藝進行研究[2]。以虎杖苷、川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量和提取物得率為指標(biāo)，考察提取溶劑、提取溶劑濃度、提取時間、提取料液比、提取方法等因素，并通過正交試驗確定最佳提取工藝[3]，旨在為后期制劑的開發(fā)利用打下基礎(chǔ)。

1材料與方法

11材料

111試藥無水乙醇（AR，成都金山化學(xué)試劑有限公司）；甲醇（AR，重慶川東化工集團有限公司）；乙腈（AR，重慶川東化工集團有限公司）；蒸餾水（自制）；虎杖、川續(xù)斷、補骨脂等中藥材均購置于貴州省中藥材公司。

112儀器高效液相色譜儀（Agilent1220）；冷凍干燥機（北京松源華興生物技術(shù)有限公司LGJ-10）；恒溫水浴鍋（金壇市大地自動化儀器廠）；SHZ-95B型循環(huán)水壓式多用真空泵（上海予正儀器設(shè)備有限公司）；SG8200 HPT超聲波清洗器（上海冠特超聲儀器有限公司）；萬分之一電子天平（上海良平儀器儀表有限公司）。

12方法

121藥材的前處理將虎杖、川續(xù)斷、補骨脂等8味中藥材按處方量比例稱取，混勻后粉碎成粗粉，備用。

122對照溶液的制備

1221虎杖苷對照溶液的制備取15mg經(jīng)五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24h的虎杖苷對照品，精密稱定，加稀乙醇溶解定容至50mL，即得。

1222川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照溶液的制備取15mg川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品，精密稱定，加甲醇溶解定容至50mL，即得。

123測量方法

1231參照《中華人民共和國藥典》2015版一部，虎杖苷采用HPLC法測定，以Agilent ZORBAX SB-C18 柱（46mm×150mm，5μm）為色譜柱，乙腈-水（23∶77）為流動相，檢測波長306nm，進樣量10μL。

1232參照《中華人民共和國藥典》2015版一部，川續(xù)斷皂苷Ⅵ采用HPLC法，以Agilent ZORBAX SB-C18 柱（46mm×150mm，5μm）為色譜柱，乙腈-水（30∶70）為流動相，檢測波長為212nm，進樣量10μL。

124提取物得率計算方法將提取液濃縮至無醇味后進行冷凍干燥，精密稱重，按式（1）計算提取物得率。

提取物得率=提取藥粉質(zhì)量（g）/原藥材質(zhì)量（g）×100%（1）

提取藥粉質(zhì)量：提取液濃縮至無醇味后進行冷凍干燥所得的干燥物質(zhì)量。

原藥材質(zhì)量：稱取的粗粉質(zhì)量。

125正交實驗綜合評分法以虎杖苷含量、川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量以及提取物得率為指標(biāo)，采用綜合評分法評價提取條件的優(yōu)劣。得分越高者條件越優(yōu)，評價方法見表1。

126單因素試驗分別取藥材20g，加入溶劑進行提取，將提取液過濾合并濾液定容至1000mL。取溶液1mL，用045μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液10μL照“123”項下方法。通過HPLC測定虎杖苷含量、川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量，照“124”項下方法計算提取物得率，得出最佳提取條件。

1261提取次數(shù)的研究用75%乙醇回流提取，料液比為1∶10，提取2h，分別提取1次（2h）、2次（2h+2h）、3次（2h+2h+2h）。

1262提取時間的研究用75%乙醇回流提取，料液比為1∶10，分別提取1h、2h、3h，各條件下均提取2次。

1263提取溶劑濃度的研究回流提取，料液比為1∶10，提取2次，每次提取2h，分別使用75%、50%、25%的乙醇作為提取溶劑。

1264料液比的研究 75%乙醇回流提取，提取2次，每次提取2h，分別對料液比為1∶20、1∶10、1∶5進行考察。

127正交試驗根據(jù)單因素試驗結(jié)果，將提取時間確定為2h，進一步選擇提取次數(shù)、料液比、提取溶劑乙醇濃度作為考察因素，進行正交試驗L9（34）（見表2）。照“123”項下方法，通過HPLC測量虎杖苷、川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量，照“124”項下方法計算提取物得率。采用綜合評分法對提取條件進行評分，以得分高者為優(yōu)。

2結(jié)果與分析

21提取次數(shù)考察結(jié)果

提取次數(shù)考察的結(jié)果見表3。由表3結(jié)果可知，虎杖苷含量隨著提取次數(shù)的增加而增加；川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量隨著提取次數(shù)的增加而增加；提取物得率隨著提取次數(shù)的增加而增加。

22提取時間考察結(jié)果

提取時間考察的結(jié)果見表4。由表4結(jié)果可知，以虎杖苷、川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量在2h、3h明顯優(yōu)于1h以兩個指標(biāo)的綜合情況來看，2h和3h相差不大，以節(jié)約時間及節(jié)約能源成本考慮，最終選擇2h。

23提取溶劑濃度考察結(jié)果

提取溶劑濃度考察結(jié)果見表5。由表5結(jié)果可知，通過虎杖苷含量、川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量以及提取物得率的比較發(fā)現(xiàn)提取溶劑濃度在75%時虎杖苷含量最高；提取溶劑濃度在25%、75%時川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量高；提取溶劑濃度在25%時提取物得率稍高。

24料液比考察結(jié)果

料液比考察結(jié)果見表6。由表6結(jié)果可知，通過虎杖苷含量隨料液比的增加而增加；川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量隨料液比的增加而增加；提取物得率隨料液比的增加而增加，且相差都不大。

25正交試驗結(jié)果

正交試驗結(jié)果見表7及表8。

由表7、表8結(jié)果可知，極差R反映各因素對指標(biāo)影響的程度，極差越大，影響程度越大。正交試驗結(jié)果顯示。提取次數(shù)、料液比、提取乙醇濃度這三個因素都對提取工藝有影響，其中對提取影響最大的是料液比，其次為提取次數(shù)，最后為提取乙醇的濃度，其中各因素水平分析結(jié)果為A∶2>3>1，B∶2>3>1，C∶3>2>11，以提取物得率及虎杖苷含量、川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量為考察指標(biāo)，按照A2B2C3工藝進行提取，其指標(biāo)均最高，故確定優(yōu)選的提取工藝為A2B2C3D，即藥材粗粉以10倍75%的乙醇提取2次，每次提取2h。最佳提取效果得到的提取物得率為1625%，虎杖苷含量為7400mg，川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量為14720mg，為正交試驗第五組試驗結(jié)果。

3結(jié)論與討論

根據(jù)《中華人民共和國藥典》2015版一部可知：虎杖具有散瘀止痛，治療跌打損傷的療效；續(xù)斷具有強筋骨，續(xù)折斷，治療筋傷骨折的療效[4]。在多種對骨折治療有效果的驗方中都具有虎杖、川續(xù)斷等藥材[5]。由于愈骨散在治療骨折上有良好的效果，且經(jīng)文獻(xiàn)研究表明虎杖苷具有消炎止痛功效[6]，川續(xù)斷皂苷Ⅵ具有治療骨折的功效[7]。

本文在后續(xù)研究中，需將愈骨散提取物進一步制備成方便臨床應(yīng)用的貼膏劑，另外復(fù)方制劑是由多味藥材協(xié)同發(fā)揮作用，所以提取物得率的高低也比較重要。為了更加全面地對提取工藝進行評價，綜合以上考慮，本文最終確定虎杖苷和川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量以及提取物得率作為提取工藝的3個評價指標(biāo)。采用了綜合評分法，該法是在多種指標(biāo)且需要綜合評價的試驗中常用的評價方法。結(jié)合以上考慮確定了最佳的提取條件，為后續(xù)制劑的制備提供技術(shù)支持。

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