摘要：通過(guò)盆栽試驗(yàn)，探討了孔雀草（Tagetes patula L）在不同濃度鎘（0、100、300、500mg/kg）脅迫及不同時(shí)間（50d、70d）可溶性蛋白、可溶性糖、脯氨酸含量的變化規(guī)律，并分析了三者之間的關(guān)系。結(jié)果表明：在第50d時(shí)，隨鎘脅迫濃度增加，可溶性蛋白含量逐漸升高，在500mg/kg鎘處理下，可溶性蛋白含量達(dá)到最大，為6736mg/g；可溶性糖含量呈先降低后升高再降低的趨勢(shì)，脯氨酸含量先降低后升高；隨時(shí)間延長(zhǎng)，在第70d時(shí)，可溶性蛋白含量呈先降低后升高再降低的趨勢(shì)，可溶性糖含量呈先升高后降低的趨勢(shì)，脯氨酸含量呈先降低后升高再降低的趨勢(shì)。鎘脅迫下脯氨酸和可溶性糖含量的升高為鎘耐性相關(guān)蛋白的合成提供物質(zhì)基礎(chǔ)，增強(qiáng)了孔雀草耐受重金屬的能力。

關(guān)鍵詞：孔雀草；可溶性蛋白；可溶性糖；脯氨酸

中圖分類號(hào)：Q9581；S4433（273）

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1008-0457（2017）03-0044-05國(guó)際DOI編碼：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2017.03.008

Abstract：The effects of different concentrations of cadmium（0，100，300，500mg/kg） on the soluble protein，soluble sugar and proline content in Tagetes patula and their relationship in different time（50 days and 70 days） were studied by pot experimentThe results showed that the soluble protein content increased with the increase of the concentration of cadmium stress on the 50th dayThe soluble protein content reached the maximum，67mg/g，treating by 500mg/kg CdThe soluble sugar content decreased first and then increased，following by a dropProline content decreased first and then increasedThe content of soluble protein decreased first and then decreased more at the 70th day，and the content of soluble sugar increased first and then decreasedThe content of soluble protein increased first and then decreasedProline content decreased first and then increased and then followed by a dropThe increase of proline and soluble sugar content under cadmium stress provides the material basis for the synthesis of cadmium tolerance related proteins，thus enhances the ability of malachite to tolerate heavy metals

Key words：Tagetes patula L；soluble protein；soluble sugar；proline

隨著工業(yè)的發(fā)展和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的現(xiàn)代化，世界各國(guó)土壤都存在不同程度的重金屬污染。土壤重金屬來(lái)源于采礦、電鍍、冶煉、化工、染色、電池制造等工廠排出的廢水[1]。當(dāng)土壤遭受重金屬污染后，不僅會(huì)破壞植物的產(chǎn)品和質(zhì)量，還會(huì)通過(guò)食物鏈危害人體健康，引發(fā)癌癥或其他疾病。目前，應(yīng)用于土壤重金屬污染的植物修復(fù)技術(shù)由于具有治理成本低、無(wú)二次污染、環(huán)境友好和可持續(xù)發(fā)展等優(yōu)點(diǎn)，成為國(guó)際研究的熱點(diǎn)。

孔雀草（Tagetes patula L）是菊科萬(wàn)壽菊屬一年生草本植物，適應(yīng)性強(qiáng)，生長(zhǎng)迅速，易于管理，是目前我國(guó)主栽花卉之一。研究表明，孔雀草具有鎘（cd）超富集特性，是鎘超富集植物[2，3]，當(dāng)幼苗在Cd濃度為300mg/L時(shí)，地上部Cd含量達(dá)到135mg/kg，超過(guò)Cd超富集植物的臨界值，轉(zhuǎn)移系數(shù)>1?？兹覆萁?jīng)鎘脅迫處理后，基因組DNA甲基化水平與濃度呈劑量效應(yīng)關(guān)系，隨Cd濃度升高，DNA甲基化模式也發(fā)生了變化，重新甲基化率隨Cd濃度升高而提高，去甲基化率則隨脅迫濃度的升高而呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，且以重新甲基化率的增加為主，最終導(dǎo)致總體甲基化率的升高[4]。任麗萍等[5]利用孔雀草修復(fù)治理鎘污染土壤有實(shí)質(zhì)進(jìn)展，通過(guò)反復(fù)種植孔雀草，可以連續(xù)提取污染土壤中過(guò)量的鎘，直到其鎘含量達(dá)到環(huán)境安全標(biāo)準(zhǔn)。因此，孔雀草對(duì)鎘污染地區(qū)的生態(tài)恢復(fù)有著重要意義。

植物體內(nèi)的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)具有調(diào)節(jié)、保護(hù)、清除活性氧等功能，有助于植物抵抗外界因素的脅迫，提高植物的抗逆性，其中，碳水化合物的積累和分解又與植物光合過(guò)程的變化息息相關(guān)[6]。重金屬脅迫可使可溶性蛋白含量增加，在植物體內(nèi)特異結(jié)合形成多肽，抵抗重金屬對(duì)植物的毒害，細(xì)胞內(nèi)可溶性糖能維持胞內(nèi)正常生理過(guò)程的進(jìn)行，抵抗水分的脅迫；脯氨酸有較強(qiáng)的水合能力，提高細(xì)胞持水力，從而降低重金屬毒害對(duì)植物細(xì)胞的影響。

本實(shí)驗(yàn)以孔雀草對(duì)鎘具有超富集能力的特點(diǎn)，采用土培方法，研究不同時(shí)間及不同濃度鎘脅迫對(duì)孔雀草可溶性蛋白、可溶性糖、脯氨酸含量的影響，以期為孔雀草耐鎘機(jī)理提供依據(jù)。

1材料與方法

11土培實(shí)驗(yàn)

孔雀草（Tagetes patula L）種子購(gòu)于貴陽(yáng)綠泉園藝有限公司，選取大小均一且飽滿的種子用75%乙醇消毒2～3min。蒸餾水沖洗數(shù)次，播種15粒種子于直徑15cm，高12cm的花盆中，每盆土重05kg。按照100mg/kg、300mg/kg、500mg/kg Cd2+濃度稱取氯化鎘（CdCl2·25H2O），分別溶于適量蒸餾水中并澆灌土壤，每個(gè)處理設(shè)置4個(gè)重復(fù)，以蒸餾水處理組作為對(duì)照組。脅迫50d、70d后，分別取各濃度地上部用于可溶性蛋白、可溶性糖、脯氨酸含量的測(cè)定。

12測(cè)定方法

121可溶性蛋白含量測(cè)定可溶性蛋白含量測(cè)定采用考馬斯亮藍(lán)G250染色法[7]。稱取不同處理的孔雀草地上部鮮樣01～05g，加入磷酸緩沖液2mL研磨成勻漿后，再加入8mL磷酸緩沖液沖洗研缽，室溫靜置1h，充分提取，4000r/min離心15min，吸取上清液10mL，加入50mL考馬斯亮藍(lán)，充分混合，放置2min后，待反應(yīng)完成，在595nm下比色，測(cè)定吸光度，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算可溶性蛋白質(zhì)含量。每個(gè)處理重復(fù)三次。

122可溶性糖含量測(cè)定可溶性糖含量測(cè)定采用苯酚-硫酸法[8]，稱取不同處理的孔雀草地上部鮮樣01～05g，放入試管中，加入10mL蒸餾水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液過(guò)濾至25mL容量瓶中，反復(fù)沖洗試管及殘?jiān)ㄈ葜量潭?。吸?5mL樣品液于試管中（重復(fù)2次），加蒸餾水15mL，依次向試管中加入1mL 9%苯酚溶液，5mL濃硫酸，充分振蕩，在室溫下放置30min，485nm波長(zhǎng)下比色，測(cè)定吸光度，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算可溶性糖含量。每個(gè)處理重復(fù)三次。

123脯氨酸含量測(cè)定脯氨酸含量測(cè)定采用磺基水楊酸法[9]。準(zhǔn)確稱取不同處理孔雀草地上部01～05g，分別置于試管中，然后向各管分別加入5mL 3%的磺基水楊酸溶液，在沸水浴中提取10min，（提取過(guò)程中要經(jīng)常搖動(dòng)），冷卻后過(guò)濾于干凈的試管中，濾液即為脯氨酸的提取液。吸取2 mL提取液于另一干凈的帶玻塞試管中，加入2mL冰醋酸及2mL酸性茚三酮試劑，在沸水浴中加熱30min，冷卻后加入4mL甲苯，振蕩以萃取紅色物質(zhì)，靜置待分層后吸取甲苯層在波長(zhǎng)520nm處比色，求得吸光度值，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算脯氨酸含量。每個(gè)處理重復(fù)三次。

13數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析方法

數(shù)據(jù)分析采用Excel 2010計(jì)算，用GraphPad Prism7進(jìn)行生物制圖。

2結(jié)果與分析

21不同濃度鎘脅迫對(duì)孔雀草地上部可溶性蛋白含量的影響

植物體內(nèi)的可溶性蛋白質(zhì)大多是參與各種代謝的酶類，在受到重金屬脅迫時(shí)，它們的含量會(huì)發(fā)生變化，測(cè)定其含量是了解植物抗逆性的重要指標(biāo)。經(jīng)不同時(shí)間及不同濃度鎘脅迫處理后，孔雀草地上部可溶性蛋白含量變化如圖1所示。在第50d時(shí)，三個(gè)濃度處理下的孔雀草可溶性蛋白含量逐漸上升，在500mg/kg鎘處理下，可溶性蛋白含量達(dá)到最大，為6736mg/g，說(shuō)明不同濃度鎘脅迫下，孔雀草體內(nèi)為適應(yīng)鎘脅迫而誘導(dǎo)相關(guān)蛋白合成，從而表現(xiàn)為可溶性蛋白含量逐漸升高；第70d時(shí)，隨鎘處理濃度的增加，可溶性蛋白含量呈下降趨勢(shì)，各濃度處理的孔雀草可溶性蛋白含量均低于對(duì)照組，在300mg/kg鎘處理下，可溶性蛋白含量有了明顯的上升，達(dá)到3264mg/g。在各鎘溶液處理下，孔雀草可溶性蛋白含量均隨時(shí)間延長(zhǎng)而降低，差異不顯著，在對(duì)照組，可溶性蛋白含量下降了1683mg/g，在100mg/kg鎘處理下，可溶性蛋白含量下降了3435mg/g，在300mg/kg鎘處理下，可溶性蛋白含量下降了5582mg/g，在500mg/kg鎘處理下，可溶性蛋白含量下降了5008mg/g，說(shuō)明鎘通過(guò)減緩孔雀草體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成對(duì)其造成傷害。

22不同濃度鎘脅迫對(duì)孔雀草地上部可溶性糖含量的影響

經(jīng)不同時(shí)間及不同濃度鎘處理后，孔雀草地上部可溶性糖含量變化如圖2所示。在第50d時(shí)，隨鎘處理濃度的增加，孔雀草可溶性糖含量呈先降低后升高再下降趨勢(shì)，在300mg/kg鎘處理下，孔雀草可溶性糖含量略高于對(duì)照組，說(shuō)明低濃度的鎘脅迫還不能刺激植物體發(fā)生防御反應(yīng)，導(dǎo)致含量降低，隨著鎘脅迫濃度加大，植物防御機(jī)制啟動(dòng)，可溶性糖作為滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)來(lái)保護(hù)細(xì)胞免受傷害，適應(yīng)外界條件變化，因而含量升高，高濃度的鎘脅迫對(duì)孔雀草的傷害較大，直接破壞了可溶性糖的分子結(jié)構(gòu)，抑制了可溶性糖的合成，所以含量降低。在第70 d時(shí)，隨鎘處理濃度的增加，孔雀草可溶性糖含量呈先升高后降低趨勢(shì)，在100、300mg/kg鎘處理下，孔雀草可溶性糖含量略高于對(duì)照組。在300、500mg/kg兩個(gè)鎘濃度處理下，可溶性糖含量均隨時(shí)間延長(zhǎng)而降低，差異不顯著，這與未加鎘處理的對(duì)照組表現(xiàn)出相同趨勢(shì)。

23不同濃度鎘脅迫對(duì)孔雀草地上部脯氨酸含量的影響

脯氨酸是多種質(zhì)膜和多種代謝酶的保護(hù)劑，并可在植物逆境恢復(fù)過(guò)程中提供碳骨架[9]。經(jīng)不同時(shí)間及不同濃度鎘處理后，孔雀草地上部脯氨酸含量變化如圖3所示。在第50d時(shí)，孔雀草在不經(jīng)鎘脅迫時(shí)脯氨酸含量最高為22657μg/g，在100、300、500mg/kg3個(gè)鎘濃度處理下，孔雀草脯氨酸含量總體呈上升趨勢(shì)，但均低于對(duì)照組，脯氨酸含量的上升可視為植物自身的防御反應(yīng)，為了應(yīng)對(duì)逆境脅迫而產(chǎn)生的保護(hù)機(jī)制。在70d時(shí)，隨鎘濃度增加，孔雀草脯氨酸含量呈先降低后升高再降低的趨勢(shì)，在300mg/kg鎘濃度處理下，孔雀草脯氨酸含量高于對(duì)照組為15553μg/g。在100、500mg/kg兩個(gè)鎘濃度處理下，孔雀草脯氨酸含量隨時(shí)間延長(zhǎng)而降低，與未加鎘處理的對(duì)照組相同。在300mg/kg鎘濃度處理下，孔雀草脯氨酸含量隨時(shí)間延長(zhǎng)略有上升，但差異不顯著。

3結(jié)論與討論

重金屬是一類會(huì)對(duì)植物產(chǎn)生毒害作用的污染物，植物在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中演變出耐受重金屬脅迫的相關(guān)機(jī)制，來(lái)緩解重金屬對(duì)植物的脅迫傷害[11]。為了應(yīng)對(duì)脅迫，植物產(chǎn)生的抗氧化劑及非酶抗氧化劑能清除自由基，抵抗活性氧對(duì)細(xì)胞的損傷，滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)使植物適應(yīng)外界環(huán)境變化，為各項(xiàng)生命活動(dòng)正常進(jìn)行提供相對(duì)穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境；螯合蛋白能與重金屬結(jié)合生成絡(luò)合物，轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)或液泡中達(dá)到解毒目的；轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白參與重金屬吸收、螯合、區(qū)室化和代謝利用等關(guān)鍵步驟，在植物抵抗重金屬?gòu)?fù)雜機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。

植物細(xì)胞內(nèi)會(huì)主動(dòng)積累一些可溶性物質(zhì)來(lái)降低胞內(nèi)滲透勢(shì)，如可溶性蛋白及可溶性糖，以保證重金屬脅迫條件下水分的正常供應(yīng)，脯氨酸通過(guò)清除自由基減輕由重金屬引起的氧化脅迫，進(jìn)而提高植物的耐受性[12-13]，維持細(xì)胞正常生理功能[14]。

在鎘脅迫下，有關(guān)植物體內(nèi)可溶性物質(zhì)變化已有較多報(bào)道，但其變化規(guī)律并不一致，有研究表明油菜的3個(gè)品種在不同濃度鎘脅迫下，可溶性蛋白含量均低于對(duì)照組[15]；張義賢等[16]研究重金屬對(duì)大麥（Hordeum vulgare）幼苗可溶性糖含量影響表明，大麥幼苗根內(nèi)可溶性糖隨重金屬濃度增加而降低。本研究表明，孔雀草在不同濃度鎘脅迫第50d時(shí)，可溶性蛋白含量呈升高趨勢(shì)，可溶性糖含量呈先降低后升高再降低趨勢(shì)，脯氨酸含量呈先降低后升高趨勢(shì)。Bartolf M等[17]認(rèn)為植物細(xì)胞中可溶性蛋白可與重金屬離子結(jié)合形成金屬結(jié)合蛋白，從而降低植物細(xì)胞中游離態(tài)重金屬離子的含量，以減輕重金屬離子對(duì)植物細(xì)胞的傷害，同時(shí)可溶性蛋白含量增加，可以提高功能蛋白數(shù)量，增加細(xì)胞滲透勢(shì)，提高植物整體的抗逆性；糖是參與調(diào)節(jié)滲透脅迫的小分子物質(zhì)，在植物對(duì)重金屬的適應(yīng)性調(diào)節(jié)中，是增加滲透性溶質(zhì)的重要組成部分。起初低濃度的鎘離子還不能引起植物體內(nèi)發(fā)生防御性反應(yīng)，而是直接破壞了可溶性糖分子結(jié)構(gòu)或抑制可溶性糖合成，所以可溶性糖含量下降，隨Cd脅迫濃度增加，植物的防御機(jī)制啟動(dòng)，可溶性糖作為滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)來(lái)保護(hù)細(xì)胞免受損傷，維持原有的生理過(guò)程，適應(yīng)外界環(huán)境變化；低濃度的鎘脅迫對(duì)脯氨酸具有抑制作用，隨著鎘脅迫濃度增加，脯氨酸含量均呈先降低后升高趨勢(shì)，這與張浩等[18]研究不同土壤重金屬脅迫對(duì)煙葉脯氨酸含量影響的結(jié)果一致，說(shuō)明脯氨酸在重金屬脅迫條件下有調(diào)節(jié)植物細(xì)胞滲透平衡、維持對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、清除活性氧的作用。

孔雀草在鎘脅迫下第70d時(shí)，可溶性蛋白含量呈先降低后升高再降低趨勢(shì)，可溶性糖含量呈先升高后降低趨勢(shì)，脯氨酸含量呈先降低后升高再降低趨勢(shì)，可溶性蛋白含量降低可能是蛋白質(zhì)與氧自由基反應(yīng)導(dǎo)致個(gè)別氨基酸的改變、多肽分裂及蛋白水解造成的，活性氧、氨基酸側(cè)鏈的氧化及脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)醛產(chǎn)物的二次反應(yīng)都會(huì)影響蛋白質(zhì)的功能特性[15]；隨時(shí)間延長(zhǎng)，Cd脅迫濃度增加，對(duì)細(xì)胞膜系統(tǒng)的破壞加劇，細(xì)胞失水嚴(yán)重，此時(shí)植物體主要通過(guò)可溶性糖等物質(zhì)提高細(xì)胞滲透壓，為各項(xiàng)生命活動(dòng)的進(jìn)行提供相對(duì)穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境[19]；脯氨酸含量在達(dá)到高峰值后降低可能與高濃度的鎘脅迫會(huì)損傷細(xì)胞內(nèi)多種功能膜及酶系統(tǒng)，造成脯氨酸合成代謝紊亂。

在100mg/kg鎘濃度處理下，三種滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)隨時(shí)間延長(zhǎng)而降低，其中可溶性糖含量降幅不大，說(shuō)明在低濃度鎘處理下，植物主要依賴可溶性蛋白及脯氨酸調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透勢(shì)，在300mg/kg鎘濃度處理下，只有脯氨酸含量略有升高，可溶性蛋白及可溶性糖含量下降，此時(shí)，植物細(xì)胞內(nèi)可溶性蛋白及可溶性糖分解，脯氨酸大量合成，減緩重金屬對(duì)植物的傷害，在500mg/kg鎘濃度處理下，三種滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量隨時(shí)間延長(zhǎng)均降低，此時(shí)，可溶性蛋白及可溶性糖合成緩慢，脯氨酸也降到最低，直接影響植物的生長(zhǎng)、發(fā)育過(guò)程。

有研究表明，逆境脅迫下可溶性蛋白分解加速，分解為游離脯氨酸等其他物質(zhì)，使脯氨酸含量升高。重金屬脅迫下，由于外界滲透勢(shì)較低，植物會(huì)發(fā)生失水現(xiàn)象，為了避免滲透?jìng)?，植物?xì)胞會(huì)主動(dòng)吸收和積累一些無(wú)機(jī)鹽和可溶性物質(zhì)如游離脯氨酸來(lái)降低胞內(nèi)滲透勢(shì)，避免因失水而導(dǎo)致的傷害。本研究中孔雀草在較高濃度的鎘脅迫下游離脯氨酸含量逐漸升高可能與此有關(guān)，具體原因仍須進(jìn)一步分析。

參考文獻(xiàn)：

[1]Wei J L，Lai H Y，Chen Z SChelator effects on bioconcentration and translocation of cadmium by hyperaccumulators，Tagetes patula and Impatiens walleriana[J]EcotoxicologyEnvironmental Safety，2012，84（10）：173-178

[2]陳杰幾種積累鎘花卉篩選及其修復(fù)污染土壤潛力研究[D]西安：西安科技大學(xué)，2011

[3]孫園園，李婭迪，江輝，等鎘脅迫對(duì)3種草本植物種子萌發(fā)及幼苗初期抗氧化酶活性的影響[J]廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，41（22）：35-38

[4]張凱凱，陳興銀，楊鵬，等不同濃度鎘脅迫對(duì)孔雀草DNA甲基化的影響[J]草業(yè)科學(xué)，2016，33（9）：1673-1680

[5]任麗萍，周啟星，孫約兵，等一種利用花卉植物孔雀草修復(fù)治理鎘污染土壤的方法：CN，CN2007 101590398[P]2009-6-24

[6]Moya J L，Ros R，Picazo IInfluence of cadmium and nickel on growth，net photosynthesis and carbohydrate distribution in rice plants[J]Photosynthesis Research，1993，36（2）：75-80

[7]鄒琦植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M]北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2000

[8]張惟杰糖復(fù)合物生化研究技術(shù)[M]杭州：浙江大學(xué)出版社，1999：1-540

[9]朱廣廉植物游離脯氨酸的測(cè)定[J]植物生理學(xué)通訊，1983（1）：35-37

[10]Ashraf M，F(xiàn)oolad M RRoles of glycine betaine and proline in improving plant abiotic stress resistance[J]Environmental Experimental Botany，2007，59（2）：206-216

[11]李洋，于麗杰，金曉霞植物重金屬脅迫耐受機(jī)制[J]中國(guó)生物工程雜志，2015，35（9）：94-104

[12]Tripathi B N，Gaur J PRelationship between copper- and zinc-induced oxidative stress and proline accumulation in，Scenedesmus，sp[J]Planta，2004，219（3）：397-404

[13]Tripathi B N，Gaur J PPhysiological behavior of Scenedesmus spduring exposure to elevated levels of Cu and Zn and after withdrawal of metal stress[J]Protoplasma，2006，229（1）：1-9

[14]Zhang J T，Xu M，Han K，et al.Effect of salt stress on plant nutrition and physiology of tamato seedings[J]Acta Agriculturae Bore-ali-occidentali Sinica，2011，20（2）：128-133

[15]Touiserkani T，Haddad RCadmium-induced stress and antioxidative responses in different Brassica napus cultivars[J]Journal of Agricultural ScienceTechnology，2012，14（4）：929-937

[16]張義賢，張麗萍重金屬對(duì)大麥幼苗膜脂過(guò)氧化及脯氨酸和可溶性糖含量的影響[J]農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2006，25（4）：857-860

[17]Michael Bartolf，Eileen Brennan，Carl APricePartial Characterization of a Cadmium -binding Protein from the Roots of Cadmium-treated Tomato[J]Plant Physiology，1980，66（3）：438-41

[18]張浩，陸寧，錢曉剛，等不同類型土壤重金屬脅迫對(duì)煙葉脯氨酸含量的影響[J]貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（1）：127-131

[19]丁曉輝，任麗萍，張春榮，等Cd2+脅迫對(duì)紫花苜蓿葉綠素和可溶性糖含量的影響[J]華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2007，22（s1）：64-66