劉海燕

（河南省周口市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 周口 466000）

·檢驗(yàn)檢測(cè)·

反相高效液相色譜法測(cè)定八珍顆粒中阿魏酸含量

劉海燕

（河南省周口市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 周口 466000）

目的建立測(cè)定八珍顆粒中阿魏酸含量的反相高效液相色譜（RP-HPLC）法。方法色譜柱采用AgilentHc-C18柱(250mm×4．6mm，5 m)，流動(dòng)相為0．085%磷酸溶液-乙腈(83∶17)，流速為1．0mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為316 nm，柱溫為35℃。結(jié)果阿魏酸進(jìn)樣量在0．069 7～0．836 4 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好(r＝0．999 85)，平均回收率為97．97%，RSD為1．39%(n＝6)。結(jié)論該方法可行、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可作為八珍顆粒中阿魏酸的質(zhì)量控制方法。

反相高效液相色譜法；八珍顆粒；阿魏酸；含量測(cè)定

八珍顆粒收載于2015年版《中國(guó)藥典(一部)》[1]464，由熟地黃、當(dāng)歸、黨參、炒白術(shù)、炒白芍、茯苓、川芎、炙甘草等中藥組方，具有補(bǔ)氣益血功效，用于治療氣血兩虛、面色萎黃、食欲不振、四肢乏力、月經(jīng)過多等癥[1-2]。其中當(dāng)歸為主藥，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛的功效[1]133，其主要成分有揮發(fā)油類、香豆素類、有機(jī)酸類、糖類、黃酮類、氨基酸、維生素和其他微量元素[3-5]，具有很高的藥用價(jià)值。有機(jī)酸類中主要成分阿魏酸為當(dāng)歸的指標(biāo)成分[6]。原標(biāo)準(zhǔn)中只對(duì)芍藥苷的含量作為控制指標(biāo)，為了更好地控制八珍顆粒的質(zhì)量，參考文獻(xiàn)[7-10]，采用高效液相色譜法測(cè)定產(chǎn)品中阿魏酸的含量，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法操作簡(jiǎn)便，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，陰性對(duì)照無干擾?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

LC-2010C型全自動(dòng)高效液相色譜儀(日本島津公司)；CPA-225D型電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器＜北京＞有限公司)；明澈T-D24UV電水系統(tǒng)(法國(guó)西格瑪公司)；KQ-500型超聲波震蕩器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司。

1．2 試藥

阿魏酸對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為0773-9910)；八珍顆粒樣品（四川禾潤(rùn)制藥有限公司，批號(hào)為151202，160210，規(guī)格為每袋3．5 g）。乙腈和甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水超純化水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：AgilentHc-C18柱(250mm×4．6mm，5μm)，柱溫：35℃；流動(dòng)相：0．085%磷酸溶液-乙腈(83∶17)；流速：1．0m L／min；進(jìn)樣量：10μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：316 nm。

2．2 溶液制備

對(duì)照品溶液：精密稱取阿魏酸對(duì)照品6．97 mg，置50 m L棕色容量瓶，加70%甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液；精密量取5m L，置10 mL容量瓶，加70%甲醇至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液：取裝量差異項(xiàng)下的本品內(nèi)容物，研細(xì)，取1．049 5g，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20m L，密塞，稱定質(zhì)量，加熱回流30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，靜置，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

陰性對(duì)照品溶液：按處方比例及制備工藝制備不含當(dāng)歸的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取上述3種溶液各10μL，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。對(duì)照品溶液色譜圖中阿魏酸峰的理論板數(shù)為9 161，供試品溶液色譜圖中，阿魏酸與鄰分峰達(dá)到基線分離，峰形對(duì)稱，分離效果良好，且陰性對(duì)照品溶液在對(duì)照品溶液相應(yīng)位置處無干擾，見圖1。

線性關(guān)系考察：精密量取阿魏酸對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為0．069 7 g／L）1，2，3，5，8，10，12μL，進(jìn)樣，測(cè)定其峰面積，其對(duì)應(yīng)的峰面積依次為341 822，692 317，1 043 048，1 728 576，2 800 213，3 497 125，4 199 254。以峰面積積分值（Y）對(duì)進(jìn)樣量（X）進(jìn)行回歸分析，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程 Y＝5．03×106X-8 775，r＝0．999 85（n＝7）。結(jié)果表明，阿魏酸進(jìn)樣量在0．069 7～0．836 4μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積分別為3 497 125，3 515 576，3 468 241，3 475 489，3 507 162，3 510 213。結(jié)果的 RSD為0．56%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，2，5，7，10，12 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定峰面積。結(jié)果測(cè)得峰面積分別為674 032，669 425，674 971，659 269，667 543，661 931，其RSD為0．95%（n＝6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批（批號(hào)為151202）樣品6份，依法制備供試品溶液，并按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果阿魏酸平均含量為0．253mg／g，RSD為1．28%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取已知含量的樣品（批號(hào)為151202，質(zhì)量濃度為0．013 28 g／L）6份，每份2 mL，置10 m L容量瓶中，分別加入對(duì)照品溶液（質(zhì)量濃度為0．069 7 g／L）1．0，1．0，2．0，2．0，3．0，3．0m L，再加70%甲醇至刻度，搖勻，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 阿魏酸加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)

2．4 樣品含量測(cè)定

取2批(批號(hào)分別為151202，160210)樣品，各2份，依法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液各10μL，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算阿魏酸的含量。結(jié)果，批號(hào)為151202，160210樣品中阿魏酸的含量分別為 0．253，0．256 mg／g和 0．261，0．259mg／g（n＝2)。

3 討論

3．1 測(cè)定波長(zhǎng)選擇[1]464

取對(duì)照品溶液和供試品溶液，用紫外分光光度計(jì)于200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果兩者均于316 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰，與光譜圖一致，故選擇316 nm作為阿魏酸含量測(cè)定的波長(zhǎng)。

3．2 流動(dòng)相選擇

分別選擇乙腈-0．085%磷酸溶液、甲醇-0．5%冰乙酸、甲醇-水作為流動(dòng)相，經(jīng)過多次有機(jī)相和無機(jī)相配比調(diào)整，最后確定色譜條件為0．085%磷酸溶液-乙腈(83∶17)，在理論板數(shù)、分離度、峰形及出峰時(shí)間等方面均達(dá)到滿意的結(jié)果。

3．3 提取溶劑篩選[9-13]

分別以溫水、70%甲醇作為溶劑超聲提取和密塞加熱回流30min處理樣品，由于阿魏酸結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，采用水作為提取溶劑，導(dǎo)致其色譜峰拖尾、開叉或裂分，影響測(cè)定結(jié)果，色譜峰的理論板數(shù)大多低于4 000。而70%甲醇能完全溶解樣品，且無拖尾現(xiàn)象，峰形對(duì)稱，理論板數(shù)均大于5 000，故本方法采用70%甲醇為提取溶劑。

3．4 提取時(shí)間篩選[14-15]

曾考察加熱回流20，30，40 min，含量測(cè)定結(jié)果表明，提取30，40 min的樣品阿魏酸含量無明顯差異，故確定提取時(shí)間為30min。

綜上所述，采用高效液相色譜法以當(dāng)歸中阿魏酸作為指標(biāo)性成分，對(duì)八珍顆粒中的當(dāng)歸成分進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，簡(jiǎn)單易行，保留時(shí)間穩(wěn)定，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可控制該藥品的內(nèi)在質(zhì)量。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015．

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Content Determ ination of Eru lic Acid in Bazhen G ranu les by RP-HPLC

Liu Haiyan
(Zhoukou institute for food and drug control,Zhoukou,Henan,China 466000)

Ob jective To establish an HPLC method for determining the content of ferulic acid in Bazhen Granules．M ethods Agilent Hc-C18column(250 mm×4．6 mm,5μm)chromatography column was used;the mobile phase was 0．085% phosphoric acid solutionacetonitrile(83∶17),flow rate 1．0 mL／min,detection wavelength 316 nm,column temperature 35℃．Resu lts The linear range of ferulic acid was in 0．069 7-0．836 4μg(r＝0．999 85),the average recovery rate was 97．97%,RSD was 1．39%(n＝6)．Conclusion The method is reliable,accurate and reproducible,and can be used for the quality control of ferulic acid in Bazhen Granules．

RP-HPLC;Bazhen Granules;ferulic acid;content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2017)03-0027-03

2016-11-07)

10．3969／j．issn．1006-4931．2017．03．009

劉海燕，女，大學(xué)本科，副主任藥師，主要從事中藥、抗生素和微生物檢驗(yàn)工作，（電子信箱）13939418667＠163．com。