趙銳，戴雯，徐萬州，梅四清，崔艷，姜樹朋，李艷

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)中心，湖北 武漢 430060)

膠乳免疫比濁法測定血清鐵蛋白的方法學(xué)評價

趙銳，戴雯，徐萬州，梅四清，崔艷，姜樹朋，李艷

(武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗醫(yī)學(xué)中心，湖北 武漢 430060)

目的對膠乳免疫比濁法定量測定血清鐵蛋白(FER)進行方法學(xué)評價。方法參照美國臨床實驗室標準化協(xié)會(CLSI)推薦的評價方法，對膠乳免疫比濁法測定血清FER的精密度、回收實驗、線性范圍等進行評價。結(jié)果膠乳免疫比濁法測定血清FER的批內(nèi)、日間變異系數(shù)(CV)均＜5.0%，精密度良好；FER濃度在25～500 ng/mL范圍內(nèi)，檢測線性良好；比對實驗：兩種廠家的試劑盒測定FER結(jié)果相關(guān)性良好(r2=0.990 7，n=40)，檢測結(jié)果基本一致(P＞0.05)；回收率為96.20%～102.43%；40例健康體檢者樣本的檢測值均在待驗證區(qū)間之內(nèi)。結(jié)論膠乳免疫比濁法用于定量檢測人血清FER水平，測定結(jié)果準確可靠，操作簡便、快速，能直接在全自動生化分析儀上使用，適用于臨床樣本檢測。

膠乳免疫比濁；鐵蛋白；方法學(xué)評價

鐵蛋白(ferritin，F(xiàn)ER)是一種分子量較大的含鐵的蛋白，具有強大的鐵結(jié)合和儲備能力，是體內(nèi)鐵的主要儲存形式，正常人血清含量較少，在某些疾病狀態(tài)下如炎癥、肝臟疾病、惡性腫瘤時，血清FER可以顯著升高[1-2]。FER的檢測在對疾病的診斷和治療中都起到重要作用。FER作為腫瘤標志物之一，已被廣泛用于腫瘤的篩查和診斷，有研究表明肝癌、肺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌FER顯著增高[3]，因此FER可作為腫瘤的輔助診斷指標。本文對膠乳免疫比濁法FER檢測系統(tǒng)分析性能進行方法學(xué)評估驗證，判斷其是否能滿足臨床檢測要求。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 膠乳免疫比濁法檢測FER試劑盒、校準物、質(zhì)控物均為北京九強生物技術(shù)股份有限公司提供，儀器為OLYMPUS5400型全自動生化分析儀。參比系統(tǒng)為西門子ADVIA Centaur XP分析系統(tǒng)及配套FER試劑盒。

1.2 膠乳免疫比濁檢測FER分析性能評估

1.2.1 精密度評價 參照CLSI EP5-A2文件，選取兩個不同濃度的實驗樣本(低值90.0 ng/mL，高值360.0 ng/mL)。將兩個樣本2 h內(nèi)分別連續(xù)檢測20次；將同一樣本分成雙份檢測，連續(xù)檢測20 d。分別計算均值(x-)、標準差(s)、變異系數(shù)(CV)。

1.2.2 對比實驗 參照CLSI EP9-A2文件，西門子ADVIACentaur XP FER檢測系統(tǒng)為參比方法，實驗方法為北京九強公司生產(chǎn)的膠乳免疫比濁法FER檢測試劑盒，兩個檢測系統(tǒng)嚴格按照說明書進行操作，同時檢測患者血清樣本40份，F(xiàn)ER濃度范圍40.0～800.0 ng/mL，統(tǒng)計分析計算出比對方程和相關(guān)系數(shù)。

1.2.3 回收實驗 參照CLSI EP15-A文件，選取新鮮的患者血清混合后作為基礎(chǔ)樣本，重復(fù)檢測5次，計算均值作為樣本基礎(chǔ)值，向1.5 mL的基礎(chǔ)標本中分別加入0、100 μL、200 μL、300 μL、400 μL、500 μL FER高值標準品(500 ng/mL)，然后再分別加入500 mL、400 mL、300 mL、200 mL、100 mL、0生理鹽水并混勻，總體積均為2.0 mL。每份樣本重復(fù)檢測3次計算均值。用測定值減去基線值確定回收量并計算回收率，回收率(%)=回收量/加入量×100。

1.2.4 線性實驗 參考CLSI EP6-A文件，用生理鹽水作為空白樣本和FER高值標準品(500 ng/mL)來評估線性實驗，將生理鹽水與FER高值標準品按1：9、1：4、2：3、3：2、4：5的比例混合，將每個樣本重復(fù)檢測3次，將計算平均值作為實測濃度(Y)，理論濃度(X)與實測濃度(Y)采用線性回歸進行線性評價，并計算出回歸方程及相關(guān)系數(shù)。

1.2.5 參考區(qū)間驗證 參照NCCLSC28-A2文件，選擇本院體檢中心的健康體檢者血清樣本40份(男女各20名，年齡15～65歲)作為參考人群，將測定結(jié)果進行統(tǒng)計并對試劑說明書提供的參考區(qū)間進行驗證，參考人群的FER檢測值應(yīng)均在廠家申明的參考區(qū)間內(nèi)，則驗證通過。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 利用SPSS19.0統(tǒng)計軟件和Microsoft Excel 2013軟件進行數(shù)據(jù)分析，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FER精密度實驗結(jié)果 膠乳免疫比濁法測定FER低值、高值批內(nèi)CV分別為2.16%、2.07%，日間CV分別為3.71%、3.66%，均符合試劑廠家表明的不精密度要求，見表1。

表1 FER批內(nèi)與日間精密度

2.2 比對試驗結(jié)果 膠乳免疫比濁法測定FER結(jié)果與ADVIA Centaur XP檢測結(jié)果相關(guān)性良好。線性回歸方程Y=0.9645x+4.3463，線性回歸系數(shù)r2= 0.990 7，n=40。兩個檢測系統(tǒng)測定結(jié)果均值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見圖1。

圖1 兩種檢測結(jié)果相關(guān)性分析

2.3 回收試驗結(jié)果 基礎(chǔ)樣本的新鮮混合血清FER檢測均值為103 ng/mL，F(xiàn)ER校準品濃度為500 ng/mL，回收率為99.20%～102.43%，平均回收率為99.62%，符合實驗要求，見表2。

表2 回收實驗結(jié)果

2.4 線性試驗結(jié)果 將FER理論值作為橫坐標(X)，實測值為縱坐標(Y)進行線性回歸分析。結(jié)果顯示膠乳免疫比濁法檢測血清FER在25～500 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，回歸方程Y=1.062 6X-4.633 6，r2= 0.999 1，符合廠家要求，見圖2。

2.5 參考區(qū)間驗證 檢測選擇40份健康體檢者血清FER濃度，經(jīng)驗證FER濃度均在試劑說明書提供的參考區(qū)間范圍內(nèi)，均未超出所驗證的參考區(qū)間，參考區(qū)間通過驗證。

圖2 FER線性測定

3 討 論

FER是機體儲存鐵的主要方式，同時防止游離鐵對人體正常細胞的損害，在體內(nèi)主要以細胞內(nèi)FER和血清FER兩種形式存在。FER的相對分子量約為450 kD，由24個亞基組成，F(xiàn)ER亞基分為L和H型兩種，其中L型亞基與貯存鐵有關(guān)，H亞基中和游離鐵和抗炎相關(guān)。正常情況下FER主要來自單核巨噬細胞系統(tǒng)、肝臟及T細胞，參與機體的生物解毒、儲存鐵離子、抗氧化、機體損傷、感染、炎癥、修復(fù)等方面功能[4]。

血清FER升高影響機體的抗氧化能力，加速細胞生長，提高機體對氧化應(yīng)激的抵抗[5]。同時，鐵蛋具有調(diào)節(jié)機體的免疫功能，當FER與T細胞和B細胞結(jié)合后，可以抑制其細胞增殖，從而抑制機體細胞免疫功能。有研究表明，F(xiàn)ER可以降低活化高分子量激肽原(HKa)的表達和功能，從而導(dǎo)致腫瘤組織內(nèi)血管的生成增多，促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移[6]。

血清FER已經(jīng)成為臨床常用的腫瘤標志物之一，多種惡性腫瘤血清FER的水平增高[7-8]。有研究顯示，血清FER與性別、吸煙、腫瘤分期、腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)[7,9]。同時，血清FER與腫瘤預(yù)后相關(guān)，高水平的血清FER的患者腫瘤更容易復(fù)發(fā)或遠處轉(zhuǎn)移，并且預(yù)后較差[10]。腫瘤患者血清FER升高可能與下列因素有關(guān)[7]：(1)腫瘤細胞的惡性增殖導(dǎo)致周圍組織的壞死，細胞內(nèi)鐵的大量釋放入血；(2)惡性腫瘤增殖，F(xiàn)ER合成增加；(3)腫瘤細胞降低肝細胞對血清FER的降解和清除能力，使血清FER水平相對增加；(4)腫瘤引起的炎性介子分泌增加，進而刺激FER的生成增加。

目前臨床實驗室所用FER的檢測方法主要是化學(xué)發(fā)光法，化學(xué)發(fā)光方法檢測FER的靈敏度高，但是其檢測線性范圍較小，一般都是封閉的檢測系統(tǒng)，需要特定配套的儀器和試劑盒，檢測成本高，難以在臨床上大范圍普及使用。本文主要是對北京九強公司生產(chǎn)的膠乳免疫比濁法FER檢測試劑盒進行性能評價及比對研究，該方法簡單、快速、靈敏、可靠，對儀器設(shè)備要求不高，可在全自動生化分析儀上應(yīng)用。方法學(xué)性能評價結(jié)果顯示，批內(nèi)和日間CV均小于5%，說明此試劑盒重復(fù)性較好，符合廠家對不精密度的要求。比對實驗顯示兩者相關(guān)性良好(r2=0.990 7)，免疫比濁法檢測血清FER的精密度和準確度滿足臨床實驗室需求。常規(guī)方法應(yīng)具有檢測快速、費用低廉、檢測結(jié)果準確，在臨床使用過程中簡便易行、自動化程度高。本文所述試劑盒檢測FER能夠較好的滿足臨床檢測要求，適于在臨床診斷過程中廣泛使用。

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Methodological evaluation of latex immunoturbidimetric assay for the detection of serum ferritin

ZHAO Rui,DAI Wen,XU Wan-zhou,MEI Si-qing,CUI Yan,JIANG Shu-peng,LI Yan.Department of Clinical Laboratory,Renmin Hospital of Wuhan University,Wuhan 430060,Hubei,CHINA

ObjectiveTo evaluate the determination of serum ferritin(FER)by latex immunoturbidimetric assay(LIA).MethodsThe precision,recovery experiment and linear range of serum FER determined by LIA were assessed through the evaluation method recommended by American Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI).ResultsThe intra-group and inter-day coefficient of variation(CV)of serum FER determined by LIA were less than 5.0%,and the precision was good.FER concentration was in the range of 25～500 ng/mL,and the detection linear was good.Comparative experiments showed that the relationship of FER results determined by two manufacturers'kits were good(r2=0.990 7,n=40),and the results remained in accordance(P＞0.05).The recoveries were 96.20%-102.43%.The detection values of 40 healthy physical examination volunteers were in the range of validation interval.ConclusionLIA is a convenient,rapid,cheap,accurate and reliable method for quantitating human serum FER,which can be used directly on the automatic biochemical analyzer and be suitable for clinical routine analysis.

Latex immunoturbidimetric assay(LIA);Ferritin(FER);Methodological evaluation

R446.11

A

1003—6350（2017）05—0763—03

2016-09-11)

國家863計劃課題（編號：2014AA022304）

李艷。E-mail：yanlitf1120@163.com

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.05.026