高海鷹，王海玲，關(guān)悅

（吉林省藥物研究院，吉林 長春 130061）

頂空氣相色譜法測定羅氟司特中5種殘留溶劑

高海鷹，王海玲，關(guān)悅

（吉林省藥物研究院，吉林 長春 130061）

目的：建立羅氟司特原料藥中四氫呋喃、乙酸乙酯、異丙醇、甲苯和N,N二甲基甲酰胺殘留溶劑的頂空氣相色譜測定方法。方法：以二甲基亞砜（DMSO）為溶劑，DB-WAX123-7032石英毛細管柱為色譜分離柱，F(xiàn)ID檢測器，程序升溫，氮氣為載氣。結(jié)果：四氫呋喃、乙酸乙酯、異丙醇、甲苯和N,N二甲基甲酰胺（DMF）均能得到良好分離。5種殘留溶劑均有良好的線性關(guān)系，線性系數(shù)均＞0.999；平均回收率分別為98.79%，100.99%，106.04%，100.85%，105.39%；檢出限分別為0.011 0，0.006 9，0.006 7，0.001 6，0.076 0 μg/mL。結(jié)論：該方法的檢測靈敏度高，線性關(guān)系良好，可用于羅氟司特原料藥殘留有機溶劑的檢測。

羅氟司特；頂空氣相色譜法；殘留溶劑

羅氟司特是十余年來全球首個獲準用于慢性阻塞性肺疾病的新型選擇性磷酸二酯酶（PDE）-4抑制劑，在哮喘和重癥慢性阻塞性肺疾病的臨床治療上獲得了較好的療效[1-2]。為了對原料藥進行質(zhì)量控制，本文根據(jù)新藥申報資料的基本要求，針對吉林省藥物研究院制備羅氟司特原料藥在生產(chǎn)工藝中使用的四氫呋喃、乙酸乙酯、異丙醇、甲苯和DMF，進行質(zhì)量控制。

由于異丙醇與乙酸乙酯的沸點均在80℃左右，非常接近，采用程序升溫可達到有效分離，在220℃時保持維持2分鐘，氣化室溫度為200℃，確保溶媒全部被吹出，不影響下一次樣品的測定。根據(jù)羅氟司特水不溶性質(zhì)以及結(jié)合頂空進樣的樣品溶劑選擇原則，確定以DMSO作為樣品溶劑，建立了羅氟司特原料藥中上述5種溶劑殘留量的測定方法，并對該方法進行了方法學(xué)驗證。結(jié)果顯示，該氣相色譜方法專屬性好、靈敏度高，可訂入質(zhì)量標(biāo)準用于羅氟司特原料藥有機殘留溶劑的質(zhì)量控制[3]。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 7820A氣相色譜儀（美國Agilent公司）、Agilent 7694E頂空自動進樣裝置、安捷倫色譜工作站；KQ-50E型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；New Classic MS105DU型全自動電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。四氫呋喃（分析純，山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司）、乙酸乙酯（分析純，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）、異丙醇（分析純，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司）、甲苯（分析純，北京化工廠）和DMF（分析純，山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司）、DMSO（分析純，山東禹王實業(yè)有限公司化工分公司）均為分析純。羅氟司特原料藥樣品由吉林省藥物研究院制備。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件色譜柱為DB-WAX123-7032石英毛細管柱（0.25 μm×0.32 mm×30 m），柱溫采用程序升溫：起始溫度35℃，保持0 min，以4℃/min的速率升到60℃，保持0 min，以20℃/min的速率升至120℃，保持2 min，以40℃升溫速率升至220℃，保持2 min。檢測器溫度：150℃，氣化室溫度200℃，載氣N2，壓力10 psi，分流比5∶1，進樣體積1 mL[4-8]。頂空參數(shù)：瓶平衡溫度140℃、平衡時間30 min、LOOP溫度160℃、TRLINE溫度180℃。

1.2.2 溶液配制對照品溶液的制備：儲備溶液：分別取甲苯89 mg，DMF 88 mg，四氫呋喃72 mg，乙酸乙酯500 mg，異丙醇500 mg，精密稱定于100 mL量瓶中，用DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻。標(biāo)準溶液：精密量取儲備液10 mL，置100 mL量瓶中，用DMSO稀釋至刻度搖勻。精密量取5 mL，置20 mL頂空瓶中，壓蓋密封。

供試品溶液的制備：取本品0.5 g，精密稱定，置20 mL頂空瓶中，精密加入DMSO 5 mL，加蓋密封，振搖使溶解。

2 結(jié)果與討論

2. 1 分析方法的建立

2.1.1 色譜柱的篩選根據(jù)5種待測有機溶劑的特性合理選擇了具有改善低沸點分析物的分離度的特點極性較強的DB-WAX聚乙二醇（PEG）氣相毛細管柱，適當(dāng)調(diào)節(jié)初始化溫度、流速及分流比等因素，使四氫呋喃與乙酸乙酯得到有效的分離。

2.2 分析方法的驗證

2.2.1 系統(tǒng)適用性試驗分別考察樣品溶劑四氫呋喃、乙酸乙酯、異丙醇、甲苯和DMF相互間準確定量的干擾情況（見圖1）?？瞻兹芤簩y定DMF有干擾，在測定DMF含量給予扣除（空白溶液對測定DMF干擾峰面積為A＝28 280，在后續(xù)測定DMF方法學(xué)驗證等各項實驗中均需予以扣除），其余4種殘留溶劑的色譜峰在各自出峰時間處不產(chǎn)生相互干擾，同時各組分也不含有干擾其他組分測定的雜質(zhì)峰，說明本方法合理可行。系統(tǒng)適用性在《中華人民共和國藥典》（2015年版）中有明確的要求，色譜峰理論塔板數(shù)不低于5 000，與其相鄰色譜峰的分離度應(yīng)＞1.5。實驗中以混合對照品溶液為測試液，在上述已建立的色譜條件下進樣，記錄各組分的保留時間（2.277 min，2.417 min，2.754 min，3.940 min，8.377 min）、分離度（1.50，3.48，5.70，6.25，11.90）、理論塔板數(shù)（9 257，10 762，12 011，36 427，374 484）。結(jié)果表明該分析方法能夠滿足藥典對系統(tǒng)適用性的要求。

圖1 系統(tǒng)適用性氣相色譜圖

2.2.2 檢出限和定量限及線性范圍對于工藝用到的潛在的殘留溶劑，檢出線（LOD）及定量限（LOQ）是根據(jù)信噪比法來確定的，以信噪比（S/N）為3時相應(yīng)的濃度為檢出限，S/N為10時為定量限。連續(xù)進樣對照溶液6針，測定其信平均S/N。結(jié)果顯示，四氫呋喃、乙酸乙酯、異丙醇、甲苯和DMF的檢出限分別小于《中華人民共和國藥典》（2015年版）規(guī)定的濃度限度。表明采用外標(biāo)曲線法可實現(xiàn)對藥物中溶劑殘留量的準確定量。見表1。

表1 溶劑的檢出限、定量下限、線性方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)

2.2.3 精密度試驗將標(biāo)準溶液連續(xù)6次平行頂空進樣，記錄各組分的峰面積，計算其相對標(biāo)準偏差（RSD）。得到5種溶劑的峰面積的RSD分別為1.83%，1.92%， 1.92%，2.21%，1.94%，3.12%，均小于藥物質(zhì)量控制方法研究中關(guān)于精密度試驗峰面積RSD（n＝6）不＞5.0%的規(guī)定，表明本方法精密度良好。見表2。

表2 精密度試驗結(jié)果

2.2.4 回收率試驗精密稱取羅氟司特原料樣品0.5 g，分別置頂空進樣瓶中，分別精密加入標(biāo)準品溶液5 mL，密封，使溶解，依法測定。平均回收率為四氫呋喃98.79%；乙酸乙酯100.99%；異丙醇106.04%；甲苯100.85%；DMF 105.39%。滿足準確度實驗平均回收率在90%～110%，RSD（n＝6）＜5.0%的規(guī)定，表明本方法準確度良好。見表3。

2.2.5 樣品測定取本品3批依上述方法檢查，結(jié)果3批樣品的乙酸乙酯量分別為：0.067%，0.071%，0.081%，其余4種溶劑均未檢出，《中華人民共和國藥典》（2015年版）限度要求乙酸乙酯不得高于0.5%，因此符合規(guī)定。見表4。

3 結(jié)論

根據(jù)《中華人民共和國藥典》（2015年版）四部規(guī)定，四氫呋喃限度為0.072%，甲苯限度為0.089%，異丙醇、乙酸乙酯屬于第三類溶劑，限度為0.5%，DMF限度為0.088%，均需要進行殘留量的研究和控制，因此本文建立了測定羅氟司特原料藥中5種殘留溶劑的頂空氣相色譜方法。通過實驗條件優(yōu)化 ，本文最終確立了以DB-WAX123-7032石英毛細管柱為分析柱、瓶平衡溫度140℃、平衡時間30 min、LOOP溫度160℃、TRLINE溫度180℃的分析方法。對3批樣品的測定結(jié)果表明，5種溶劑的殘留量均小于限度要求，符合要求。經(jīng)過方法學(xué)驗證，該方法的專屬性、檢出限、線性相關(guān)性、精密度、準確度等各項指標(biāo)均可滿足藥物質(zhì)量控制的方法學(xué)要求，所建立的分析方法能夠?qū)α_氟司特原料藥中的殘留溶劑達到有效監(jiān)控，可以作為企業(yè)產(chǎn)品研發(fā)與生產(chǎn)的質(zhì)控方法。

表3 回收率試驗結(jié)果

表4 3批原料藥殘留溶劑的測定結(jié)果

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[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2015年版)四部[M].中國醫(yī)藥科技出版社,2015.

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本文編輯：張鈺

Determination of Five Residual Solvents in Rof umilast by Headspace Gas Chromatography

Gao Hai-ying, Wang Hai-ling, Guan Yue
(Jilin Institute of Pharmaceutical Research, Jilin Changchun 130061, China)

Objective：To establish a headspace gas chromatography method for determinition of tetrahydrofuran, ethyl acetate, isopropanol, toluen and N,N-dimthyl formamide contents in roflumilast material.Methods：The determination was carried on a DB-WAX123-7032 capillary column with sequential increase of temperature programming. The solvent media was dimethyl sulfoxide (DMSO), with a FID detector, while the carrier gas was nitrogen.Results：All the f ve solvents were separated effectively, of which the linear coeff cients were more than 0.999. The average recovery rates of tetrahydrofuran, ethyl acetate, isopropanol, toluen and N,N-dimthyl formamide were 98.79%, 100.99%, 106.04%, 100.85% and 105.39%, while the detection limits were 0.011 0, 0.006 9, 0.006 7, 0.001 6 and 0.076 0 μg / mL, respectively.Conclusion：The method is sensitive and linear, which may be used for the determination of residual solvents in rof umilast.

Rof umilast; Headspace Gas Chromatography; Residual Solvents

TQ46；R917

A

10.3969/j.issn.2096-3327.2017.02.010

2016 - 11 - 14

吉林省科技發(fā)展計劃項目，項目編號：20126043

高海鷹，女，碩士，副教授。研究方向：藥物分析。通訊作者E-mail：ghy1998@126.com