祝儒剛，孫艷頔,陳 罡，范俊崗，劉怡菲

(1.遼寧大學(xué) 生命科學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110036; 2.遼寧大學(xué) 輕型產(chǎn)業(yè)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng)110036; 3.遼寧省林業(yè)科學(xué)研究院，遼寧 沈陽(yáng) 110036)

軟棗獼猴桃與中華獼猴桃功能成分比較研究

祝儒剛2，孫艷頔1,陳 罡3，范俊崗3，劉怡菲3

(1.遼寧大學(xué) 生命科學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110036; 2.遼寧大學(xué) 輕型產(chǎn)業(yè)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng)110036; 3.遼寧省林業(yè)科學(xué)研究院，遼寧 沈陽(yáng) 110036)

為開(kāi)發(fā)利用野生軟棗獼猴桃資源，以吉林地區(qū)野生軟棗獼猴桃和中華獼猴桃為材料，采用液相色譜法、紫外分光光度計(jì)法以及火焰原子吸收法對(duì)其功能成分進(jìn)行了比較研究.結(jié)果表明，軟棗獼猴桃多糖含量為8.85 mg·g-1，是中華獼猴桃的4倍；軟棗獼猴桃黃酮含量為4.28 mg·g-1，是中華獼猴桃的7.6倍；軟棗獼猴桃Vc含量為1.34 mg·g-1，略高于中華獼猴桃.軟棗獼猴桃的Fe、Mn、Zn和Ca元素含量分別為3.45，0.26，0.85和24.7 μg/g，均遠(yuǎn)高于中華獼猴桃.

軟棗獼猴桃；中華獼猴桃；功能成分；比較研究

0 引言

獼猴桃，又稱(chēng)奇異果，屬獼猴桃科(Actinidiaceae)獼猴桃屬(ActinidiaLindl).獼猴桃分布廣泛，我國(guó)是優(yōu)勢(shì)主產(chǎn)區(qū)，產(chǎn)地主要集中在秦嶺以南和橫斷山脈以東的大陸地區(qū)，共有52種以上[1].獼猴桃被稱(chēng)為“水果之王”[2]，質(zhì)地柔軟，口感酸甜，富含Vc、三萜類(lèi)和黃酮類(lèi)化合物、多糖、有機(jī)酸以及多種礦物元素，其生物活性成分具有抗腫瘤[3]、抗突變[4]、抗氧化[5]、免疫調(diào)節(jié)[6]以及保肝護(hù)肝[7]等生理功能，深受消費(fèi)者喜愛(ài).目前主要商業(yè)栽培的種類(lèi)是中華獼猴桃(ActinidiachinensisPlanch)，其果大，肉質(zhì)細(xì)嫩、風(fēng)味獨(dú)特.軟棗獼猴桃(ActinidiaargutaPlanch)又叫軟棗子，是中國(guó)特有的、分布最廣泛的野生水果之一，其果實(shí)甜美可口，具有滋補(bǔ)強(qiáng)身、生津潤(rùn)肺、抗衰老，抗病毒，抗艾滋病和調(diào)節(jié)免疫機(jī)能的功效，因此對(duì)軟棗獼猴桃產(chǎn)后的加工利用越來(lái)越受到人們極大的關(guān)注[8].獼猴桃果實(shí)可以釀酒[9]、可以制作果脯、果醋[10]，其根部具有醫(yī)藥價(jià)值[11].本研究以軟棗獼猴桃和中華獼猴桃為材料，比較研究了其果實(shí)中多糖、黃酮、Vc和微量元素Fe、Mn、Zn、Ca的含量，意在為獼猴桃的開(kāi)發(fā)利用提供有價(jià)值的理論依據(jù).

1 儀器與試劑

1.1 材料

野生軟棗獼猴桃(產(chǎn)地：吉林磐石)；中華獼猴桃(市售)

1.2 試劑

無(wú)水乙醇、苯酚、濃硫酸、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉和草酸等為分析純，甲醇為色譜純，硝酸為優(yōu)級(jí)純，均購(gòu)于沈陽(yáng)國(guó)藥集團(tuán).葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于沈陽(yáng)森宇生物科技有限公司.

1.3 儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；UV2550紫外分光光度計(jì)(日本島津)；1525高效液相色譜儀(美國(guó)WATERS); Z-2000原子吸收分光光度計(jì)(日本日立高科技貿(mào)易有限公司)；DK-S26恒溫水浴鍋(上海精宏).

2 方法

2.1 多糖的提取與測(cè)定

軟棗獼猴桃和中華獼猴桃果實(shí)中多糖的提取采用水提醇沉法，并用苯酚硫酸法在490 nm處進(jìn)行多糖含量的測(cè)定[12].

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作

精確稱(chēng)取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品20 g，100 mL容量瓶定容，既得到濃度為0.20 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液.精確吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9和1.0 mL于試管中，分別用蒸餾水補(bǔ)至1 mL，加入6%的苯酚溶液2.0 mL，混勻，加入濃硫酸10 mL，靜置10分鐘，搖勻，80 ℃水浴20分鐘，冷卻至室溫.另取蒸餾水1mL，同法制備空白對(duì)照，在490 nm處測(cè)量吸光度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn).

2.1.2 樣品含量的測(cè)定

將軟棗獼猴桃和中華獼猴桃制成果漿，分別稱(chēng)取2 g，按1∶15的料液比在70 ℃水浴中提取4小時(shí)，過(guò)濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至原體積五分之一，加無(wú)水乙醇至80%進(jìn)行醇沉.取濾渣，干燥，加蒸餾水溶解，定容于100 mL容量瓶，既得供試品溶液.取1 mL提取液按2.1.1方法在490 nm處測(cè)吸光度.通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算樣品中多糖含量[13].

2.2 總黃酮含量的測(cè)定

利用醇提法提取黃酮類(lèi)化合物，用分光光度法，建立蘆丁濃度-吸光度關(guān)系的回歸方程.通過(guò)查標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算獼猴桃中總黃酮的含量[14].

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制作

稱(chēng)取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20 g， 50 mL容量瓶定容，既得到濃度為0.20 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液.分別取0、1、2、3、4、5 mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液置于比色管中，加70%乙醇至10 mL，加入1 mL質(zhì)量濃度為5%的NaNO2，搖勻，靜置6分鐘，加入1 mL10%的Al(NO3)·6H2O，搖勻，靜置6分鐘，加入4%的NaOH 10 mL，以70%乙醇定容至25 mL，靜置15分鐘，在510 nm處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn).

2.2.2 樣品含量的測(cè)定

軟棗獼猴桃和中華獼猴桃鮮果洗凈，吸干表面水分，軟棗獼猴桃直接勻漿，中華獼猴桃去皮后勻漿.分別取10 g于100 mL燒杯中，加入4倍體積70%乙醇混合均勻，270 W功率超聲6分鐘，60 ℃水浴40分鐘.提取物混合液在4 ℃條件下10 000 r/min離心15分鐘，上清液即為軟棗獼猴桃和中華獼猴桃黃酮的粗提液.取1 mL黃酮粗提液置于比色管中，按照2.2.1的方法測(cè)定510 nm處的吸光度.通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算出樣品中總黃酮的含量.

2.3 Vc含量的測(cè)定

2.3.1 Vc標(biāo)準(zhǔn)液的制備

甲醇使用前經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾.配制0.1%的草酸溶液，用0.45 μm濾膜過(guò)濾.稱(chēng)取Vc標(biāo)準(zhǔn)品100 mg 于小燒杯中，用0.1%的草酸溶解, 轉(zhuǎn)移至100 mL棕色容量瓶中，得到1 000 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液.

2.3.2 樣品處理

將軟棗獼猴桃和中華獼猴桃榨汁，分別取鮮果汁5 g，用0.1%的草酸定容至25 mL容量瓶，過(guò)0.45 μm濾膜，待分析測(cè)定.

2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和樣品含量測(cè)定

色譜條件：色譜柱(C18)；流動(dòng)相(0.1%的草酸)，流速為1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm；進(jìn)樣量為5 μL；柱箱溫度為30 ℃[15].

將Vc標(biāo)準(zhǔn)液稀釋為100、200、300、400、500 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，按上訴色譜條件測(cè)定吸收峰面積，樣品同法.以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，并從曲線(xiàn)上查出待測(cè)樣品的實(shí)際濃度[16-17].

2.4 微量元素含量的測(cè)定

2.4.1 樣品處理

分別取軟棗獼猴桃和中華獼猴桃去皮果漿5 g，置于250 mL的錐形瓶中，加入15 mL濃硝酸，靜置，冷消解過(guò)夜.次日在電熱板上依次使用低溫、中溫加熱消解1小時(shí)，高溫加熱至無(wú)棕紅色氣體產(chǎn)生.取下樣品，待冷卻后加入5 mL超純水，繼續(xù)加熱至無(wú)色，靜置冷卻，用5%硝酸將消解液定容于50 mL容量瓶.用5%硝酸作為空白對(duì)照溶液.

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

按照表1配制各元素的標(biāo)準(zhǔn)溶液.

表1 待測(cè)元素標(biāo)準(zhǔn)系列溶液

2.4.3 獼猴桃中待測(cè)元素含量的測(cè)定

表2 測(cè)試條件

按表2設(shè)置儀器最佳工作條件，用5% 稀硝酸溶液校零，分別將試劑空白、待測(cè)元素標(biāo)準(zhǔn)系列溶液、獼猴桃空白溶液和獼猴桃消解液直接導(dǎo)入火焰，測(cè)量其吸光度及獼猴桃消解液中待測(cè)元素的實(shí)際濃度，計(jì)算獼猴桃中Fe，Mn，Zn，Ca的含量[18].

3 結(jié)果與分析

3.1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程及樣品中多糖含量

按照方法2.1，以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，以樣品吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如圖1.回歸方程為：y=6.300 3x+0.013 2，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 0.

按照2.1所述方法，根據(jù)樣品吸光度和樣品稀釋倍數(shù)計(jì)算出軟棗獼猴桃多糖含量見(jiàn)表3，中華獼猴桃和軟棗獼猴桃多糖含量分別為2.20 mg·g-1，8.85 mg·g-1.

3.2 黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程及樣品中總黃酮含量

按照方法2.2，以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，樣品吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如圖2，求得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程為：y=6.300 3x+0.013 2相關(guān)系數(shù)R2=0.999.

按照2.2 所述方法根據(jù)樣品吸光度計(jì)算出軟棗獼猴桃總黃酮含量見(jiàn)表4，中華獼猴桃黃酮含量為0.56 mg·g-1，軟棗獼猴桃黃銅含量為4.28 mg·g-1.

圖1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

圖2 黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

品種OD值多糖含量/(mg·g-1)中華獼猴桃0290220軟棗獼猴桃1128885

表4 獼猴桃黃酮含量

3.3 Vc標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程及樣品中Vc含量

按照方法2.3，以Vc濃度為橫坐標(biāo)，樣品吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如圖3，求得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程為：y=10 200x+39 222相關(guān)系數(shù)R2=0.998 3.

按2.3色譜條件測(cè)定Vc標(biāo)準(zhǔn)液和軟棗獼猴桃的色譜圖見(jiàn)圖4，圖5.

圖3 Vc標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

圖4 Vc標(biāo)準(zhǔn)液高效液相色譜圖

圖5 軟棗獼猴桃高效液相色譜圖

按照2.3 所述方法根據(jù)樣品吸收峰面積計(jì)算出軟棗獼猴桃和中華獼猴桃Vc含量如表5：

3.4 樣品中微量元素的含量

用火焰原子吸收光譜法測(cè)定軟棗獼猴桃和中華獼猴桃中Fe，Mn，Zn，Ca元素的濃度，并計(jì)算出含量如表6.

表5 樣品Vc含量

表6 樣品中微量元素測(cè)定結(jié)果 單位：μg·g-1

4 結(jié)論與討論

通過(guò)分析比較可知，軟棗獼猴桃多糖含量為8.85 mg·g-1，中華獼猴桃多糖含量為2.2 mg·g-1，是中華獼猴桃的4倍.軟棗獼猴桃總黃酮含量為4.28 mg·g-1，中華獼猴桃總黃酮含量為0.56 mg·g-1，是中華獼猴桃的7倍多.軟棗獼猴桃總Vc含量為1.340 mg·g-1，中華獼猴桃總Vc含量為1.200 mg·g-1，軟棗獼猴桃Vc含量略高于中華獼猴桃.軟棗獼猴桃的Fe、Mn、Zn、Ca元素含量分別是5.256、1.507、1.143、127.615 μg·g-1，中華獼猴桃的Fe、Mn、Zn、Ca元素含量分別為3.452、0.259、0.845、24.701 μg·g-1，比較可知軟棗獼猴桃的Fe含量顯著高于中華獼猴桃，其Mn、Zn、Ca含量均在中華獼猴桃的5倍以上.所以軟棗獼猴桃比中華獼猴桃的功能和營(yíng)養(yǎng)成分含量更高，有廣闊的市場(chǎng)前景和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)能力.

在測(cè)定總黃酮的過(guò)程中本實(shí)驗(yàn)也嘗試了丙酮提取法，但是經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)都發(fā)現(xiàn)黃酮粗提液中存在一定量的棕綠色油性物質(zhì)，影響最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，經(jīng)查閱文獻(xiàn)表明其可能是獼猴桃籽油[19]，具體還需要經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的理化分析確定其成分.

雖然軟棗獼猴桃的主要營(yíng)養(yǎng)成分和微量元素均顯著高于中華獼猴桃，但是還需對(duì)野生軟棗獼猴桃的其他成分進(jìn)行分析，與中華獼猴桃進(jìn)行比較，才能確定軟棗獼猴桃的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值是否高于中華獼猴桃.所以對(duì)野生軟棗獼猴桃的其他成分有待進(jìn)一步研究.

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(責(zé)任編輯 李 超)

Comparative Study of Functional Ingredients inActinidiaargutaand Chinese Gooseberry

ZHU Ru-gang2,SUN Yan-di1,CHEN Gang3,FAN Jun-gang3,LIU Yi-fei3

(1.SchoolofLifeScience,LiaoningUniversity,Shenyang110036,China；2.SchoolofLightIndustry,LiaoningUniversity,Shenyang110036,China；3.Forestryscienceresearchinstituteofliaoningprovince,Shenyang110036,China)

For the development and utilization of wildActinidiaargutaPlanch resource,this paper taked wildActinidiaargutain Jilin andActinidiachinensisas raw materials,using liquid chromatography(HPLC),ultraviolet spectrophotometer,and the method of flame atomic absorption functional component carried on the comparative study.The results showed that the polysaccharide content ofActinidiaargutawas 8.85 mg·g-1,four times that of Actinidia Chinensis Planch,and flavonoids content was 4.28 mg·g-1,7.6 times of theActinidiachinensisPlanch.VC content inActinidiaargutawas 1.34 mg·g-1,higher than that ofActinidiachinensisPlanc.ActinidiaargutaPlanch of Fe,Mn,Zn,Ca element content was 3.45,0.26,0.85 and 24.7 μg/g,was much higher than theActinidiachinensisPlanch.

actinidia chinensis planch；actinidia arguta planch；functional components；comparative study

2016-07-18

國(guó)家自然科學(xué)基金青年項(xiàng)目(31301424)；遼寧省教育廳科學(xué)研究一般項(xiàng)目(L2013008)；遼寧大學(xué)博士啟動(dòng)基金

祝儒剛(1980-)，男，博士，副教授，從事食品科學(xué)與分子營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究，E-mail:276284386@qq.com.

Q 949.91

A

1000-5846(2017)01-0059-06