丁麗麗，黃玲莎，葉儉，張?jiān)?，劉志明，黃昭東，梁藝華

（廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，廣西 南寧 530021）

尿膀胱腫瘤抗原在膀胱癌中的表達(dá)及意義

丁麗麗，黃玲莎，葉儉，張?jiān)?，劉志明，黃昭東，梁藝華

（廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院，廣西 南寧 530021）

目的探討膀胱腫瘤抗原（BTA）的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 收集46例膀胱癌、35例泌尿系良性疾病、10例健康者尿液，同時(shí)做尿脫落細(xì)胞學(xué)及BTA檢測。結(jié)果 ①BTA檢測的敏感性為86.9%，特異性為82.2%，假陽性率為17.8%（95%CI：0.759，0.924）；尿脫落細(xì)胞學(xué)檢測的敏感性為34.7%，特異性為97.8%，假陽性率為2.2%（95%CI：0.550，0.775）；②BTA表達(dá)水平和敏感性與腫瘤分級(jí)分期、有無肉眼血尿有關(guān)（P＜0.05），與復(fù)發(fā)或初發(fā)無關(guān)（P＞0.05）；BTA對各級(jí)、各期的膀胱癌的敏感性均高于尿脫落細(xì)胞學(xué)檢測（P＜0.05）；③BTA在早期膀胱癌（Ta～T1期）中表達(dá)水平高于良性疾病組、健康組（P＜0.05）。結(jié)論 BTA對膀胱癌的診斷、早期篩查及跟蹤隨訪有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值，但應(yīng)注意血尿影響B(tài)TA檢測結(jié)果。

酶聯(lián)免疫吸附法；膀胱腫瘤抗原；膀胱癌；尿脫落細(xì)胞學(xué)

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)中最常見的惡性腫瘤，約70%膀胱癌最初表現(xiàn)為淺表性病變，復(fù)發(fā)率高達(dá)65%～85%[1]。膀胱癌生物學(xué)行為復(fù)雜多變，表現(xiàn)為易復(fù)發(fā)、多發(fā)、浸潤和轉(zhuǎn)移，因此需要早期診斷和長期隨訪[2]。目前，膀胱癌的診斷主要依靠尿脫落細(xì)胞學(xué)和膀胱鏡檢查。尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查敏感性低，而膀胱鏡檢查增加患者的痛苦和經(jīng)濟(jì)壓力，目前尚缺乏理想的標(biāo)記物協(xié)助診斷和治療后的追蹤[3-6]。膀胱腫瘤抗原（bladder tumour antigen，BTA）是由膀胱癌細(xì)胞表達(dá)，并可釋放入尿液中[7-8]，本研究通過酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測尿BTA在膀胱癌中的表達(dá)，并與尿脫落細(xì)胞學(xué)作比較，探討尿BTA在膀胱癌診斷和隨訪中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2015年5月-2016年1月廣西醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院膀胱癌住院患者46例，均經(jīng)膀胱鏡活檢或術(shù)后病理檢查確診為膀胱癌，作為膀胱癌組。其中，膀胱移行細(xì)胞癌43例，膀胱鱗癌1例，膀胱腺癌2例；另收集同期門診有泌尿系統(tǒng)良性疾病患者35例作為良性疾病組。其中，泌尿系炎癥16例，結(jié)石10例，前列腺肥大1例，不明原因血尿5例，腺性膀胱炎3例；同時(shí)收集體檢中心健康者10例作為健康組。所收集的良性疾病患者和健康者在年齡、性別方面與膀胱癌組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

留各實(shí)驗(yàn)對象有創(chuàng)操作前的晨尿60 ml，取各樣本尿沉渣作尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查，診斷結(jié)果為可見癌細(xì)胞或可疑癌細(xì)胞定為陽性處理；同時(shí)留各實(shí)驗(yàn)對象尿液標(biāo)本10 ml，按以下步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作：①加樣溫育：在樣品孔中加入45 μl BTA樣品稀釋液，加入5 μl的尿標(biāo)本，再加入BTA酶工作液50μl，震蕩混勻，加蓋封板膜，37℃溫育30 min。②洗板：每孔加入350 μl洗液，靜置5～10 s后棄盡，重復(fù)沖洗5次后，拍干。③顯色：每孔加入50μl底物液A和50 μl底物液B，充分混勻，37℃溫育15 min。④終止：每孔加入50 μl終止液，充分混勻。⑤測定：終止反應(yīng)后，立即置酶標(biāo)儀450 nm波長下測定光密度值。⑥計(jì)算：使用雙對數(shù)線性擬合方式log（X）-log（Y）計(jì)算結(jié)果。BTA檢測試劑盒由北京普恩光德生物科技公司提供。實(shí)驗(yàn)方法為ELISA法。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以中位數(shù)和四分位數(shù)間距表示，用秩和檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)，Cut-off值的確定根據(jù)受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve，ROC），P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 尿BTA與尿脫落細(xì)胞學(xué)診斷效能評(píng)價(jià)

評(píng)估BTA作為膀胱癌的診斷性能，基于ROC曲線結(jié)果，BTA最佳轉(zhuǎn)折點(diǎn)為93 ng/ml，BTA的敏感性和陰性預(yù)測值為86.9%和86.0%[95%可信區(qū)間（confidence interval，CI）：0.759，0.924]；尿細(xì)胞學(xué)敏感性和陰性預(yù)測值為34.7%和59.4%（95%CI：0.550，0.775）；BTA的ROC曲線下面積為0.863，尿脫落細(xì)胞學(xué)的曲線下面積為0.670，因此BTA的診斷效果高于尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查；BTA的假陽性率為17.8%，高于尿脫落細(xì)胞學(xué)（2.2%），BTA特異性和陽性預(yù)測值為82.2%和83.3%。見附圖。

附圖 尿BTA、尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查的ROC曲線圖

2.2 尿BTA的表達(dá)與尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果比較

以最適有效濃度93 ng/ml為基準(zhǔn)，所測BTA濃度≥93 ng/ml定為陽性，BTA濃度＜93 ng/ml為陰性，BTA濃度與膀胱癌分級(jí)、分期呈正相關(guān)（rs=0.420和0.660，P=0.000），即膀胱癌分級(jí)分期越高，尿BTA值越高；尿BTA敏感性與膀胱癌分級(jí)、分期呈正相關(guān)（rs=0.306和0.311，P=0.038）；BTA濃度與膀胱癌復(fù)發(fā)、初發(fā)無關(guān)（rs=0.228，P=0.127），與血尿程度呈正相關(guān)（rs=0.577，P=0.000），即血尿濃度越高，尿BTA濃度越高。尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查的敏感性與膀胱癌分級(jí)、復(fù)發(fā)或初發(fā)、有無肉眼血尿比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但與膀胱癌分期呈正相關(guān)（rs=0.309，P= 0.037）。對不同類型膀胱癌，BTA的敏感性高于尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查（P＜0.05）。見表1。

2.3 Ta～T1期膀胱癌與良性疾病組、健康組BTA表達(dá)水平比較

將非侵潤性尿路上皮癌（Ta～T1期膀胱癌）BTA表達(dá)水平與良性疾病組、健康組比較，Ta～T1期膀胱癌BTA表達(dá)中位數(shù)88.46 ng/ml，良性疾病組BTA中位數(shù)28.75 ng/ml，健康組BTA 1.28 ng/ml，經(jīng)非參數(shù)Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。其中Ta～T1期膀胱癌BTA表達(dá)水平與良性疾病組比較，經(jīng)Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-2.747，P=0.006）；Ta～T1期膀胱癌BTA表達(dá)水平與健康組比較，經(jīng)Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-4.411，P=0.000），因此Ta～T1期膀胱癌BTA表達(dá)水平高于良性疾病組和健康組。見表2。

表1 尿BTA的表達(dá)與尿脫落細(xì)胞學(xué)結(jié)果比較

表2 Ta～T1期膀胱癌與良性疾病組、健康對照組BTA表達(dá)水平比較

3 討論

膀胱腫瘤抗原BTA是膀胱癌細(xì)胞生成的H相關(guān)蛋白，其與補(bǔ)體C3b結(jié)合，從而抑制攻膜復(fù)合物的形成，使腫瘤免受免疫攻擊，促進(jìn)腫瘤生長[9-10]，正常膀胱上皮細(xì)胞不表達(dá)BTA。膀胱癌細(xì)胞可直接釋放膀胱腫瘤抗原進(jìn)入尿液[11-12]。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用ELISA法檢測尿液中BTA含量，研究其對膀胱癌的診斷價(jià)值。

本研究結(jié)果顯示，當(dāng)以93ng/ml為最適臨界值時(shí)，BTA的ROC曲線下面積高于尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查，且BTA敏感性與特異性均較高（86.9%和82.2%），提示BTA與尿脫落細(xì)胞學(xué)相比對膀胱癌具有較好地診斷價(jià)值。本研究結(jié)果提示，BTA對各級(jí)別、期別膀胱癌的敏感性高于尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查，客觀上彌補(bǔ)尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查敏感性低的缺點(diǎn)。BTA濃度及敏感性與膀胱癌分級(jí)、分期呈正相關(guān)，即惡性程度高的浸潤性癌BTA表達(dá)水平高于低度惡性淺表性癌，這可能與該型腫瘤在增殖、凋亡方面更為活躍，腫瘤BTA表達(dá)增加有關(guān)。本研究顯示，BTA對浸潤性膀胱癌的敏感性達(dá)100%，雖然這可能與本研究中樣本量較小有關(guān)，但仍提示隨著膀胱癌惡性程度的增高，BTA表達(dá)水平亦相應(yīng)增加。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，BTA在復(fù)發(fā)膀胱癌中的濃度和敏感性與初發(fā)膀胱癌比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這對膀胱癌患者術(shù)后的跟蹤隨訪具有重要意義，對檢測術(shù)后復(fù)發(fā)有較理想的應(yīng)用前景。

BTA的假陽性率為17.8%，較高的假陽性率客觀上限制BTA的廣泛臨床運(yùn)用[13]。本研究結(jié)果顯示，血尿?qū)TA的檢測有一定干擾，而80%的血尿是由泌尿系良性疾病引起。各文獻(xiàn)報(bào)道的BTA最適臨界值和其對膀胱癌檢測的濃度、敏感性各不相同，且相差較大[14]。李揚(yáng)等[15]發(fā)現(xiàn)，尿BTA（11.2 u/L為最適臨界值）診斷膀胱癌的敏感性分別為73.5%，而馬重等[16]報(bào)道BTA敏感性僅為50%，各實(shí)驗(yàn)結(jié)果差異較大，是BTA未能在臨床上廣泛應(yīng)用的主要原因。產(chǎn)生該差異的原因，目前說法不一，可能是由于各研究所收集的樣本數(shù)量、腫瘤類型，以及尿液性狀等不同因素所致；本研究提示，差異的原因可能是各研究樣本所含血尿程度不同引起。血尿?qū)TA檢測的影響可能是造成假陽性的原因，因此運(yùn)用BTA檢測篩查膀胱癌應(yīng)考慮血尿的影響。

本研究結(jié)果顯示，BTA對Ta～T1期膀胱癌敏感性達(dá)78%，且表達(dá)水平高于良性疾病組和健康組，這為BTA用于早期膀胱癌的篩查提供了依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示：①尿BTA對膀胱癌診斷的敏感性和陰性預(yù)測值均高于尿脫落細(xì)胞學(xué)檢查，且本身特異性亦不低；②尿BTA表達(dá)水平和敏感性隨著膀胱癌分級(jí)、分期的增高而相應(yīng)升高；③尿BTA對復(fù)發(fā)膀胱癌仍有較高的價(jià)值；④血尿影響B(tài)TA的檢測值；⑤尿BTA對早期膀胱癌有較高的敏感性。綜上所述，BTA對膀胱癌的診斷、早期篩查及跟蹤隨訪有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值，但應(yīng)注意血尿?qū)z測的影響。

參 考 文 獻(xiàn)：

[1]MORALES-BARRERA R,SUáREZ C,de CASTRO A M,et al. Targeting fibroblast growth factor receptors and immune checkpoint inhibitors for the treatment of advanced bladder cancer：new direction and new hope[J].Cancer Treat Rev,2016,10(1)：208-216.

[2]MARKO B,WILLEM O,RICHARD S,et al.EAU guidelines on non-muscle-invasive urothelialcarcinoma ofthe bladder,the 2011 update[J].European Urology,2011,59(6)：997-1008.

[3]陳華,項(xiàng)明潔,張華,等.尿膀胱癌抗原作為膀胱腫瘤標(biāo)志物的臨床評(píng)價(jià)[J].標(biāo)記免疫分析與臨床,2008,15(1)：17-19.

[4]GOODISON S,ROSSER C J,URQIDI V,et al.Bladder cancer detection and monitoring：assessmentofurine-and blood-based maeker tests[J].Mol Diagn Ther,2013,17(2)：71-84.

[5]艾衍凱,張?zhí)煊?尿液中膀胱癌早期無創(chuàng)診斷的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥指南,2013,11(3)：445-447.

[6]劉云飛,鄭江,劉昌茂,等.核基質(zhì)蛋白22及尿膀胱癌抗原在膀胱移行細(xì)胞癌診斷中的價(jià)值[J].中國綜合臨床,2010,26(1)：80-82.

[7]郭毓鵬,關(guān)紅軍,董晶,等.尿膀胱癌抗原檢測診斷膀胱癌的分析[J].臨床泌尿外科雜志,2015,30(5)：1001-1420.

[8]WHITING P F,RUTJESA W,WESTWOOD M E,etal. QUADAS-2：a revised tool for the quality assessment of diagnostic accuracy studies[J].Ann intern Med,2011,155(8)：529-536.

[9]郝曉明,劉光明,徐子強(qiáng),等.核基質(zhì)蛋白22和膀胱腫瘤抗原對國人膀胱癌診斷價(jià)值的系統(tǒng)評(píng)價(jià)[J].臨床泌尿外科雜志,2016,1(15)：1001-1420.

[10]BUDMAN L I,KASSOUF W,STEINBERG J R,et al.Biomarkers for detection and surveillance of bladder cancer[J].Canadian Urological Association,2008,2(3)：12-21.

[11]丁才學(xué).膀胱癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)監(jiān)測中尿腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測組合方式的研究[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2012,19(32)：10-11.

[12]HAKENBERG O W,FUESSEL S,RICHTER K,et al.Qualitative and quantitative assessment of urinary cytokerat in 8 and 18 fragments compared with voided urine cytology in diagnosis of bladder carcinoma[J].Urology,2004,64(6)：1121-1126.

[13]GUO A,WANG X,GAO L,et al.Bladder tumour antigen (BTAstat)test compared to the urine cytology in the diagnosis of bladder cancer：a meta analysisy[J].Canurol Assoc J,2014,8(5)：347-352.

[14]王高雷.尿液檢查在膀胱癌診斷和術(shù)后復(fù)發(fā)監(jiān)測中的應(yīng)用和發(fā)展[J].檢驗(yàn)與診斷,2015,9(5)：53-54.

[15]李揚(yáng),林章禮,鄭衍平,等.尿液NMP22 UBC及BTA聯(lián)合檢測在膀胱癌早期診斷中的意義研究[J].河北醫(yī)學(xué),2008,14(11)：1261-1264.

[16]馬重,林建水,曾蜀雄,等.膀胱癌無創(chuàng)性早期診斷標(biāo)志物的研究進(jìn)展[J].上海醫(yī)學(xué),2015,38(4)：347-350.

（童穎丹 編輯）

Expression of urinary bladder tumor antigen in bladder cancer and significance

Li-li Ding,Lin-sha Huang,Jian Ye,Yun Zhang,Zhi-ming Liu, Shao-dong Huang,Yi-hua Liang
(Tumor Hospital Affiliated to Guangxi Medical University,Nanning,Guangxi 530021,China)

ObjectiveTo assess the diagnostic value of bladder tumor antigen (BTA)in the detection of bladder cancer.Methods Subjects,including 46 patients with bladder cancer,35 patients with urological benign diseases,and 10 normal individuals were enrolled in this study.All subjects received urine BTA assay and urinary cytology before cystoscopy.Cystoscopic result was the standard of detection.Results The sensitivity, specificity and false positive rate of the BTA test were 86.9%,82.2%and 17.8% (95%CI:0.759,0.924) respectively;the sensitivity,specificity and false positive rate of cytological test were 34.7%,97.8%and 2.2% (95%CI:0.550,0.775)respectively.The expression level of BTA and sensitivity were correlated to tumor stage,grade and hematuria degree (P＜0.05),but not correlated to relapse or initial cancer(P＞0.05).The sensitivity of BTA in diagnosis of bladder cancer at all grades and stages was higher than that of urinary cytology(P＜0.05).The level of BTA in the non-invasive bladder cancer group was significantly higher than that in the healthy group and the benign disease group(P＜0.05).Conclusions Urinary BTA expression has a high clinical value in the diagnosis,early screening and follow-up of bladder cancer,but attention should be paid to the effect of hematuria on BTA test results.

enzyme-linked immunosorbent assay;bladder cancer;bladder tumor antigen;urinary cytology

R737.14

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.06.022

1005-8982（2017）06-0106-04

2016-11-02

黃玲莎，Tel：13878133395