朱松山殷君黃華藝，3★

·綜述·

土撥鼠肝炎病毒動物模型在肝細(xì)胞癌研究中的應(yīng)用

朱松山1殷君2黃華藝1，3★

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）是一種廣泛存在的人類病原體，可引起肝炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）。HBV感染嚴(yán)重威脅人類的健康，尤其以我國和東南亞國家為甚。慢性乙型肝炎和因慢性HBV感染而導(dǎo)致的HCC的發(fā)病機(jī)制、診斷和治療仍是一個很具挑戰(zhàn)性的課題。目前研究病毒性肝炎以及肝炎后肝硬化和HCC的發(fā)病機(jī)制和診治很大程度上依賴于動物模型，而良好的動物模型的選擇是決定研究結(jié)論是否可靠的基礎(chǔ)。土撥鼠是一種主要生活在北美大平原的動物，其個體和肝臟大小特征、攜帶的土撥鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus,WHV）的致病機(jī)制，疾病進(jìn)展與人HBV相似性等因素很利于研究乙肝病毒性肝炎和HCC的發(fā)生和發(fā)病機(jī)制、診斷與治療。因此，通過土撥鼠肝炎動物模型能更好地了解HBV與HCC的復(fù)雜關(guān)系并將促進(jìn)更好的預(yù)防和治療新策略的制定。本文就土撥鼠動物模型在乙型病毒性肝炎以及HCC研究中的應(yīng)用進(jìn)展做一概述。

土撥鼠；乙型肝炎病毒；動物模型；肝細(xì)胞癌

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）是一種廣泛存在的人類病原體，可引起肝炎、肝硬化和肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）?，F(xiàn)在約有2億4 000萬例慢性乙肝病毒攜帶者，每年約有620 000例死于乙肝相關(guān)的肝臟疾病，其中，HBV引起HCC的診斷和治療仍存在很大的挑戰(zhàn)［1］。動物模型是研究乙型病毒性肝炎和HCC常用的有效方法。土撥鼠攜帶的土撥鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus，WHV）與人HBV相似，因此，土撥鼠肝炎病毒動物模型得到了廣泛的使用，通過研究土撥鼠肝炎病毒動物模型能更好地了解HBV感染導(dǎo)致HCC發(fā)生的復(fù)雜機(jī)制并將促進(jìn)更好的預(yù)防和治療新策略的制定。本文就近年來，土撥鼠肝炎病毒動物模型在HCC中的應(yīng)用進(jìn)展做一概述。

1 人乙型肝炎病毒性肝細(xì)胞癌動物模型概況

HBV對宿主有嚴(yán)格的選擇性，除人類和大猩猩外，難以感染其他動物。黑猩猩是最理想的實(shí)驗(yàn)動物模型，曾廣泛被用于HBV感染的研究。但是受動物來源和倫理因素的影響，其使用越來越受限制。

HBV轉(zhuǎn)基因小鼠可使小鼠直接感染HBV，允許異體移植細(xì)胞在體內(nèi)存活，這是一種評價和比較抗乙肝病毒藥物較理想的動物模型［2］，其缺點(diǎn)是造模難度大，繁殖率低，死亡率高。

樹鼩與靈長類動物的一些神經(jīng)受體蛋白基因之間的同源性程度高，因此樹鼩也被用于肝癌動物模型，尤其是在地域性的毒理學(xué)和病毒學(xué)研究中。但是，HBV在樹鼩體內(nèi)感染屬一過性且缺乏穩(wěn)定性，不利于感染后的評價。

鴨乙型肝炎病毒也屬嗜肝DNA病毒，其來源廣，成本低，可在一定程度上了解HBV的感染復(fù)制周期及宿主免疫系統(tǒng)。但是鴨子與人類的遺傳差異較大，使鴨乙型肝炎病毒模型的使用受到了限制。

土撥鼠動物模型攜帶WHV的DNA病毒結(jié)構(gòu)和復(fù)制的生命周期與HBV相似，在核心蛋白的裝配結(jié)構(gòu)域序列（分別為wcp149和hcp149）有高達(dá)65％的一致性［3］，可引起急性和慢性肝炎。此外，慢性感染W(wǎng)HV的土撥鼠通常在感染后2～4年會導(dǎo)致HCC的發(fā)生。在土撥鼠模型上長期使用抗病毒核苷療法已可以對HCC進(jìn)行預(yù)防，同時也展示了治療HCC的創(chuàng)新性的分子生物學(xué)方法。

2 土撥鼠和WHV

土撥鼠屬嚙齒類動物，平均體重為4.5 kg，最大可成長至6.5 kg，身長約為56 cm。土撥鼠主要分布于北美大草原，新生土撥鼠約3個月后即達(dá)到成熟期，其壽命可以長達(dá)10年之久，每天以素食為主，一天最多可以吃上5 kg的綠色蔬果，其價格相對低廉，一只約1 500元人民幣左右。使用土撥鼠的研究始于1978年，當(dāng)時發(fā)現(xiàn)土撥鼠對WHV有著很高的感染率，并有很高的慢性肝炎和HCC患病率。后來研究發(fā)現(xiàn)，WHV攜帶有相關(guān)的HBV基因，并且其基因組具有復(fù)制能力，可用來感染土撥鼠［4］。

3 土撥鼠肝炎病毒動物模型

在基因組多樣性的肝癌細(xì)胞中，HBV相關(guān)的肝癌基因組顯示有較高的不穩(wěn)定性，可能是由于HBV DNA整合到宿主細(xì)胞基因組，引起染色體改變和癌基因的插入突變。土撥鼠模型是研究HBV感染的信息模型，包括宿主的免疫反應(yīng)和慢性HBV感染的免疫療法［5］。WHV在靶向器官、形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)、基因的遺傳結(jié)構(gòu)、流行病學(xué)、致病機(jī)制、疾病的進(jìn)展等方面與HBV有著高度的相似性。在研究HBV感染人類的發(fā)病機(jī)制方面，土撥鼠感染W(wǎng)HV已被公認(rèn)為是對HBV感染和HBV引起的肝臟疾病研究最合適的模型，其用途超越其他現(xiàn)有的天然和轉(zhuǎn)基因動物模型［6］。通過土撥鼠動物模型能更好地了解HBV感染導(dǎo)致HCC發(fā)生的復(fù)雜機(jī)制并將促進(jìn)更好的預(yù)防和治療策略的制定［7］。

4 土撥鼠肝炎病毒動物模型的應(yīng)用

4.1 WHV感染的自然史

大多數(shù)慢性HBV的感染發(fā)生于新生兒期，因此，利用新生土撥鼠接種WHV后發(fā)現(xiàn)，幾乎所有的土撥鼠發(fā)展成HCC的潛伏生存期為24個月，并且平均預(yù)期壽命為30～32個月。目前，大多數(shù)模型所用的WHV是WHV7或WHV8毒株，其序列具有很高的相似性。同時，WHV野生型毒株（WHVNY）和WHV7毒株表現(xiàn)出類似的復(fù)制水平和引起成年土撥鼠急性感染的能力［8］。新生土撥鼠感染W(wǎng)HV7P1通常有60％～75％成為慢性攜帶者，2年慢性攜帶者50％轉(zhuǎn)為HCC，4年慢性攜帶者接近100％轉(zhuǎn)為HCC，很好地模擬了人慢性HBV攜帶者的病程［9］。與慢性肝炎相似，慢性WHV感染及終身病毒復(fù)制活躍的土撥鼠均不可避免的進(jìn)展為慢性肝炎和HCC。在慢性感染的土撥鼠，e抗原不會刺激機(jī)體產(chǎn)生e抗體來抑制病毒的復(fù)制，而這種現(xiàn)象在慢性HBV感染是常見的。慢性WHV感染的土撥鼠，當(dāng)發(fā)生病毒活躍復(fù)制伴隨表面抗原和e抗原表達(dá)升高時，反映了機(jī)體產(chǎn)生對病毒的免疫耐受，這種過程與HCC的進(jìn)展有密切聯(lián)系。

4.2 土撥鼠肝炎病毒動物模型在人肝細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制研究上的應(yīng)用

4.2.1 土撥鼠肝炎病毒動物模型免疫學(xué)的研究

在HBV感染過程中，HBV進(jìn)入肝細(xì)胞如何導(dǎo)致疾病的發(fā)生，其機(jī)制尚不清楚。WHV和HBV均有明顯的抗原交叉反應(yīng)，抗原、抗體在肝臟和血液循環(huán)中出現(xiàn)的時間相似，并且病毒誘導(dǎo)的特異性體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答和急性肝炎向慢性肝炎和肝癌的進(jìn)展機(jī)制也有較相似的過程［10］。土撥鼠最常見的感染方式是單獨(dú)感染W(wǎng)HV。感染后土撥鼠的肝細(xì)胞嗜堿性增加，這種在形態(tài)上改變的病灶，可能是癌前性質(zhì)的病灶。但是，多數(shù)不能檢測出WHV表達(dá)的蛋白質(zhì)和核酸，因此可以假設(shè)肝細(xì)胞失去表達(dá)WHV的能力，使這些肝細(xì)胞逃避免疫介導(dǎo)的細(xì)胞死亡，并進(jìn)行克隆擴(kuò)增，從而形成明顯的病灶［11］。土撥鼠在非常低劑量肝炎病毒感染時毫無癥狀，血清學(xué)也檢測不出，但是在分子水平上表現(xiàn)為持續(xù)感染。它的主要表現(xiàn)是原發(fā)性隱匿感染（primary occult infection，POI），通過激活免疫系統(tǒng)，引發(fā)病毒特異性T細(xì)胞反應(yīng)，病毒特異性T細(xì)胞反應(yīng)是持續(xù)隱匿性肝炎的一個非常敏感指標(biāo)，但是缺少了抗病毒抗體的誘導(dǎo)［12］。Mulrooney?Cousins等人［13］的研究發(fā)現(xiàn)，給10只新生土撥鼠注射含10或100病毒顆粒的WHV誘導(dǎo)POI的發(fā)生，所有動物均可在血清中檢測出感染病毒的DNA（＜100～200 copies/mL）和循環(huán)淋巴細(xì)胞，但血清中WHV表面抗原和抗WHV核心抗原仍然終生檢測不到，這一點(diǎn)與人感染HBV后檢測不到核心抗原相似。引起POI陽性的病毒屬于野生型序列，可感染健康的土撥鼠并引起肝炎和HCC。其原因是病毒核酸整合到宿主的肝臟和免疫系統(tǒng)的基因組，保留致癌的效力，并能夠引起在肝臟中的致病性傳播。

4.2.2 土撥鼠肝炎病毒動物模型分子病毒學(xué)的研究

WHV的生命周期也與HBV相似，病毒DNA需整合到宿主基因組中，從DNA逆轉(zhuǎn)錄為RNA。當(dāng)WHV整合到宿主細(xì)胞的DNA時，它通常是可以針對任意數(shù)量細(xì)胞的DNA位點(diǎn)進(jìn)行截?cái)嗪椭嘏?，這成為導(dǎo)致HCC發(fā)生的重要因素［14］。在感染的肝細(xì)胞中游離的cccDNA被認(rèn)為是持續(xù)穩(wěn)定的，因此消除感染的肝細(xì)胞是非常困難的。對于如何維持慢性肝炎病毒感染的決定因素尚未得到充分的認(rèn)識。過去普遍認(rèn)為，慢性肝炎病毒感染僅能通過已感染的肝細(xì)胞的分裂來維持，而不能通過病毒的傳播。但是有研究表明［15］已經(jīng)被WHV誘導(dǎo)成HCC的土撥鼠，再同時感染另一毒株WH?VNY時，在土撥鼠的血清樣本中發(fā)現(xiàn)WHVNY松弛的環(huán)狀DNA，肝臟和肝癌組織中檢測出了WH?VNY RNA的復(fù)制衍生物和WHVNY RNA復(fù)制中間體，這表明肝炎病毒感染和細(xì)胞之間的傳播可能會持續(xù)發(fā)生，肝炎病毒持續(xù)、重疊感染和傳播局限性對于維持慢性感染狀態(tài)具有意義。WHV感染成年土撥鼠會導(dǎo)致急性肝炎，而感染新生土撥鼠會引起慢性肝炎，慢性肝炎可發(fā)展成HCC。利用這一點(diǎn)，土撥鼠模型可作為研究慢性乙型肝炎發(fā)病機(jī)制及向中晚期肝病發(fā)展的理想動物模型。

在研究來源于X/c?myc雙基因的小鼠和WHV感染的土撥鼠時發(fā)現(xiàn)，Suz12/PRC2目的基因亞單位在乙型肝炎病毒復(fù)制及HBV X蛋白相關(guān)HCC的發(fā)生過程中激活，而且Plk1和Suz12/Znf198在肝臟腫瘤中有相同的作用。在HBV復(fù)制的肝癌細(xì)胞中Suz12抑癌基因和細(xì)胞增殖基因被誘導(dǎo)，它們在X/c?myc雙基因的HCC進(jìn)展期間表現(xiàn)出獨(dú)特的表達(dá)譜。具體來說，在X/c?myc雙基因的肝臟增生和癌前階段，CCND2、EpCAM和IGFII的表達(dá)升高，而在X/c?myc雙基因的小鼠和WHV感染的土撥鼠其BAMBI和PLK1過度表達(dá)［16］。利用逆轉(zhuǎn)錄PCR的結(jié)果證實(shí)了土撥鼠基因（SAT、IDH3B和SCD）具有差異性表達(dá)。差異表達(dá)的基因參與了轉(zhuǎn)錄、剪接、翻譯、細(xì)胞周期代謝、蛋白質(zhì)折疊、降解、細(xì)胞凋亡、免疫反應(yīng)和金屬結(jié)合等過程［17］。

土撥鼠肝癌模型與人肝癌細(xì)胞中肝蛋白的糖基化模式相似，利用二維凝膠蛋白質(zhì)組學(xué)耦合的方法已經(jīng)證實(shí)了一種像高爾基體蛋白73的糖蛋白，在土撥鼠肝癌模型中升高和超巖藻糖基化，這可以成為識別癌癥的標(biāo)志［18］。載脂蛋白A?I（apo?lipoprotein A?I，ApoA?I）是血清中高密度脂蛋白顆粒的主要蛋白成分，血漿中ApoA?I亞型的改變是土撥鼠、人類慢性肝炎和HCC的標(biāo)志［19］。

在觀察雄性土撥鼠和雌性土撥鼠時發(fā)現(xiàn)，雄性土撥鼠中病毒具有更高水平復(fù)制活性，表明雄激素可以調(diào)節(jié)WHV的復(fù)制，這一現(xiàn)象與人HBV感染相一致［20］。因此，在相同條件下，性別或許也是HCC形成的重要因素。肝癌細(xì)胞中酶活性的改變也是臨床觀察的一個指標(biāo)。目前新開發(fā)了一種利用定量分光光度法對乙酰輔酶A合成酶含量的測定，通過觀察比較土撥鼠肝癌組織與周邊鄰近區(qū)域的組織發(fā)現(xiàn)，癌組織中乙酰輔酶A合成酶活性顯著增加，并且肝癌組織的亞細(xì)胞組分中的乙酰輔酶A合成酶活性也明顯高于周圍組織［21］。

基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）在人HCC的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮核心作用，主要表現(xiàn)為肝癌組織中的MMPs表達(dá)增加。同樣，這一現(xiàn)象也在WHV感染土撥鼠的肝組織中觀察到，MMP?1、MMP?2、MMP?7、金屬基質(zhì)蛋白酶組織抑制劑?1和中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白水平升高。MMP?9在HCC的表達(dá)明顯高于沒有感染W(wǎng)HV動物的肝臟，而土撥鼠MMPs的活性可被金屬蛋白酶抑制劑抑制，這是一種常見的哺乳動物MMPs抑制劑。這些結(jié)果表明MMP抑制劑可以作為一個潛在的HCC的治療策略［22］。

許多基因在人類HCC有差異表達(dá)。進(jìn)一步探討在土撥鼠肝癌組織中部分差異表達(dá)基因及相關(guān)蛋白的表達(dá)能進(jìn)一步研究人類乙肝病毒性肝癌的發(fā)病機(jī)制和治療策略。

4.3 土撥鼠肝炎病毒動物模型在人肝細(xì)胞癌的診斷和治療上的應(yīng)用

4.3.1 在新型影像學(xué)技術(shù)診斷中的作用

慢性HBV感染與大部分的HCC密切相關(guān)。但是診斷為HCC時往往已在疾病的晚期，此時可實(shí)施的治療方案很有限而且預(yù)后差。因此我們需要一種易檢測、特異性高的方法，有助于HBV誘發(fā)HCC的早期檢測和治療。腫瘤的生長用磁共振成像（magnetic resonance imaging，MRI）檢測，肝臟的損傷程度用肝功酶譜檢測。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的升高表示隨著腫瘤的生長導(dǎo)致肝功能損傷加劇。在MRI中，正常的肝臟界限清晰，因大量血管聚集，HCC區(qū)域表現(xiàn)為高信號。在腫瘤結(jié)節(jié)區(qū)，肝臟形狀顯示不規(guī)則，無限增殖的細(xì)胞會有混雜信號。此外，肝細(xì)胞癌土撥鼠模型2?脫氧?2?［F?18］氟?D葡萄糖正電子發(fā)射斷層掃描成像與組織學(xué)也有一定的相關(guān)性，利用影像學(xué)技術(shù)，HCC的進(jìn)展可用MRI進(jìn)行可視化分析，同時對照血清檢測結(jié)果，兩者結(jié)合可以增強(qiáng)對HCC進(jìn)展的了解，做到早發(fā)現(xiàn)，早治療［23?24］。

4.3.2 土撥鼠肝癌藥物治療

對于HBV感染的治療，主要是針對慢性HBV感染者肝內(nèi)及血清中病毒DNA復(fù)制的抑制而減少病毒載量的手段，結(jié)合適當(dāng)?shù)拿庖哒{(diào)節(jié)藥物達(dá)到聯(lián)合治療的目的。盡可能減少cccDNA的穩(wěn)定性，直到可以減緩或消除細(xì)胞中病毒的復(fù)制。因此，使用抗病毒藥物治療是目前常規(guī)的方法，常見的如接受克來夫定、恩替卡韋治療時，它對土撥鼠具有特別強(qiáng)有力及持續(xù)有效的抗病毒活性，其弊端是常常導(dǎo)致耐藥突變株的出現(xiàn)［25］。因此，現(xiàn)在多聯(lián)合藥物和疫苗共同治療，其益處如下：（1）降低病毒血癥、抗原血癥以及降低HBV DNA和RNA水平；（2）對慢性肝炎進(jìn)展的抑制作用；（3）降低慢性肝損傷的頻率和延遲HCC的發(fā)病，而這些手段的試驗(yàn)往往依賴于土撥鼠肝炎病毒動物模型的幫助［26］。

4.3.3 土撥鼠肝癌免疫治療

免疫療法是通過免疫調(diào)節(jié)慢性乙肝病毒攜帶者的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，從而提高治療的準(zhǔn)確性，減少了治療的副作用。Huang等人［27］在土撥鼠肝癌模型上采用含有兩個細(xì)胞因子和血管生成抑制因子混合類型的策略對HCC進(jìn)行治療，與抗血管生成或細(xì)胞因子基因的單一療法相比，前者在大塊腫瘤的治療上有更好的效果。在浸潤型腫瘤中，混合免疫治療顯著提高了CD3（+）T細(xì)胞的水平，并能顯著減少腫瘤血管的發(fā)生。此外，它誘導(dǎo)高水平的自然殺傷細(xì)胞的生成和細(xì)胞凋亡的發(fā)生，減少在腫瘤區(qū)域的免疫抑制效應(yīng)物水平。因此，抗血管生成治療可能提供的優(yōu)點(diǎn)是減少大塊腫瘤的免疫耐受，使它們更容易接受到免疫效應(yīng)。這種聯(lián)合治療將來有可能有效地治療晚期肝癌患者。

干擾素是一種多效性細(xì)胞因子，能誘導(dǎo)干擾素刺激基因的表達(dá)，具有直接的抗病毒和免疫調(diào)節(jié)性能［28，29］。Semliki森林病毒（semliki forest vi?rus，SFV）可誘導(dǎo)表達(dá)白細(xì)胞介素?12（interleukin?12，IL?12），可以對WHV和HCC產(chǎn)生免疫反應(yīng)。瘤內(nèi)注射相關(guān)的SFV載體可以表達(dá)熒光素酶和IL?12，導(dǎo)致肝癌細(xì)胞內(nèi)和血清中分泌一種高活性因子，促使表達(dá)相關(guān)的γ?干擾素、α?腫瘤壞死因子和外周血單個核細(xì)胞的產(chǎn)生，從而引起癌細(xì)胞的壞死，這兩種物質(zhì)分別表明SFV載體對土撥鼠腫瘤細(xì)胞有效［30］。但是，慢性WHV感染的肝臟中，IL?12免疫刺激誘導(dǎo)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)，卻抵消了治療的抗病毒效果，這可能是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在慢性病毒性肝炎相關(guān)的免疫應(yīng)答中起沖突作用［31］。但是，Nowrouzi等人［32］利用胎鼠模型也揭示了逆轉(zhuǎn)錄病毒基因治療載體的潛在遺傳毒性。因此，近年來，直接利用Toll樣受體激動劑可以誘導(dǎo)Ⅰ型干擾素信號通路活化，發(fā)揮抗病毒作用，并且可避免全身不良的免疫反應(yīng)［33］。由此來看，土撥鼠肝癌模型在HCC的聯(lián)合治療包括免疫治療給人們提供了一個可靠有效的模型。

5 總結(jié)與展望

用WHV感染土撥鼠是目前最具代表性的制備慢性HBV感染的動物模型。其為人們闡明了HBV的復(fù)制方式、生命周期、cDNA信息導(dǎo)向機(jī)制、宿主的免疫反應(yīng)與致癌機(jī)制等［34］。病毒性誘發(fā)型肝癌的土撥鼠模型已被有效地用于開發(fā)抗病毒藥物、免疫調(diào)節(jié)治療方法以及超聲與磁共振成像增強(qiáng)肝腫瘤的新顯像劑的研發(fā)。隨著在土撥鼠動物模型上對WHV致病機(jī)制不斷深入的研究以及新治療方法不斷探索所獲得的經(jīng)驗(yàn)，我們相信，在不久的將來，人類將顯著提高對慢性HBV感染及其后遺癥根除性治療的成功機(jī)率。

［1］Kosinska AD，Liu J，Lu M，et al.Therapeutic vacci?nation and immunomodulation in the treatment of chronic hepatitis B：preclinical studies in the wood?chuck［J］.Med Microbiol Immunol，2015，204（1）：103?114.

［2］Dandri M，Petersen J.Chimeric mouse model of hepa?titis B virus infection［J］.J Hepatol，2012，56（2）：493?495.

［3］Kukreja AA，Wang JC，Pierson E，et al.Structurally similar woodchuck and human hepadnavirus core pro?teins have distinctly different temperature dependences of assembly［J］.J Virol，2014，88（24）：14105?14115.

［4］Summers J，Smolec JM，Snyder R.A virus similar to human hepatitis B virus associated with hepatitis and hepatoma in woodchucks［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1978，75（9）：4533?4537.

［5］Pan D，Lin Y，Wu W，et al.Persistence of the recom?binant genomes of woodchuck hepatitis virus in the mouse model［J］.Plos One，2015，10（5）：e0125658.

［6］Roggendorf M，Yang D，Lu M.The woodchuck：a model for therapeutic vaccination against hepaDNAvi?ral infection［J］.Pathol Biol（Paris），2010，58（4）：308?314.

［7］Buendia MA，Neuveut C.Hepatocellular carcinoma［J］.Cold Spring Harb Perspect Med，2015，5（2）：a021444.

［8］Freitas N，Lukash T，Dudek M，et al.Capacity of a natural strain of woodchuck hepatitis virus，WHVNY，to induce acute infection in naive adult woodchucks［J］.Virus Res，2015，2（205）：12?21.

［9］王亮，肖沖，沈邵偉，等.一月齡土撥鼠肝炎病毒感染模型的建立［J］.中國病毒病雜志，2014，4（3）：198?202.

［10］Mulrooney?Cousins PM，Michalak TI.New aspects of natural history and pathogenicity ofhepaDNAviral in?fection and hepatocyte function revealed by the wood?chuck model of hepatitis B［M］.Liver Biopsy in Medi?cine，2011：355?378.

［11］Xu C，Yamamoto T，Zhou T，et al.The liver of woodchucks chronically infected with the woodchuck hepatitis virus contains foci of virus core antigen?nega?tive hepatocytes with both altered and normal morphol?ogy［J］.Virology，2007，359（2）：283?294.

［12］Mulrooney?Cousins PM，Michalak TI.Asymptomatic hepaDNAviral persistence and its consequences in the woodchuck model of occult hepatitis B virus infection［J］.J Clin Transl Hepatol，2015，3（3）：211?219.

［13］Mulrooney?Cousins PM，Chauhan R，Churchill ND，et al.Primary seronegative but molecularly evident he?paDNAviral infection engages liver and induces hepato?carcinoma in the woodchuck model of hepatitis B［J］. Plos Pathogens，2014，10（8）：e1004332.

［14］Mason WS，Jilbert AR，Summers J.Clonal expansion of hepatocytes during chronic woodchuck hepatitis vi?rus infection［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2005，102（4）：1139?1144.

［15］Rodrigues L，F(xiàn)reitas N，Kallakury BV，et al.Superin?fection with woodchuck hepatitis virus strain WHVNY of livers chronically infected with strain WHV7［J］.JVirol，2015，89（1）：384?405.

［16］Studach LL，Menne S，Cairo S，et al.Subset of Suz12/PRC2 target genes is activated during hepatitis B virus replication and liver carcinogenesis associated with HBV X protein［J］.Hepatology，2012，56（4）：1240?1251.

［17］Wang F，Anderson PW，Salem N，et al.Gene expres?sion studies of hepatitis virus?induced woodchuck hepa?tocellular carcinoma in correlation with human results［J］.Int J Oncol，2007，30（1）：33?44.

［18］Block TM，Comunale MA，Lowman M，et al.Use of targeted glycoproteomics to identify serum glycopro?teins that correlate with liver cancer in woodchucks and humans［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2005，102（3）：779?784.

［19］Fioravanti J，Gomar C，Medina?Echeverz J，et al. Characterization of woodchuck apolipoprotein A?I：a new tool for drug delivery and identification of altered isoforms in the woodchuck chronic hepatitis model［J］. J Med Virol，2011，83（7）：1221?1229.

［20］Meng Z，Ma Z，Zhang E，et al.Novel woodchuck hepatitis virus（WHV）transgene mouse models show sex?dependent WHV replicative activity and develop?ment of spontaneous immune responses to WHV pro?teins［J］.J Virol，2014，88（3）：1573?1581.

［21］Kuang Y，Salem N，Wang F，et al.A colorimetric as?say method to measure acetyl?CoA synthetase activity：application to woodchuck model of hepatitis virus?in?duced hepatocellular carcinoma［J］.J Biochem Bio?phys Methods，2007，70（4）：649?655.

［22］Ochoa?Callejero L，Toshkov I，Menne S，et al.Ex?pression of matrix metalloproteinases and their inhibi?tors in the woodchuck model of hepatocellular carcino?ma［J］.J Med Viroll，2013，85（7）：1127?1138.

［23］Salem N，MacLennan GT，Kuang Y，et al.Quantita?tive evaluation of 2?deoxy?2［F?18］fluoro?D?glucose?positron emission tomography imaging on the wood?chuck model of hepatocellular carcinoma with histolog?ical correlation［J］.Mol Imaging Biol，2007，9（3）：135?143.

［24］McKenzie EJ，Jackson M，Turner A，et al.Chronic care and monitoring of woodchucks（Marmota monax）during repeated magnetic resonance imaging of the liv?er［J］.J Am Assoc Lab Anim Sci，2006，45（2）：26? 30.

［25］Tatti KM，Korba BE，Stang HL，et al.Mutations in the conserved woodchuck hepatitis virus polymerase FLLA and YMDD regions conferring resistance to la?mivudine［J］.Antiviral Res，2002，55（1）：141?150.

［26］Kosinska AD，Zhang E，Johrden L，et al.Combina?tion of DNA prime?adenovirus boost immunization with entecavir elicits sustained control of chronic hepa?titis B in the woodchuck model［J］.Plos Pathog，2013，9（6）：e1003391.

［27］Huang KW，Wu HL，Lin HL，et al.Combining anti?angiogenic therapy with immunotherapy exertsbetter therapeutical effects on large tumors in a woodchuck hepatoma model［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2010，107（33）：14769?14774.

［28］Schoggins JW，Rice CM.Interferon?stimulated genes and their antiviral effector functions［J］.Curr Opin Vi?rol，2011，1（6）：519?525.

［29］Swiecki M，Colonna M.Type I interferons：diversity of sources，production pathways and effects on im?mune responses［J］.Curr Opin Virol，2011，1（6）：463?475.

［30］Rodriguez?Madoz JR，Liu KH，Quetglas JI，et al. Semliki forest virus expressing interleukin?12 induces antiviral and antitumoral responses in woodchucks with chronic viral hepatitis and hepatocellular carcinoma［J］.J Virol，2009，83（23）：12266?12278.

［31］Otano I，Suarez L，Dotor J，et al.Modulation of regu?latory T?cell activity in combination with interleukin?12 increases hepatic tolerogenicity in woodchucks with chronic hepatitis B［J］.Hepatology，2012，56（2）：474?483.

［32］Nowrouzi A，Cheung WT，Li T，et al.The fetal mouse is a sensitive genotoxicity model that exposes lentiviral?associated mutagenesis resulting in liver on?cogenesis［J］.Mol Ther，2013，21（2）：324?37.

［33］孟忠吉，張永紅，李文兵，等.Toll樣受體激動劑抑制土撥鼠肝炎病毒作用研究［J］.肝臟，2013，18（6）：378?381.

［34］D′Ugo E，Argentini C，Giuseppetti R，et al.The woodchuck hepatitis B virus infection model for the evaluation of HBV therapies and vaccine therapies［J］. Expert Opin Drug Discov，2010，5（12）：1153?1162.

Application of woodchuck hepatitis virus animal model in the study of hepatocellular carcinoma

ZHU Songshan1,YIN Jun2,HUANG Huayi1,3★
(1.Department of Laboratory Medicine,the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning,Guangxi,China,530021;2.Department of Laboratory Medicine,the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanning,Guangxi,China,530023;3.Department of Surgical Oncology,Roswell Park Cancer Institute,Buffalo,New York,USA,14263)

Hepatitis B virus(HBV)is a widespread human pathogen that can cause hepatitis, cirrhosis,and hepatocellular carcinoma(HCC).HBV infection has been a serious threat to human health, especially in China and Southeast Asian countries.The pathogenesis,diagnosis and treatment of chronic hepatitis B and HBV caused HCC are still very challenging.Currently,understanding of the pathogenesis and diagnosis of viral hepatitis,liver cirrhosis post hepatitis,and HCC are largely dependent on the animal model system,and the choice of a well?established animal model is the basis in accomplishment of the study.The features of woodchuck body weight,the size of its liver,the pathogenesis of the hepatitis B virus it carries,and the progress of the disease course are very similar to those of human hepatitis B virus,thus,the woodchuck is a very useful animal model in hepatitis B virus infection and in the study of the development,pathogenesis, diagnosis,and treatment of hepatitis B and HCC.Therefore,the woodchuck hepatitis B virus animal model enables us to have a better understanding of the complex relationship between HBV infection and HCC.It will also promote a better prevention and treatment strategy for hepatitis B infection.In this paper,recent reports in the application of the woodchuck animal model in the field of hepatitis B and HCC will be summarized.

Woodchuck;Hepatitis B virus;Animal model;Hepatocellular carcinoma

1.廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西，南寧530021 2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣西，南寧530023 3.美國羅斯威爾帕克癌癥研究所腫瘤外科，美國，紐約，布法羅14263

★通訊作者：黃華藝，E?mail：Huayi.Huang@Roswellpark.org