張硯亮 （山東省安丘市畜牧局 262100）

簡述雞大腸桿菌病的診治

張硯亮 （山東省安丘市畜牧局 262100）

為減少雞大腸桿菌病對禽類養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成危害，通過對雞感染大腸桿菌發(fā)生的臨床癥狀，剖檢變化的進行分析，并采用藥敏試驗和其他實驗室診斷技術(shù)，對大腸桿菌病進行確診，并根據(jù)其發(fā)病情況及耐藥情況制定相應(yīng)的預(yù)防和治療措施，以達到減輕大腸桿菌病危害的目的。

雞大腸桿菌病，是一種由致病性大腸埃希桿菌引起的一類感染雞的急性或慢性傳染病，是一種多病型的家禽疾病的總稱，大腸桿菌屬于革蘭氏陰性菌，通常在雞群中表現(xiàn)出的癥狀有輸卵管炎，敗血病，卵黃性腹膜炎，肉芽腫等一系列的疾病，且該病易于其他疾病并發(fā)或被其他疾病繼發(fā)，易導(dǎo)致雞群發(fā)生大規(guī)模的死亡，死亡率高達70%～90%，對養(yǎng)殖行業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。該病在各個年齡段的雞群中均有易感性，其中在雛雞階段最容易感染，因此需要在各個時期做好雞群大腸桿菌病的診斷與防治，以減少大腸桿菌病對禽類生養(yǎng)殖行業(yè)造成的損失。

1 疾病的流行特點

該病易感于大部分禽類，一年四季都容易發(fā)生，其中春季和冬季最易感，主要原因是春冬季節(jié)寒冷，雞舍內(nèi)通風(fēng)環(huán)境不良，空氣環(huán)境污濁，糞便清理不及時等原因引起的雞群呼吸道疾病的發(fā)生，使雞群對疾病的抵抗能力下降，易繼發(fā)引起禽流感或新城疫，同時并發(fā)大腸桿菌病。同時該病通常會通過垂直傳播的方式，由上一代的發(fā)病個體傳播到下一代，在種蛋運輸過程中污染也容易引起大腸桿菌病，加之，近年來養(yǎng)殖戶以抗生素作為防控大腸桿菌病的唯一措施，導(dǎo)致大腸桿菌對部分藥物的耐藥性不斷提高，使部分免疫程序失去作用。

2 臨床癥狀

大腸桿菌病一般分為急性大腸桿菌病和亞急性或慢性大腸桿菌病，急性大腸桿菌病一般已發(fā)生在雛雞階段，主要表現(xiàn)出來的癥狀為急性敗血癥，發(fā)病時表現(xiàn)出的癥狀為，體溫異常，在較短的時間內(nèi)升至41～43 ℃，雞群精神狀態(tài)較差，精神萎靡，食欲減退乃至廢絕，腹瀉，糞便呈黃白色，如不及時治療，將在3-5天內(nèi)死亡，有部分雞不表現(xiàn)上述癥狀，突然死亡，但死亡數(shù)量相對較少。亞急性或慢性雞大腸桿菌病一般在150日齡左右的成年雞中發(fā)生，一般表現(xiàn)出的癥狀為，雞群精神沉郁，對外界刺激反應(yīng)弱，行走不穩(wěn)，羽毛蓬亂無光澤，肛門污穢，食欲廢絕，口渴，但飲水量減少，體形消瘦，生長發(fā)育遲緩，下痢等，蛋雞還表現(xiàn)為產(chǎn)蛋量下降，產(chǎn)蛋質(zhì)量差，易出現(xiàn)軟殼蛋，沙皮蛋。

3 剖檢癥狀

通過剖檢通?？砂l(fā)現(xiàn)以下癥狀，剖開腹腔后，有強烈的惡臭，心包有淡黃色的液體淤積，部分雞出現(xiàn)心包膜與心外膜發(fā)生粘連；肝臟淤血，呈紫黑色，表面出現(xiàn)黃色纖維性滲出物；肺部淤血，腫大；膽囊、脾腫大，輸卵管擴張；卵泡軟化、壞死，容易產(chǎn)生腹膜炎；腸道黏膜充血，出血，水腫[1]。

4 實驗室診斷

通?？梢栽趯嶒炇覂?nèi)采用細菌分離培養(yǎng)和革蘭氏染色鏡檢以及細菌學(xué)鑒定的方法來進行實驗室診斷。

4.1 細菌分離培養(yǎng) 將采集樣品的病變組織分別接種于不同培養(yǎng)基中(包括LB肉湯，LB瓊脂培養(yǎng)基，SS瓊脂培養(yǎng)基，伊紅-美藍培養(yǎng)基，麥康凱培養(yǎng)基)，放置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20～24h，通過觀察細菌生長情況來確定是否是大腸桿菌。大腸桿菌在LB肉湯中生長情況良好，均勻生長，液體渾濁；在LB瓊脂培養(yǎng)基上形成圓形、表面光滑、半透明的灰白色菌落；在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成圓形、大小均一、光滑的粉紅色菌落；在伊紅美藍培養(yǎng)基上呈現(xiàn)深紫黑色、光滑、濕潤、帶有金屬光澤的圓形菌落[2]。

4.2 革蘭氏染色鏡檢 直接將不同部位的病料涂片，然后進行革蘭氏染色，觀察顯微鏡下是否會出現(xiàn)，兩端鈍圓的桿菌，無芽孢和莢膜形成，能運動，周身鞭毛。

4.3 細菌學(xué)鑒定 綜合多種試驗方法對細菌做出的詳細而準(zhǔn)確的鑒定方法，首先對菌株進行分離純化，再進行染色、鏡檢，觀察菌落的培養(yǎng)性狀，進行菌落熒光性檢查以及生化鑒定，對所分離純化的細菌進行生化鑒定。大腸桿菌能分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、不分解蔗糖，不產(chǎn)生硫化氫；利用枸櫞酸鹽陰性，不液化明膠，甲基紅試驗為陽性，V-P試驗為陰性[3]。

5 藥敏試驗

采用美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會推薦的微量稀釋法，分離純化大腸桿菌進行以下幾種常規(guī)藥物敏感試驗，測定其抑菌圈直徑[4]。例如硫酸阿米卡星，硫酸鏈霉素，氟苯尼考，鹽酸沙拉沙星，硫酸慶大霉素，硫酸粘霉素，鹽酸恩諾沙星，氨芐西林鈉，強力霉素，青霉素，復(fù)方甲砜霉素，多粘菌素等藥物進行藥敏試驗，步驟：（1）菌懸液的制備：將分離的菌株三區(qū)劃線接種于腦心浸液瓊脂上，37°恒溫培養(yǎng)過夜后，使用接種環(huán)或者高壓過的牙簽挑取單個菌落接種于2ml的MH肉湯中，在37°搖床振蕩培養(yǎng)5～6h后。用空白肉湯稀釋培養(yǎng)菌液，使其比濁0.5麥?zhǔn)媳泉殬?biāo)準(zhǔn)，此時菌液濃度約1～2×108 CFU/ml，再將其稀釋1000倍，作為測試菌液，終濃度為1～2×105 CFU/ml。（2）用肉湯將各種測試抗菌藥物旳儲備液作倍比稀釋成個梯度，分別為256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5ug/ml。用微量加樣器將稀釋好的藥物從低濃度到高濃度依次加入96孔細菌培養(yǎng)板1～10排的孔內(nèi)，每孔100ul。然后將測試菌液從低濃度到高濃度依次加入孔1～10內(nèi)，每孔100ul。第11孔加測試菌液作為陽性對照(有菌無藥)；第12孔加200ul空白肉湯作為陰性對照(無菌無藥)。整個孔細菌培養(yǎng)板加好藥液、菌液并合上蓋后，在桌面螺旋推動以充分混勻孔內(nèi)液體，放37℃培養(yǎng)18～24h后置黑色桌面觀察結(jié)果。細菌生長時孔內(nèi)呈彌散狀混池或孔底有圓形或絲網(wǎng)狀沉淀。無細菌生長孔內(nèi)所含最低抗菌藥物濃度即為測試菌株對該藥物的MIC值[5]。

6 預(yù)防和治療

6.1 預(yù)防 為提前減少疾病的發(fā)生，通常提前采取常規(guī)的預(yù)防措施。（1）做好廠區(qū)選址并設(shè)立隔離區(qū)，廠區(qū)應(yīng)當(dāng)在地勢高的下風(fēng)口、水源良好，充裕、排水方便，并遠離其他禽類養(yǎng)殖場，屠宰場及禽類產(chǎn)品加工工廠。（2）保持雞舍內(nèi)環(huán)境良好，增加通風(fēng)，保證空氣質(zhì)量，減少雞舍內(nèi)有害氣體的濃度和粉塵，及時清理雞糞，定期對雞舍和周邊環(huán)境進行消毒。（3）加強飼養(yǎng)員對雞舍飼養(yǎng)管理的意識，及時淘汰和處理病、殘、弱、死雞，保證雞舍內(nèi)的飼料、墊料、飲水干凈，無污染，同時可在水中加入氯制劑，保證水質(zhì)清潔，也可起到防治大腸桿菌病的作用。（4）做好日常的病毒病如新城疫、禽流感、傳染性法氏囊病、傳染性支氣管炎、馬立克氏病等的免疫工作，制定科學(xué)的免疫程序，合理免疫，同時也要控制好支原體、傳染性鼻炎、等細菌病的發(fā)生和傳播，定期進行免疫監(jiān)測，保持良好的免疫水平[6]。（5）種蛋雞場和孵化場同時要加強對種蛋、孵化器、運輸車輛的消毒，在運送過程中注意做好種蛋的防護和清潔，保證周圍環(huán)境衛(wèi)生。同時對死亡的雛雞，廢蛋進行無害化處理，深埋并在周圍撒石灰消毒。

6.2 治療 當(dāng)疾病發(fā)生時，要考慮使用藥物治療的方式來對發(fā)病群體進行治療。通常來說能夠通過大腸桿菌病的藥物很多，例如慶大霉素，氧氟沙星，氟苯尼考，土霉素，復(fù)方新斯的明，強力霉素等，但由于近年來抗生素的濫用和過度使用，導(dǎo)致大腸桿菌對大量的抗生素產(chǎn)生耐藥性，為了避免因細菌產(chǎn)生耐藥性而導(dǎo)致的錯誤用藥，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗得出的結(jié)果，得出該廠治療大腸桿菌的藥物的耐藥性和敏感性的詳細報告，并根據(jù)報告內(nèi)容，對已經(jīng)產(chǎn)生耐藥的藥物停止使用，以免用到無效藥物。在實際用藥的過程中，應(yīng)盡量選擇敏感性較高的藥物，但不能連續(xù)使用同一種藥物，應(yīng)該采取交替用藥或輪換用藥的方式。在用藥時要保證藥物的劑量充足，在發(fā)病后應(yīng)進行緊急治療。

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[2] 于學(xué)雙. 一起雛雞大腸桿菌病的原因分析[J]. 農(nóng)村實用科技信息, 2012(7): 23.

[3] 何國新. 初產(chǎn)母雞癱瘓癥的實驗室檢驗與討論[J]. 養(yǎng)殖技術(shù)顧問, 2013(5): 176.

[4] 李松興, 王文楓, 史明基. 蛋雞大腸桿菌病的診斷與防治[J]. 中國畜牧獸醫(yī)文摘, 2011(2): 111-112.

[5] 何濤. 動物源大腸桿菌對乙酰甲喹和氟苯尼考的敏感性折點及分子耐藥機制研究[D]. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué), 2015.

[6] 由佳, 李明舉, 任成森. 肉雞大腸桿菌病的防治措施[J]. 中國動物保健, 2013(9): 29-30.

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