宋繼榮，肖 敏，張丹鳳

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科,黑龍江 佳木斯 154003)

卵巢漿液性囊腺癌中PDCD4的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系①

宋繼榮，肖 敏，張丹鳳

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科,黑龍江 佳木斯 154003)

目的:探討卵巢漿液性囊腺癌中程序性細(xì)胞死亡因子4(PDCD4)的表達(dá)，并評(píng)估其和預(yù)后的關(guān)系。方法:佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院的婦產(chǎn)科收集2008-01～2012-08接受手術(shù)治療，且隨訪資料完整的50例卵巢漿液性囊腺癌患者的存檔蠟塊，10例癌旁正常組織標(biāo)本。采用免疫組化方法檢測(cè)PDCD4在卵巢癌中的表達(dá)，并分析它與預(yù)后的關(guān)系。用SPSS17.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，對(duì)于患者的總生存情況，采用Kaplan-Meier法進(jìn)行分析；對(duì)于影響卵巢癌生存預(yù)后的因素，運(yùn)用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析。結(jié)果:①50例卵巢癌患者中PDCD4總體的陽性表達(dá)率為42%(21/50)，缺失表達(dá)率為58% (29 /50),PDCD4在癌旁組織中總的陽性率80%(8/10)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.963，P=0.000)。②PDCD4的表達(dá)與卵巢癌組織分化程度(χ2=5.466，P=0.019)、臨床分期(χ2=7.550，P=0.006)均有關(guān)，而與年齡無關(guān)(χ2=3.120，P=0.077)。③50例卵巢癌中PDCD4陽性表達(dá)者其總體生存情況明顯優(yōu)于PDCD4表達(dá)陰性者(χ2=22.136，P=0.000)。④在多因素的分析中，PDCD4被證明是影響卵巢癌總生存的獨(dú)立因素。結(jié)論:在卵巢漿液性囊腺癌中，PDCD4是低表達(dá)；在總生存情況中，PDCD4 蛋白陽性的表達(dá)者優(yōu)于PDCD4 蛋白陰性者；PDCD4可成為評(píng)估卵巢漿液性囊腺癌預(yù)后的獨(dú)立因素。

卵巢漿液性囊腺癌；程序性細(xì)胞死亡因子4；預(yù)后

卵巢癌是女性常見的生殖道惡性腫瘤之一，而85%～90%的卵巢惡性腫瘤為上皮性癌，在上皮性癌中75%為漿液性囊腺癌。在女性生殖系統(tǒng)腫瘤中，卵巢癌的發(fā)病率雖為第三位，但它的死亡率卻居第一位[1]，嚴(yán)重威脅著女性的健康。現(xiàn)如今，臨床中對(duì)于其治療仍然采用手術(shù)并聯(lián)合化療，但因卵巢癌出現(xiàn)耐藥性，術(shù)后5年仍是僅有較低的存活率。關(guān)于晚期卵巢癌患者，近年有報(bào)道表明其5年存活率僅為25%～30%[2]。因此，尋求新的方法提高卵巢癌患者的診斷治療及預(yù)后成為眾多學(xué)者的研究熱點(diǎn)，而隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對(duì)于腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展和凋亡過程，人們有了更深一步的認(rèn)識(shí)，特別是抑癌基因的發(fā)現(xiàn)和進(jìn)一步的研究，為治療腫瘤提供了新的思路，成為新的治療靶點(diǎn)。

1995年于小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了PDCD4，它是與細(xì)胞凋亡有關(guān)的因子，而其抑制腫瘤生長(zhǎng)表現(xiàn)為：抑制蛋白轉(zhuǎn)錄和翻譯過程[3]。近幾年來，其在抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)轉(zhuǎn)化方面引起了人們?cè)絹碓蕉嗟年P(guān)注，大量研究表明，PDCD4在腫瘤組織中的低表達(dá)狀態(tài)對(duì)腫瘤的病理分級(jí)及預(yù)后判斷有重要意義[4,5]。然而，在卵巢癌方面，PDCD4的研究相對(duì)較少，目前，關(guān)于PDCD4與卵巢癌預(yù)后的關(guān)系，國(guó)內(nèi)尚未有研究。而本文則利用免疫組化檢測(cè)PDCD4在卵巢癌中的表達(dá)，并分析其與預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 對(duì)象及標(biāo)本

搜集2008-01～2012-08就診于本院的50例卵巢癌患者，且其手術(shù)標(biāo)本均已證實(shí)為卵巢漿液性囊腺癌的存檔蠟塊，同時(shí)選用10例癌旁組織作為對(duì)照，年齡36～70歲。患者術(shù)前均未接受放化療，病理得到病理科醫(yī)師證實(shí)。根據(jù)FIGO制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行手術(shù)病理分期，在卵巢漿液性囊腺癌患者標(biāo)本中，Ⅰ期12例，Ⅱ期10例，Ⅲ期18例，Ⅳ期10例。其中11例為高中分化，39例為低分化。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)用品

器材：超凈工作臺(tái)，恒溫箱，顯微鏡等。試劑：兔抗人PDCD4多克隆抗體(購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司)，顯色劑(DAB液)及抗體稀釋液等。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)方法

操作步驟：通過病理號(hào)查找病理科存檔的病理蠟塊，蠟塊常規(guī)脫蠟制成4μm厚切片，經(jīng)過水化、封閉、滴加一抗(兔抗人PDCD4)，然后滴加二抗，通過顯色劑顯色及復(fù)染，最終脫水、封片、鏡下采圖并計(jì)數(shù)。

1.2.2 結(jié)果判定

PDCD4的陽性表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中均有。在高倍視野下進(jìn)行計(jì)數(shù)，評(píng)分判定：(l)陽性率：陽性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分率<5%為0分，5%～<25%為1分，25%～<50%為2分，50%～<75%為3分，75%～100%為4分。(2)染色強(qiáng)度以淺黃色計(jì)1分,黃色計(jì)2分，深黃色計(jì)3分。最終陽性率與染色強(qiáng)度的積分乘積為表達(dá)強(qiáng)度，0分為陰性(-)，1～3分為弱陽性(+),4～8分為中度陽性(),9～12分為強(qiáng)陽性()。

1.3 隨訪

用電話方式進(jìn)行隨訪，2015年08月為最終截止日期。自進(jìn)行手術(shù)日起直至出現(xiàn)與卵巢癌相關(guān)的死亡的時(shí)間即為總生存時(shí)間。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行率的比較，而對(duì)于等級(jí)資料，則采用Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)。關(guān)于患者的總生存情況，用Kaplan-Meier法進(jìn)行分析，而生存曲線間的差異，則用Log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行比較，對(duì)于影響卵巢癌生存預(yù)后的因素，運(yùn)用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1PDCD4的表達(dá)情況

在卵巢癌細(xì)胞核和胞質(zhì)中，PDCD4都有陽性表達(dá)，在卵巢癌中為42%，癌旁中為80%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.963，P=0.000)見表1。

表1 卵巢漿液性囊腺癌及癌旁中PDCD4的表達(dá)情況

分組PDCD4-+總計(jì)卵巢癌組織29137150癌旁正常組織213410總計(jì)311410560

2.2PDCD4與卵巢漿液性囊腺癌臨床病理的關(guān)系

根據(jù)免疫組化結(jié)果，以及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，PDCD4表達(dá)的高低和組織分化程度(P=0.019)、臨床分期(P=0.006)有關(guān)，P<0.05。而與年齡無關(guān)(P=0.077)見表2。

表2PDCD4與卵漿液性囊腺癌臨床病理之間的關(guān)系

臨床病理特征nPDCD4+-χ2值P值年齡(歲)≤55261412>55247173．1200．077分化程度高-中1183低3913265．4660．019臨床分期早(Ⅰ～Ⅱ)22148晚(Ⅱ～Ⅲ)287217．5500．006

2.3PDCD4表達(dá)與卵巢癌預(yù)后的關(guān)系

50例乳卵巢癌患者中PDCD4 陽性表達(dá)者其總生存率明顯優(yōu)于PDCD4 陰性表達(dá)者(χ2=22.136，P=0.000)，見圖1。

圖1 PDCD4表達(dá)與總生存情況的關(guān)系

2.4 卵巢癌患者總體生存情況相關(guān)的多因素分析

在影響卵巢癌總生存情況中，PDCD4可作為獨(dú)立因素(P=0.000),見表3。

表3 影響卵巢癌患者總體生存情況的多因素分析

因素β值標(biāo)準(zhǔn)誤WaldX2自由度P值HR95%CI年齡-0．5590．4321．67610．1950．5720．245-1．333分期0．4900．4351．26810．2601．6320．696-3．829分化-0．4490．7680．34210．5590．6380．142-2．876PDCD4-3．4841．07210．55610．0010．0310．004-0．251

3 討論

卵巢癌具有發(fā)病隱匿、早期的診斷率低、較容易發(fā)生轉(zhuǎn)移等特點(diǎn)，因此若患者自覺有臨床癥狀來就診時(shí)，多數(shù)已至晚期，如出現(xiàn)廣泛轉(zhuǎn)移，根治性手術(shù)就難以實(shí)施，因此眾多學(xué)者致力于尋找新的方法治療卵巢癌。目前，在原有治療方案的基礎(chǔ)上，新的方法為中晚期的卵巢癌提供了新的選擇，這些方法包括生物、免疫和分子靶向治療等[6]，同時(shí)為改善卵巢癌的預(yù)后提供了可能。隨著對(duì)卵巢癌生物機(jī)理的研究，分子靶向治療進(jìn)入了人們的視線，且很快得到關(guān)注，而了解卵巢癌基因突變，成為分子靶向治療的基礎(chǔ)。伴隨著PI3K/AKT/MTOR信號(hào)通路的研究，并探討其在卵巢癌中的重要性，有眾多研究者已致力于研究此信號(hào)通路的抑制劑,而作為此信號(hào)通路下游的PDCD4因子于發(fā)現(xiàn)后也被用于多個(gè)領(lǐng)域研究。

PDCD4基因是Shibahara等于1995年研究小鼠細(xì)胞程序性死亡過程中發(fā)現(xiàn)的，后來Cmarik等在小鼠的角蛋白細(xì)胞腫瘤轉(zhuǎn)化模型及Jansen等應(yīng)用小鼠體內(nèi)皮膚癌模型研究過程中證實(shí)PDCD4是腫瘤抑制基因[7]。人類PDCD4基因定位于10q24，cDNA全長(zhǎng)約3.5kb，編碼區(qū)約1.4kb。有研究證實(shí)，PDCD4在人類多種組織中均有表達(dá)，且大多數(shù)正常組織細(xì)胞中，PDCD4蛋白主要位于細(xì)胞核中。本研究表明，在正常組織中，PDCD4表達(dá)于細(xì)胞核，而在卵巢癌中，胞核與胞質(zhì)均有表達(dá)，PDCD4此種表達(dá)現(xiàn)象在卵巢癌中意義尚不明確。孫瑋等[8]發(fā)現(xiàn)，在正常組織中，PDCD4位于細(xì)胞核中，若細(xì)胞周圍環(huán)境改變，例如：在營(yíng)養(yǎng)條件不利，或惡性細(xì)胞發(fā)生增殖時(shí)，通過核輸出信號(hào)，它可以轉(zhuǎn)移到胞漿中。故對(duì)PDCD4在卵巢癌細(xì)胞中的這種表達(dá)現(xiàn)象進(jìn)一步研究，可能為明確其在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用提供依據(jù)。

近期有研究發(fā)現(xiàn)，在惡性腫瘤的形成和發(fā)展中，有PDCD4參與，且在很多腫瘤組織中，它均呈低水平或缺失。本實(shí)驗(yàn)表明，在卵巢漿液性囊腺癌中，PDCD4的表達(dá)率明顯低于癌旁組織，且隨著其分期增高、分化程度降低，PDCD4呈低水平，甚至缺失，提示PDCD4的低表達(dá)或缺失在卵巢癌的發(fā)生以及發(fā)展中發(fā)揮重要作用。而許多學(xué)者在結(jié)腸癌、腎癌、胃癌等的研究中也得到相同的結(jié)論。同時(shí)也有研究表明，PDCD4的致病機(jī)制與CpG島甲基化、微小RNA磷酸化和泛素化調(diào)控有關(guān)，然而，在卵巢癌中的致病機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

此后，在乳腺癌、大腸癌、肺癌等多種惡性腫瘤研究中表明，PDCD4的缺失與預(yù)后不良有關(guān)。但在卵巢癌中國(guó)內(nèi)尚未有此類研究，而本研究發(fā)現(xiàn)，PDCD4與卵巢漿液性囊腺癌的預(yù)后有關(guān)，且可能成為評(píng)估其預(yù)后的獨(dú)立因素。韓曉蓉等[9]在關(guān)于乳腺癌預(yù)后的研究中同樣得出，PDCD4可作為獨(dú)立因素。根據(jù)PDCD4的表達(dá)判斷預(yù)后的同時(shí)，還可進(jìn)一步研究增加PDCD4表達(dá)的方法，同時(shí)也為分子靶向治療提供一個(gè)新的靶點(diǎn)。

[1]佟麗波，楊秀蓮，張丹鳳，等.KLK7蛋白及E-鈣黏蛋白在卵巢癌中的表達(dá)及意義[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2010, 33(6):3-5

[2]徐馳，溫義成，劉健.血清CA-125、CA-153、HCG在卵巢癌聯(lián)合檢查中應(yīng)用的價(jià)值[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，2013, 36(3):67

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[8]孫瑋，高飛，張利寧.新的抑癌基因PDCD4最新研究進(jìn)展[J].藥物分析雜志，2007, 27(7):1138-1141

[9]韓曉蓉，吳坤河，郜紅藝.不同分子亞型乳腺癌中程序性細(xì)胞死亡4的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系[J].中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志，2014，21(5):577-582

佳木斯大學(xué)科學(xué)技術(shù)面上項(xiàng)目，編號(hào)：13Z1201553。

宋繼榮(1969～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。

肖敏(1989～)女，黑龍江黑河人，在讀碩士研究生。E-mail：313505660@qq.com。

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