孫紀(jì)偉+齊遵利

摘要：為了解β-1，3-葡聚糖添加到配合飼料中對(duì)江黃顙魚生長性能、血清生化指標(biāo)、機(jī)能、體成分等重要指標(biāo)產(chǎn)生的影響，選用初始體重為（1.75±0.01）g的江黃顙魚720尾，隨機(jī)分為6組，每組4個(gè)重復(fù)。1組投喂基礎(chǔ)飼料，5組投喂分別添加200、400、600、800和1 000 mg/kg β-1，3-葡聚糖的試驗(yàn)飼料，進(jìn)行42 d的養(yǎng)殖試驗(yàn)。由試驗(yàn)結(jié)果顯示，各組江黃顙魚之間的增重率（WGR）、特定生長率（SGR）、飼料系數(shù)（FC）、成活率（SR）、肥滿度（CF）和肝體比（HSI）差異不顯著（P>0.05）。其中，與對(duì)照組相比，添加β-葡聚糖的組實(shí)驗(yàn)前后體重、增重率和特定生長率都有一定程度的增高，在G600達(dá)到最高，飼料系數(shù)與對(duì)照組相比有所下降。飼料中添加β-1，3-葡聚糖對(duì)各組江黃顙魚血清總蛋白、尿素膽固醇、甘油三酯、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性沒有顯著性影響（P>0.05）。其中，與對(duì)照組相比，添加組的血清總蛋白含量有所升高（P>0.05），β-葡聚糖添加組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性有所降低（P>0.05）。結(jié)果表明，飼料中添加一定水平β-1，3-葡聚糖對(duì)江黃顙魚的生長性能和血清生化指標(biāo)均沒有顯著影響。造成該結(jié)果的原因和機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞：江黃顙魚（Pseudobagrus vachelli）；β-葡聚糖；生長性能；血清生化指標(biāo)

葡聚糖分α-葡聚糖和β-葡聚糖兩種。其中β-葡聚糖是目前使用最廣的一種免疫活性多糖。具有促生長、降血脂、降血糖、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化和保肝等多種生物活性和生理功能[1-2]。酵母來源的β-葡聚糖因其免疫促進(jìn)作用而廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物飼料中。趙紅霞等研究亦表明，在飼料中長期添加250 mg/kg β-1，3-葡聚糖能夠提高凡納濱對(duì)蝦的生長性能，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)代謝[3]。劉棟輝等[4]發(fā)現(xiàn)啤酒酵母β-葡聚糖可以顯著提高斑節(jié)對(duì)蝦（Penaeus monodon）的增重率和存活率。β-葡聚糖也具有一定的免疫增強(qiáng)作用。譚北平等[5]研究亦表明，葡聚糖能夠顯著提高凡納濱對(duì)蝦免疫保護(hù)力、吞噬指數(shù)以及血細(xì)胞總數(shù)等非特異性免疫指標(biāo)。體內(nèi)和體外試驗(yàn)結(jié)果均表明，β-葡聚糖可以增強(qiáng)大西洋鮭（Salmo salar）抗病原感染的能力[6]。上述研究表明，β-葡聚糖作為一種具有免疫刺激作用的生物活性物質(zhì)，對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的生長和生理功能表現(xiàn)出多方面的作用，是一種研究相對(duì)深入、應(yīng)用廣泛的免疫增強(qiáng)劑[7-10]。目前，關(guān)于β-葡聚糖對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的促生長作用機(jī)理仍未有明確結(jié)論，還有待進(jìn)一步研究。

江黃顙魚（Pseudobagrus vachelli）別名瓦氏黃顙魚，隸屬于鯰形目、鮠科、黃顙魚屬，分布生活淡水中、底層，雜食性，是一種重要漁業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整的經(jīng)濟(jì)魚類。當(dāng)前，針對(duì)江黃顙魚的養(yǎng)殖所存在的問題，當(dāng)務(wù)之急是減少化學(xué)藥物和抗生素的使用。因此，在疾病防控方面，免疫增強(qiáng)劑的開發(fā)和應(yīng)用成為新的重要方向。本研究以江黃顙魚為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，主要通過在飼料中添加不同劑量水平的β-1，3-葡聚糖進(jìn)行試驗(yàn)，研究β-1，3-葡聚糖對(duì)江黃顙魚的生長、血清生化指標(biāo)產(chǎn)生的影響，以便促進(jìn)江黃顙魚規(guī)模化健康養(yǎng)殖的發(fā)展。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)飼料

在試驗(yàn)中主要脂肪源用魚油，而蛋白來源則主要用魚粉以及大豆?jié)饪s蛋白，糖源主要通過高筋面粉提供，其基礎(chǔ)飼料組成和營養(yǎng)成分見表1。選用的β-葡聚糖的主鏈為β-1，3結(jié)構(gòu)，純度>90%。在基礎(chǔ)飼料中分別添加β-葡聚糖200、400、600、800、1 000 mg/kg，來進(jìn)行5組飼料投喂實(shí)驗(yàn)。具體操作過程如下：首先把飼料原料粉碎，之后使用40目篩絹網(wǎng)過篩，然后根據(jù)配方準(zhǔn)確稱取，最后使用SLX-80型雙螺桿擠壓機(jī)制備顆粒飼料，其粒徑大小為1.5 mm，再在55 ℃高溫下將顆粒飼料烘干，之后自然冷卻，最后裝到密封袋，保存在-20 ℃冰箱備用。

1.2試驗(yàn)用魚的飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用魚首先需要暫養(yǎng)在室外的水泥池，在暫養(yǎng)期間，對(duì)試驗(yàn)用魚投喂商品飼料，其中不含葡聚糖，日投喂2次。試驗(yàn)在室內(nèi)進(jìn)行，養(yǎng)殖系統(tǒng)包括容積為350 L的玻璃缸，水體體積約為300 L。養(yǎng)殖用水為曝氣的自來水，經(jīng)珊瑚石、活性炭過濾。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)，稱量江黃顙魚的體重（1.75±001）g作為初始體重，最終選取720尾，任意分6組，每個(gè)組設(shè)置4個(gè)重復(fù)，設(shè)置30尾魚為一個(gè)重復(fù)組。在開始試驗(yàn)之前，用基礎(chǔ)飼料對(duì)其馴養(yǎng)大概1周，待情況穩(wěn)定之后，實(shí)驗(yàn)開始投喂5種試驗(yàn)飼料和基礎(chǔ)飼料，投喂的基礎(chǔ)飼料組記作G0（對(duì)照組），不間斷投喂量依次為200、400、600、800、1 000 mg/kg的β-葡聚糖飼料組分別記為G200、G400、G600、G800和G1 000。試驗(yàn)期間定量投喂，日投喂量（以飼料干物質(zhì)計(jì)算）為體重的4%～6%，每天8：30和18：30各投喂一次。試驗(yàn)過程要求自然光照，同時(shí)每天測(cè)定溶氧、水溫、pH等并做好管理日志記錄，包括記錄死亡魚尾數(shù)以及重量。試驗(yàn)期間水溫在28～31 ℃之間，鹽度1‰，pH在7.5～8.0之間，氨氮<0.1 mg/L，溶氧>6.0 mg/L。一周換水2次，每次換水量為總體積的1/3。試驗(yàn)期42天。

1.3樣品的采集及分析

待試驗(yàn)結(jié)束后經(jīng)過停食24 h，統(tǒng)計(jì)每組魚的存活數(shù)量，并稱量魚體總重，然后從每組中隨機(jī)取15尾魚，采用注射器（1 mL），在魚的尾靜脈抽血，采集到血液之后靜置4 h以上，然后通過4 000 r/min離心機(jī)將采集到的血液離心10 min，收集齊上清液并進(jìn)行分裝來制備血清，在-80 ℃保存?zhèn)溆茫徊裳蠼馄?，摘取肝臟樣品保存于-80 ℃冰箱中保存待測(cè)。

1.4指標(biāo)分析

特定生長率（SGR），增重率（WGR），飼料系數(shù)（FC），肥滿度（CF），成活率（SR），肝體比（HSI）按照以下公式計(jì)算：

1.5統(tǒng)計(jì)與分析

平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）來表示試驗(yàn)結(jié)果，通過SPSS 17.0 軟件來方差分析，利用Duncans多重比較來進(jìn)行組間的顯著差異性分析，差異顯著性的水平為P<0.05。

2結(jié)果分析

2.1添加β-葡聚糖對(duì)江黃顙魚生長的影響

添加β-1，3-葡聚糖組，江黃顙魚的終末體重、增重率和特定生長率以G600為最高，但組間差異不顯著（P>0.05）（如表2）。隨著飼料中β-1，3-葡聚糖添加量的增加，江黃顙魚飼料系數(shù)呈上升的趨勢(shì)，添加組飼料系數(shù)與對(duì)照組相比沒有顯著差異（P>0.05），對(duì)照組和各添加組之間肥滿度、肝體比無顯著性差異（P>0.05）。

各添加組之間的終末體重、增重率、特定生長率和飼料系數(shù)無顯著性差異（P>0.05）。

2.2添加β-葡聚糖對(duì)江黃顙魚的血清生化指標(biāo)的影響

飼料中添加β-葡聚糖對(duì)江黃顙魚血清生化指標(biāo)沒有顯著影響（表3），但添加β-1，3-葡聚糖有升高血清總蛋白含量的趨勢(shì)，以及降低尿素、膽固醇的趨勢(shì)。血清甘油三酯含量除了G400 和G1 000 組外，其余各添加組也均低于對(duì)照組，但組間差異均不顯著（P>0.05）。相比對(duì)照組，β-葡聚糖添加組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性均較低，但組間差異均不顯著（P>0.05）。

3討論

3.1飼料中添加β-葡聚糖對(duì)江黃顙魚生長的影響

有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，通過在動(dòng)物飼料中添加一定量的β-1，3-葡聚糖后可促進(jìn)其生長性能、同時(shí)也可提高其成活率、增重率，并且能夠降低其飼料系數(shù)[11-13]。在對(duì)蝦飼料中添加0.4%的β-葡聚糖時(shí)，可以顯著提高南美白對(duì)蝦的飼料利用率，降低其飼料成本，同時(shí)能夠起到增強(qiáng)食欲、促進(jìn)生長的作用[14]。譚北平等將β-1，3/1，6-葡聚糖添加到凡納濱對(duì)蝦的基礎(chǔ)飼料中，由結(jié)果發(fā)現(xiàn)可以促進(jìn)其生長，同時(shí)提高其抗病力[5]。吳春玉等[15]在花鱸（Lateolabrax japonicus）的飼料中添加β-1，3-葡聚糖可以顯著提高花鱸的增重率、特定生長率。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼料中添加β-1，3-葡聚糖使得江黃顙魚的增重率、特定生長率有所提高，其促生長作用與以上學(xué)者的研究結(jié)果一致。目前，β-葡聚糖作為一種免疫刺激劑，在促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物的生長機(jī)能方面的研究相對(duì)較多，不過這種促進(jìn)作用的作用機(jī)制目前還不是十分明確。不過多數(shù)研究學(xué)者一致認(rèn)為，β-葡聚糖對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物并沒有直接的營養(yǎng)促進(jìn)作用，而是通過免疫調(diào)節(jié)在促生長方面起到積極作用，其原理是機(jī)體的免疫屏障主要通過β-葡聚糖來增強(qiáng)，這樣機(jī)體就減少為支持免疫應(yīng)答而消耗營養(yǎng)物質(zhì)，水產(chǎn)動(dòng)物的生長的促進(jìn)就是通過降低免疫應(yīng)答中的產(chǎn)物對(duì)生長的抑制作用來實(shí)現(xiàn)的[16-17]。王銀東等[18]指出β-葡聚糖能夠被消化吸收從而提供能量，主要一直被作為營養(yǎng)物質(zhì)。不過也有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，長期在飼料中添加β-葡聚糖，對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物生長作用沒有顯著影響[19-23]。張健等研究發(fā)現(xiàn)，凡納濱對(duì)蝦飼料中添加β-葡聚糖對(duì)其生長的促進(jìn)作用[24]，可能是主要通過疾病抵抗能力的增強(qiáng)來實(shí)現(xiàn)生長的。不過另有研究表明，相比酵母來源的β-葡聚糖組，取自硅藻來源的β-葡聚糖組中養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)大西洋鱈仔魚存活率明顯比較高，因此可以這樣認(rèn)為β-葡聚糖的來源也可以影響其營養(yǎng)作用的發(fā)揮[25]，其原因可能是不同來源的β-葡聚糖在化學(xué)結(jié)構(gòu)上的不同對(duì)其功效也產(chǎn)生差異影響[6]。雖然β-葡聚糖對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的生長性能的作用研究已經(jīng)有很多，但是其作用結(jié)果卻由于添加劑量[26]、生長階段[27]或飼料配方[28]等不同而表現(xiàn)出差異性。所以，有關(guān)β-葡聚糖對(duì)江黃顙魚生長性能產(chǎn)生影響的作用和機(jī)制的深入研究還有待繼續(xù)進(jìn)行，主要綜合考慮其不同生長階段、差異的飼料營養(yǎng)水平、不一樣的投喂頻率、投喂方式以及β-1，3-葡聚糖的不同來源等各個(gè)方面的因素，從而進(jìn)一步明確江黃顙魚健康養(yǎng)殖中β-葡聚糖的應(yīng)用。

3.2飼料中添加不同水平 β-葡聚糖對(duì)江黃顙魚血清生化指標(biāo)的作用

血清生化指標(biāo)的作用主要反映機(jī)體物質(zhì)代謝以及某些組織器官的不斷變化，一般作為評(píng)價(jià)魚體健康和營養(yǎng)狀況的重要指標(biāo)。在血清中的蛋白質(zhì)主要作用是維持滲透壓，其含量的變化主要與機(jī)體的生理機(jī)能有密切關(guān)系，可以準(zhǔn)確反應(yīng)動(dòng)物的健康狀況，具有一定免疫功能。

相對(duì)于對(duì)照組，各添加組江黃顙魚膽固醇含量較低，其中血清甘油三酯含量除了G400 和G1000 組外，其他各添加組也低于對(duì)照組，這樣的結(jié)果與孫立威等[29]在殼聚糖對(duì)吉富羅非魚（Oreochromis niloticus）的作用影響中得到印證，血清中甘油三酯和膽固醇的變化情況可反映機(jī)體脂質(zhì)代謝功能。由此說明，β-葡聚糖具有降血脂的功效。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在飼料中添加一定量的β-1，3-葡聚糖對(duì)降低江黃顙魚血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性有一定作用，但是各實(shí)驗(yàn)組之間并無顯著性差異，對(duì)于β-1，3-葡聚糖在血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性方面的作用機(jī)制還需要進(jìn)一步加強(qiáng)研究。機(jī)體中轉(zhuǎn)氨酶含量升高是肝細(xì)胞損傷的標(biāo)志，因此轉(zhuǎn)氨酶是反映肝功能的重要指標(biāo)。本研究中我們可以看出，在實(shí)驗(yàn)魚飼料中添加一定量β-葡聚糖可以達(dá)到促使血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性降低的作用，但是并沒有呈現(xiàn)顯著效果，因此可以表明β-葡聚糖對(duì)肝臟的保護(hù)有一定作用，這樣的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，與葡聚糖對(duì)鱸魚[23]、酵母細(xì)胞壁免疫多糖在草魚等的研究結(jié)果是一致的[30]。不過Mahmoud等對(duì)海鯛（Pagellus erythrinus）的研究結(jié)果也表明[31]，β-葡聚糖對(duì)血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶及尿素等機(jī)體指標(biāo)并無顯著影響。有學(xué)者的研究結(jié)果顯示，寡糖-中草藥復(fù)合物對(duì)魚體的谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的降低有一定作用[32]。賀國龍等把酵母細(xì)胞壁免疫多糖添加到飼料中可以降低草魚（Ctenopharyngodon idellus）血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性[33]。出現(xiàn)上述不同結(jié)果的原因以及β-葡聚糖對(duì)江黃顙魚血清生化指標(biāo)的影響尚需更加深入的研究。

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（收稿日期：2016-11-04）