白正輝段峻嶸萬新軍康 強何宗霖

(1.阿克蘇地區(qū)動物疫病控制診斷中心,新疆阿克蘇 843000; 2.阿克蘇地區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所,新疆阿克蘇 843000; 3.沙雅縣獸醫(yī)站,新疆沙雅 842200; 4.阿克蘇地區(qū)畜牧獸醫(yī)局,新疆阿克蘇 843000)

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(1.阿克蘇地區(qū)動物疫病控制診斷中心,新疆阿克蘇 843000; 2.阿克蘇地區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所,新疆阿克蘇 843000; 3.沙雅縣獸醫(yī)站,新疆沙雅 842200; 4.阿克蘇地區(qū)畜牧獸醫(yī)局,新疆阿克蘇 843000)

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的牛、羊、豬等偶蹄獸的一種急性、發(fā)熱和高度接觸性的傳染病，它嚴重威脅著畜牧業(yè)的健康發(fā)展?？谔阋咭呙绲倪x擇直接影響到防疫的好壞；免疫抗體在動物體內(nèi)的消長規(guī)律關(guān)系到免疫程序的制定。為了解當時在使用和中試的幾種疫苗的情況，2012年11月，在阿克蘇市吐布魯克鄉(xiāng)某奶牛養(yǎng)殖場，對該場的64頭牛采血分組后進行口蹄疫三價苗和二價+單價苗進行免疫，然后約30d左右采血一次，至2013年5月3日（168d）結(jié)束；血清采用液相阻斷ELISA實驗方法檢測免疫抗體后，繪制消長曲線，進行分析。通過對牛采用不同種類的口蹄疫疫苗進行免疫以后產(chǎn)生抗體的免疫抗體水平消長情況進行分析，為科學開展免疫提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

阿克蘇市托普魯克鄉(xiāng)肉種羊繁育基地牛場，64頭年齡在3月齡～1歲的犢牛。

1.2 實驗用疫苗

口蹄疫A型單價滅活疫苗（AF/72株），中農(nóng)威特公司，獸藥生字【2009】280027052，生產(chǎn)批號：C120609J；

口蹄疫O型-亞洲I型滅活疫苗（OHM/02株+JSL株），新疆天康公司，獸藥生字【2012】310017047，生產(chǎn)批號：2012022；

10%雙佐劑口蹄疫A型-亞洲I型-O型滅活疫苗（OHM/02株+AKF-III株+Asia I kz/03株）新疆天康公司 生產(chǎn)日期：2012-06-01

20%雙佐劑口蹄疫A型-亞洲I型-O型滅活疫苗（OHM/02株+AKF-III株+Asia I kz/03株）新疆天康公司 生產(chǎn)日期：2012-06-01

口蹄疫A型-Asia I-O型滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株+Asia JSL株+Re-A/WH/09株）金宇寶靈公司，10%，農(nóng)醫(yī)藥便函【2012】105號，批號：22001

1.3 實驗方法

1.3.1 實驗時間：2012年11月29日至2013年5月13日結(jié)束，為期6個月。

1.3.2 實驗分組及注射劑量：分四組，每組選體格、年齡相似的牛，按圈圈分組方式。按照說明書劑量進行于牛頸部上1/3肌肉注射。

A組：14頭牛，注射天康O型-亞洲I型滅活疫苗+ 蘭威A型單價滅活疫苗，各2ml/頭；

B組：13頭牛，注射天康10%佐劑三價滅活疫苗，3ml/頭；C組：12頭牛，注射天康20%雙佐劑三價滅活疫苗，3ml/頭；D組：25頭牛，注射金宇三價濃縮滅活疫苗，1ml/頭。

2 實驗室血清學檢測

2.1 血清采集

在注射疫苗前采血一次，注射疫苗后每30d采血一次直至免疫后六個月結(jié)束。每次采集的血清冷凍保存。

2.2 實驗室檢測

2013年7月2日～5日。

2.2.1 儀器：酶標儀，洗板機，移液器，吸嘴，量筒，微量振蕩器，臺式高速離心機，恒溫箱，96孔酶標板，U型96孔抗原反應(yīng)板，封板膜等，2℃～8℃冰箱。

2.2.2 實驗用試劑：中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所出品。

口蹄疫O型液相阻斷ELISA檢測試劑盒（2006）新獸藥證字42號 批號：2013030101。

表1 不同疫苗產(chǎn)生免疫抗體水平平均值

口蹄疫亞洲I型液相阻斷ELISA檢測試劑盒 （2006）新獸藥證字41號 批號：2013040102。

口蹄疫A型液相阻斷ELISA檢測試劑盒。（中試）

2.2.3 檢測方法：血清按要求采集完畢，在實驗室使用口蹄疫檢測液相阻斷ELISA試劑盒，嚴格按照使用說明書進行包被→血清-病毒抗原反應(yīng)→轉(zhuǎn)板→加酶標二抗→加底物→顯色→滴加終止液，15分鐘內(nèi)在酶標儀上以讀出D492nm波長的吸光度值。

2.2.4 判定標準：以病毒抗原對照平均D492nm值得50%為臨界值，判定陰陽性和抗體最高效價。

3 結(jié)果

對參試疫苗免疫后產(chǎn)生抗體情況進行了檢測，結(jié)果詳見表1。

4 各種疫苗產(chǎn)生免疫抗體水平平均值的反對數(shù)值

對參試疫苗免疫后產(chǎn)生免疫抗體水平平均值進行了統(tǒng)計學分析，結(jié)果詳見表2。

5 曲線圖

運用免疫后抗體消長情況制作了曲線圖，詳見以下圖。

表2 疫苗產(chǎn)生免疫抗體水平平均值的反對數(shù)值

6 結(jié)論及分析

從試驗數(shù)據(jù)和曲線圖可以看出，（1）選取的?？赡苁悄冈纯贵w水平較高或者是先前注射過疫苗，所以在此次注苗前檢測血清抗體水平均高于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的免疫抗體合格水平1：26（反對數(shù)值為4.15），所以此次試驗可以視作加強免疫后的抗體水平消長分析試驗。（2）同時針對很多人提出的“當免疫抗體水平高時注射疫苗，會將先前的抗體中和，使抗體水平下降，導(dǎo)致免疫失敗”的疑問給予了科學解釋。（3）口蹄疫疫苗滅活苗在免疫后的30天至50天之間血清里的免疫抗體到峰值。（4）口蹄疫三種血清型的抗體水平持續(xù)時間顯示，免疫抗體水平（除YI型外）維持5個月以上是沒有問題的。（6）三聯(lián)苗的抗體水平略低于單苗和二聯(lián)苗。（7）添加20%緩釋佐劑的疫苗的抗體水平并不比添加10%的緩釋劑的疫苗效果好，反而表明效果較差。

實驗結(jié)果表明，口蹄疫三聯(lián)苗對減輕口蹄疫防疫的勞動強度和資金投入有著無可替代的優(yōu)點，毫無疑問是要大力推廣的；但單價苗和二聯(lián)苗因有著產(chǎn)生抗體水平高的特點，在疫情發(fā)生需要緊急防疫免疫注射時應(yīng)根據(jù)實際情況優(yōu)先該類疫苗。

[1] 王杰秀.口蹄疫防治知識問答[M].石油工業(yè)出版社，2008.

[2] 董志強，張志.口蹄疫檢測技術(shù)研究進展[J].中國動物檢疫，2007，24（3）：48-50.

白正輝（1968-），湖北鄖縣人，大學學歷，新疆阿克蘇地區(qū)動物疫病控制診斷中心 中心檢驗室負責人，高級獸醫(yī)師、執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，工作重點為重大動物疫病防控和獸醫(yī)實驗室檢測檢驗。