黃敏，倪慶峰

（南通大學附屬醫(yī)院 普通外科，江蘇 南通 226000）

環(huán)境污染、遺傳以及無保護的輻射環(huán)境，均促進了甲狀腺癌的發(fā)生，不同的甲狀腺癌病理類型來源與患者的手術方式以及預后轉歸具有重要的關聯(lián)。甲狀腺乳頭狀癌術后5年生存率較高，中位生存時間較長，而未分化癌等分化較差的腫瘤其術后容易發(fā)生轉移、局部復發(fā)，進而增加5年內病死率。對于甲狀腺癌病因的研究以及預后探討有助于臨床上合理準確評估患者術后臨床轉歸，并延長生存時間[1-2]。第10號染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）的突變以及染色體交聯(lián)缺失可導致細胞正常周期調節(jié)異常，促進腫瘤的發(fā)生，而自噬相關基因Beclin-1對于細胞的生理性自噬過程起到重要的調節(jié)作用[3-5]。本研究重在探討B(tài)eclin-1、PTEN蛋白在甲狀腺癌中的表達變化及與患者臨床病理特征、預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院病理科2010年1月—2010年12月收集的術后確診甲狀腺癌患者的組織標本79例（甲狀腺癌組）和因外科其他原因進行甲狀腺活檢或手術采集的正常甲狀腺組織標本40例（正常組）。甲狀腺癌組年齡31～74歲，平均年齡（41.7±11.2）歲；其中男28例，女51例；病理類型：乳頭狀癌18例，濾泡癌22例，髓樣癌20例，未分化癌19例；發(fā)生淋巴結轉移36例；TNM分期：I期14例，II期20例，III期27例，IV期18例，腫瘤直徑：≥4 cm 30例，＜4 cm 49例。正常組年齡26～70歲，平均年齡（38.8±15.2）歲；其中男15例，女25例。兩組研究對象的年齡、性別構成差異無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）。

1.2 納入排除標準

納入標準：⑴ 甲狀腺癌標本來源于本院手術后標本經病理學證實的患者，正常甲狀腺組織來源于因外科原因手術或病理活檢證實的正常甲狀腺組織；⑵ 甲狀腺癌患者術前未接受放療、化療等其他治療措施；⑶ 兩組組織標本研究對象的各項資料完整。排除標準：⑴ 未經證實的甲狀腺癌患者；⑵ 淋巴瘤等其他惡性腫瘤患者；⑶ 各項資料不完整，不能進行統(tǒng)計分析及預后觀察的甲狀腺癌患者。

1.3 免疫組化方法

Beclin-1、PTEN蛋白表達情況采用SP法進行檢測（選自2010年1月—2010年12月的連續(xù)病例），4%甲醛固定，具體操作按照免疫組化說明書進行，石蠟固定脫水，檸檬酸進行抗原修復，山羊一抗封閉孵育30 min，二抗采用小鼠抗體（一抗以及二抗均購自Santa cruz公司），濃度稀釋按1:1 000進行，用已知的陽性切片作為陽性對照，PBS作為陰性對照。

1.4 觀察標準

免疫組化結果判斷[5]：Beclin-1定位于細胞質、PTEN蛋白定位于細胞核，陽性著色表達呈黃色、棕黃色、褐色表達。根據(jù)著色強度：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為褐色，黑色；根據(jù)陽性細胞比例：陽性細胞數(shù)目所占比例＜5%為0分，陽性細胞所占比例5%～25%為1分，陽性細胞數(shù)＞25%～50%為2分，陽性細胞數(shù)＞50%～75%為3分，陽性細胞數(shù)所占比例＞75%為4分；兩種積分之和總分≤3分為陰性，＞3分為陽性[4]。

1.5 統(tǒng)計學處理

數(shù)據(jù)分析及統(tǒng)計在專業(yè)軟件SAS 9.0軟件包中處理，計量指標采用均數(shù)±標準差（±s）表示，計數(shù)資料采用百分率或構成比（%）表示，比較采用χ2檢驗；生存分析采用Kaplan-Meier法，生存時間比較采用Log-rank法；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩組標本中Beclin-1、PTEN蛋白的表達情況

甲狀腺癌組標本中Beclin-1蛋白的陽性率（31.7%）、PTEN蛋白陽性率（29.1%）均低于正常組（87.5%、90.0%），差異均有統(tǒng)計學意義（均P＜0.05）（表1）。

2.2 Beclin-1、PTEN蛋白的表達與患者臨床病理特征的關系

甲狀腺癌組標本中Beclin-1蛋白與PTEN蛋白的陽性表達均與患者是否發(fā)生淋巴結轉移及TNM分期有關（均P＜0.05），而與患者的年齡、性別、病理類型及腫瘤直徑大小無關（均P＞0.05）（表2）。

表1 兩組標本中Beclin-1、PTEN蛋白的表達情況[n（%）]

表2 Beclin-1/PTEN蛋白的表達與患者臨床病理特征的關系[n（%）]

2.3 Beclin-1、PTEN蛋白與患者預后的關系

Beclin-1、PTEN蛋白陽性表達的甲狀腺癌患者5年生存率均為100.0%，而陰性表達患者分別為87.0%和87.5%，差異均無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）（表3）；Beclin-1、PTEN蛋白陽性表達的甲狀腺癌患者與其陰性表達患者的生存時間比較，差異無統(tǒng)計學意義（均P＞0.05）（圖1）。

表3 Beclin-1、PTEN蛋白與患者5年生存率的關系

圖1 患者術后生存曲線 A：不同Beclin-1蛋白表達狀態(tài)患者；B：不同PTEN蛋白表達狀態(tài)患者

3 討 論

甲狀腺癌是最常見的甲狀腺惡性腫瘤，約占全身惡性腫瘤的1%。除髓樣癌外，絕大部分甲狀腺癌起源于濾泡上皮細胞。早期臨床上可無特異性的表現(xiàn)，主要表現(xiàn)為一側甲狀腺葉或者峽部無痛性結節(jié)，可自行觸診或者體檢發(fā)現(xiàn)。對于非未分化型甲狀腺癌，主要采用手術切除的治療方式，切除的范圍根據(jù)術前的B超檢查以及全身性檢查決定，一般需要切除甲狀腺病變側葉以及峽部，同時切除對側甲狀腺組織并適當進行頸部淋巴結清掃[6-8]。甲狀腺雖然屬于惡性腫瘤，但其術后5年生存率多數(shù)可達60%以上，分化較好的甲狀腺乳頭狀癌術后生存時間較長[9-11]。然而中晚期的甲狀腺癌以及未分化癌等病理類型的腫瘤，其手術治療的效果較差，術后5年內復發(fā)率較高，同時遠處轉移以及淋巴結侵襲的幾率較高，如何早期診斷以及對于中晚期甲狀腺癌進行可靠的預后評估隨訪，是普外科以及甲乳外科醫(yī)生重點關注的課題。Beclin-1、PTEN蛋白參與到了細胞遺傳基因的突變、細胞生理性自噬凋亡過程，已經證實的是Beclin-1、PTEN蛋白顯著參與到了乳腺癌、肝癌以及結直腸癌等發(fā)病過程[12-14]，但其在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展以及疾病預后等方面的研究較少。

PTEN作為抑癌基因，在細胞凋亡、分化、周期調控以及增殖等方面發(fā)揮了重要的調節(jié)作用，并有研究[15-17]證實PTEN在部分內分泌性腫瘤中可以促進原位癌的侵襲以及淋巴結組織的破壞等過程。自噬過程為細胞內溶酶體膜破裂后溶解自身細胞蛋白以及脂質成分的過程，自噬過程的平衡對于維持細胞穩(wěn)定、抑制細胞過度增殖方面具有很重要作用。甲狀腺癌組標本中Beclin-1、PTEN蛋白陽性率均明顯高于正常甲狀腺組織，提示了兩者可能參與到了甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展過程。免疫組化染色可見甲狀腺癌細胞異型性較高的部位，Beclin-1、PTEN的染色強度較強，染色相對均一，同時Beclin-1、PTEN在甲狀腺癌脈管周邊的分布較少，SP染色強度較弱，提示了其可能影響到了淋巴結轉移這一病理過程。甲狀腺癌組標本中Beclin-1、PTEN蛋白的陽性率表達與患者是否發(fā)生淋巴結轉移、TNM分期及腫瘤直徑大小具有顯著的關系，淋巴結轉移的增多以及侵襲破壞的增強，抑癌基因的表達明顯受到抑制。仲崇威等[18-19]研究認為，甲狀腺癌發(fā)生過程中PI3K、MAPK信號通路的激活可以顯著抑制Beclin-1、PTEN轉錄基因的表達，減少mRNA的翻譯表達。Beclin-1基因的轉錄翻譯的下降，降低了甲狀腺異常增殖細胞的自噬反應能力，減輕了對于自噬性腫瘤細胞死亡的誘導分化能，從而促進甲狀腺腫瘤的增殖和對于基底膜的突破作用。而PTEN基因突變后誘導Akt/Notch/cyc通路的激活，繼而促進其對于細胞周期的促增殖效應，同時其可抑制甲狀腺細胞的自噬作用，體現(xiàn)出兩者的協(xié)同作用效應。但本研究并未發(fā)現(xiàn)不同病理類型甲狀腺癌組織中Beclin-1、PTEN表達的差異，一方面考慮兩者在不同上皮來源的甲狀腺組織中恒定表達，表現(xiàn)為“管家基因”的效應[20-22]，另一方面考慮本研究的納入病例數(shù)量有限，相關仍然需要進一步證實。最后本研究初步探討了Beclin-1、PTEN蛋白與患者預后的關系，Beclin-1、PTEN蛋白陽性表達的甲狀腺癌患者5年生存率較高，但并無統(tǒng)計學差異。

Beclin-1、PTEN蛋白表達下調與甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展具有一定的關系，兩者的聯(lián)合檢測對于評估甲狀腺癌的侵襲、轉移以及分化等病理過程具有一定的臨床價值。通過進一步探討其基因突變以及細胞周期調控機制，有利于為臨床上甲狀腺癌的生物分子學治療提供理論依據(jù)。

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