付惠惠+田廣飛+王長(zhǎng)歡+顧丁+侯曉暉

摘要：分析九香蟲(chóng)（Aspongopus chinensis）揮發(fā)物的化學(xué)組成及各組分的相對(duì)含量，可為九香蟲(chóng)的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。采用頂空固相微萃?。℉S-SPME）法提取采自遵義正安九香蟲(chóng)的揮發(fā)物，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）對(duì)該揮發(fā)物進(jìn)行分析鑒定，并采用面積歸一法確定其各成分的相對(duì)含量。結(jié)果表明，九香蟲(chóng)揮發(fā)物共含有29種成分，其中醛類(lèi)8種、烷類(lèi)4種、酸類(lèi)4種、烯酸類(lèi)2種、酯類(lèi)2種、醇類(lèi)1種及胺類(lèi)、呋喃類(lèi)、吡唑類(lèi)、吡啶類(lèi)等化合物成分；而相對(duì)含量較高的是十三烷、十二烷、3-己烯酸和反-2-己烯醛，分別占總量的92.297%、2.712%、2.262%和0.564%。九香蟲(chóng)揮發(fā)物主要由烷類(lèi)物質(zhì)所構(gòu)成。

關(guān)鍵詞：九香蟲(chóng)（Aspongopus chinensis）；揮發(fā)性物質(zhì)；固相微萃??；氣質(zhì)聯(lián)用

中圖分類(lèi)號(hào)：Q969.35 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）03-0545-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2017.03.039

Analysis on Volatile Components of Aspongopus chinensis by HS-SPME and GC-MS

FU Hui-hui， TIAN Guang-fei， WANG Chang-huan， GU Ding， HOU Xiao-hui

（Zunyi Medical University， Zunyi 563000， Guizhou， China）

Abstract： The chemical composition and content of each component of volatile substances in Aspongopus chinensis Dallas was analyzed to provide scientific basis for its exploitation and utilization. Volatile substances of Aspongopus chinensis from Zheng′an were obtained by headspace solid-phase micro-extraction，and then analyzed and identified by GC-MS，to determine the contents of volatile components with area normalization method. The results showed Aspongopus chinensis was composed of 29 volatile components，in which there were eight kinds of aldehyde，four kinds of alkanes，four kinds of acid，two kids of gadoleic acid，two kinds of esters，one kind of alcohol，and amines，furan，pyrazole，pyridine and some other compounds，the content of tridecane，dodecane，3-hexenoic acid and（E）-2-hexanal was relatively high，and accounted for 92.297%，2.712%，2.262% and 0.564% of the total respectively. The volatile substances of Aspongopus chinensis were mainly constituted of alkanes materials.

Key words： Aspongopus chinensis Dallas； volatile substances； solid-phase micro-extraction； GC-MS

九香蟲(chóng)（Aspongopus chinensis）是一種蝽科（Pentatomidae）藥食兩用昆蟲(chóng)，主要分布于中國(guó)南部地區(qū)[1-3]，在慢性腎病、勃起障礙、疼痛及癌癥等方面均具有一定的療效[4-7]；此外，由于其含有多種脂肪酸、蛋白質(zhì)、氨基酸、幾丁質(zhì)及微量元素[8，9]，所以也是一種獨(dú)具地方特色的保健食品[2]。近年來(lái)，從九香蟲(chóng)中分離出30余種天然活性成分，包括內(nèi)酰胺、去甲腎上腺素衍生物、倍半萜化合物等[2，4]，應(yīng)用到多種疾病的治療機(jī)制探究當(dāng)中。文獻(xiàn)所報(bào)道的九香蟲(chóng)揮發(fā)性成分僅見(jiàn)于檢測(cè)九香蟲(chóng)的防御性物質(zhì)[3]，為了更好地了解其化學(xué)成分組成，研究采用固相微萃取法提取九香蟲(chóng)揮發(fā)物，并用GC-MS聯(lián)用儀進(jìn)行分析和鑒定，以便進(jìn)一步了解九香蟲(chóng)的揮發(fā)性成分。

1 材料與方法

1.1 材料

九香蟲(chóng)采自貴州省遵義市正安縣。

1.2 儀器與試劑

試驗(yàn)儀器為HP6890/5975C GC-MS聯(lián)用儀（美國(guó)安捷倫公司）和手動(dòng)固相微萃取裝置（美國(guó)Supelco公司），萃取纖維頭為：2 cm-50/30 μm DVB/CAR/PDMS Stable Flex。主要試劑有無(wú)水硫酸鈉、乙醚、正己烷，均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 方法

1.3.1 九香蟲(chóng)預(yù)處理 按照文獻(xiàn)[10]中九香蟲(chóng)的處理方法，將其置于50～60 ℃溫水中處死，雙蒸水洗滌去除雜質(zhì)，陰干，粉碎后迅速密封包裝備用。

1.3.2 固相微萃取 取樣品約2 g，置于5 mL固相微萃取儀采樣瓶中，插入裝有2 cm-50/30 μm DVB/CAR/PDMS Stable Flex纖維頭的手動(dòng)進(jìn)樣器，在90 ℃左右頂空萃取30 min取出，快速移出萃取頭并立即插入氣相色譜儀進(jìn)樣口（溫度250 ℃）中，熱解析3 min進(jìn)樣。

1.3.3 GC-MS分析條件 色譜條件：色譜柱為AB-INOWAX（30.0 m×250 μm×0.25 μm）彈性石英毛細(xì)管柱，柱溫40 ℃（保留2 min），以5 ℃/min升溫至230 ℃，保持20 min；汽化室溫度250 ℃；載氣為高純He（99.999%）；柱前壓7.62 psi，載氣流量1.0 mL/min；不分流進(jìn)樣；溶劑延遲時(shí)間1.5 min。

質(zhì)譜條件：離子源為EI源；離子源溫度230 ℃；四極桿溫度150 ℃；電子能量70 eV；發(fā)射電流34.6 μA；倍增器電壓1 236 V；接口溫度280 ℃；質(zhì)量范圍20～450 amu。

對(duì)總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)系統(tǒng)檢索及核對(duì)Nist2005和Wiley275標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖數(shù)據(jù)庫(kù)，確定各組揮發(fā)性化學(xué)成分，用峰面積歸一化法計(jì)算各個(gè)組分的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2 結(jié)果與分析

用氣相色譜法分離并經(jīng)質(zhì)譜掃描后共檢出30個(gè)色譜峰及對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜，得到的總離子流見(jiàn)圖1。利用美國(guó)WILEY7NIST05和NIST05兩個(gè)質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行計(jì)算機(jī)檢索，用色譜峰面積歸一化法計(jì)算各組分的相對(duì)含量，共鑒定出29種揮發(fā)性成分，檢出結(jié)果見(jiàn)表1。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，在檢出的29種揮發(fā)性成分中有8種醛類(lèi)化合物，含量占揮發(fā)性成分總量的0.916%；4種烷類(lèi)化合物，含量占揮發(fā)性成分總量的95.155%，是其主要成分；4種酸類(lèi)化合物，含量占揮發(fā)性成分總量的0.581%；2種烯酸類(lèi)化合物，含量占揮發(fā)性成分總量的2.284%；2種酯類(lèi)化合物，含量占揮發(fā)性成分總量的0.167%；還有少量的醇類(lèi)（苯乙醇0.091%）、胺類(lèi)（三甲胺0.002%）、呋喃類(lèi)（2-乙基-呋喃0.039%）、吡唑類(lèi)（4-乙?；?1，3-二甲基吡唑0.084%）、吡啶類(lèi)（2-丙基5-丁基吡啶0.172%）等化合物成分。在所有化合物中含量相對(duì)較高的分別是十三烷（92.297%）、十二烷（2.712%）、3-乙烯酸（2.262%）和反-2-己烯醛（0.564%）。

3 討論

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）因其較高的分離效能和檢測(cè)靈敏度，廣泛應(yīng)用于中藥的揮發(fā)性未知成分與微量成分的分離及結(jié)構(gòu)測(cè)定中[11，12]，故本研究采用該技術(shù)進(jìn)行九香蟲(chóng)揮發(fā)性成分檢測(cè)分析。十三烷在九香蟲(chóng)揮發(fā)性成分中含量最高（92.297%），室溫下為無(wú)色可燃的液體，可以用于溶劑、塑膠工業(yè)和航空煤油的制備，同時(shí)也是某些昆蟲(chóng)御敵時(shí)噴射出的化學(xué)物質(zhì)的主要成分之一[3，13]。本試驗(yàn)中含量最多的揮發(fā)性成分與九香蟲(chóng)防御性物質(zhì)中的同為十三烷，但后者的相對(duì)含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于前者，僅為65.956%[3]，這可能是由于試驗(yàn)中九香蟲(chóng)經(jīng)過(guò)處理后其他揮發(fā)性成分有一定損失而造成十三烷含量相對(duì)較高的原因。另外，與九香蟲(chóng)防御性物質(zhì)揮發(fā)性成分相比較，九香蟲(chóng)全蟲(chóng)的揮發(fā)性成分并沒(méi)有包含前者的全部化合物，除了預(yù)處理九香蟲(chóng)而導(dǎo)致成分的丟失外，也可能是由于固相微萃取技術(shù)不足以將九香蟲(chóng)體內(nèi)的揮發(fā)物全部萃取到，而有所遺漏。

隨著九香蟲(chóng)的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，其揮發(fā)性成分的研究為其生物活性成分的開(kāi)發(fā)及合成提供重要依據(jù)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，從九香蟲(chóng)的苯類(lèi)、胺類(lèi)化合物成分提取出了具有藥用的生物活性成分[2，8]，與本研究的發(fā)現(xiàn)有一定的一致性。而本研究發(fā)現(xiàn)九香蟲(chóng)揮發(fā)性成分中除檢測(cè)出脂類(lèi)、酚類(lèi)、醛類(lèi)、烯烴類(lèi)等潛在的抗氧化活性成分，還有烷類(lèi)、酮類(lèi)、酚類(lèi)等成分組成，得到了更全面的九香蟲(chóng)揮發(fā)性成分信息。綜上所述，以九香蟲(chóng)揮發(fā)性成分為切入點(diǎn)探討從中藥中獲得潛在的生物合成化合物的新思路，為九香蟲(chóng)有效成分的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] LU X W，WU Y. On the structure of aspongopusin recently isolated from Aspongopus chinensis[J].Fitoterapia，2013，84（1）： 318-320.

[2] SHI Y N，TU Z C，WANG X L，et al. Bioactive compounds from the insect Aspongopus chinensis[J].Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters，2014，24（22）：5164-5169.

[3] 侯曉暉，李曉飛，孫 廷.九香蟲(chóng)“臭氣”揮發(fā)性成分的GC-MS分析[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，39（18）：133-134.

[4] YAN Y M，AI J，SHI Y N，et al. （+/-）-Aspongamide A，an N-acetyldopamine trimer isolated from the insect Aspongopus chinensis，is an inhibitor of p-Smad3[J].Organic Letters，2014， 16（2）：532-535.

[5] 季柏新，程丑夫，張緒生.止痛靈的藥理研究[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1990，10（3）：157-159.

[6] 蘇勛莊.蟲(chóng)類(lèi)藥治療陽(yáng)痿[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1991，19（3）：26-28.

[7] 侯曉暉，孫 廷，李曉飛.九香蟲(chóng)三氯甲烷浸提物對(duì)兩種癌細(xì)胞增殖和周期的影響[J].中成藥，2012，34（12）：2278-2281.

[8] LUO X H，WANG X Z，JIANG H L，et al. The biosynthetic products of Chinese insect medicine，Aspongopus chinensis[J].Fitoterapia，2012，83（4）：754-758.

[9] 劉倫沛，郁建平.九香蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)成分分析與評(píng)價(jià)[J].食品科學(xué)，2008，29（2）：406-410.

[10] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典一部[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.10.

[11] 李 娟，任路靜，孫冠男.氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)及其在代謝組學(xué)中的應(yīng)用[J].生物工程學(xué)報(bào)，2013，29（4）：434-436.

[12] 鄒海洋，陳再潔，鄭建明.GC-MS在中藥研究中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代商貿(mào)工業(yè)，2010，23（9）：362-364.

[13] 王玉潔，趙冬香，彭正強(qiáng).荔枝蝽成蟲(chóng)排泄物組分的GC-MS分析[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，26（17）：289-291.