孫宇鵬，安 偉

（貴州省遵義醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科，貴州 遵義 563000）

鼻咽癌起病隱匿，具有早期的轉(zhuǎn)移傾向。腫瘤標(biāo)記物可以早期的、特異的提示腫瘤的發(fā)生，因此，查到鼻咽癌的腫瘤標(biāo)記物，以便早期發(fā)現(xiàn)鼻咽癌的發(fā)生，對(duì)鼻咽癌診治具有重要的臨床意義。

有研究表明，miRNA-29是高表達(dá)于正常組織，而低表達(dá)于實(shí)體瘤組織[1]，miRNA-29可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲等有關(guān)[2]。但是miRNA-29在鼻咽癌組織中表達(dá)水平的情況及其與鼻咽癌生長(zhǎng)、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系目前尚未見報(bào)道。本研究擬通過(guò)檢測(cè)鼻咽癌組織以及鼻咽部非癌組織中miRNA-29的表達(dá)情況，探討其對(duì)鼻咽癌早期診斷的意義和其與鼻咽癌轉(zhuǎn)歸、預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年5月～2017年2月期間本院耳鼻咽喉科收治診斷為鼻咽部腫物的病例和本院腫瘤科收治的診斷為鼻咽癌的病例，每一病例留取2份組織，一份送病理檢查明確診斷；另一份標(biāo)本儲(chǔ)藏于液氮罐中備用，一一對(duì)應(yīng)患者姓名等信息，如病理結(jié)果示為鼻咽癌，則納入鼻咽癌組，如病理結(jié)果示為慢性炎癥，則納入非癌組織組。共得到符合要求的標(biāo)本49例，其中鼻咽癌31例，鼻咽部炎性病變（非癌組織）18例。以門診復(fù)查和電話回訪的方式進(jìn)行隨訪，隨訪截止時(shí)間為2017年2月。

1.2 方法

取10 mg鼻咽部活檢組織加Trizol試劑1 mL后，研磨粉碎，按照Trizol試劑說(shuō)明書提取總RNA，再將總RNA溶于DEPC水中，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定RNA濃度和純度。用U 6管家基因做為內(nèi)參，每個(gè)標(biāo)本設(shè)3個(gè)復(fù)孔。取總RNA 100ng為模板，按照RT逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明配20μl反應(yīng)體系;然后按照實(shí)時(shí)熒光定量PCR試劑盒，取合成的cDNA 4μl為模板，配50μl反應(yīng)體系，預(yù)變性95℃ 30s，反應(yīng)40個(gè)循環(huán)，條件為95℃ 5s， 60℃34s。

1.3 統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

miRNA-29 △Ct=目的基因Ct-內(nèi)參照基因Ct值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以“x±s”表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%），例（n）表示，采用x2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果（見表1與表2）

表1 鼻咽癌與慢性炎癥miRNA-29表達(dá)水平比較分析（±s）

表1 鼻咽癌與慢性炎癥miRNA-29表達(dá)水平比較分析（±s）

注：二組間P=0.00＜0.05

組別 n miRNA-29表達(dá)水平鼻咽癌 31 0.355±0.076慢性炎癥（非癌組織） 18 1.677±0.08

表2 鼻咽癌放化療前與鼻咽癌放化療后miRNA-29表達(dá)水平比較分析（±s）

表2 鼻咽癌放化療前與鼻咽癌放化療后miRNA-29表達(dá)水平比較分析（±s）

注：二組間P=0.00＜0.05，兩例放療后miRNA-29表達(dá)水平未升高，7月內(nèi)復(fù)發(fā)

組別 n miRNA-29表達(dá)水平鼻咽癌放化療前 31 0.355±0.076鼻咽癌放化療后 3 1.106±0.323

3 討 論

本研究通過(guò)檢測(cè)鼻咽癌組織以及鼻咽部非癌組織中miRNA-29的表達(dá)，根據(jù)miRNA-29表達(dá)水平的變化，可以看出miRNA-29在鼻咽癌的治療過(guò)程中，確實(shí)參與了某些環(huán)節(jié)，而且在miRNA-29表達(dá)水平升高后，腫瘤也隨之減小或消失，可以提示miRNA-29參與鼻咽癌的轉(zhuǎn)歸，高表達(dá)有可能抑制鼻咽癌的發(fā)展，從而改善鼻咽癌患者的預(yù)后，miRNA-29可能為一種抑癌基因，后期進(jìn)一步研究通過(guò)靶向治療進(jìn)而進(jìn)一步治療鼻咽癌；有意思的是，有兩例患者經(jīng)放化療后鼻咽部組織中miRNA-29表達(dá)水平較化療前變化不大，在跟蹤觀察期間，治療效果相對(duì)較差，并且通過(guò)隨訪，兩位患者均在7月內(nèi)鼻咽部癌組織再次增大，因其miRNA-29在鼻咽部組織中的表達(dá)未升高，而很快復(fù)發(fā)，這種情況是否可以認(rèn)為miRNA-29的表達(dá)水平可能對(duì)鼻咽癌的預(yù)后有提示作用。

綜上所述，該研究表明miRNA-29確實(shí)參與了鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸等過(guò)程，miRNA-29高表達(dá)于正常組織，低表達(dá)于鼻咽癌組織，很有可能是一種抑癌基因，隨診后期研究的進(jìn)一步深入，miRNA-29可能成為一個(gè)新的分子標(biāo)志物，為鼻咽癌的診斷、預(yù)后判斷和治療提供重要價(jià)值。

[1] 陳 陵,李學(xué)成,等.miR-29在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2010,16(4): 315-317.