緱文斌，王 燁，張 巍

維吾爾族、漢族散發(fā)性乳腺癌BRCA1基因rs16941及rs16942位點(diǎn)多態(tài)性分析

緱文斌1，王 燁2，張 巍3

目的探討維吾爾族及漢族散發(fā)性乳腺癌BRCA1基因單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）是否存在差異，并分析 SNPs位點(diǎn)與腫瘤易感性的關(guān)系。方法選取100例散發(fā)性乳腺癌（維吾爾族、漢族各50例）及100例乳腺腺?。ňS吾爾族、漢族各50例）作為分析對(duì)象，對(duì) BRCA1基因 rs16941及 rs16942進(jìn)行 DNA測序。結(jié)果rs16941及rs16942的AA、AG、GG基因型在維吾爾族、漢族乳腺癌組之間的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.009，P＝0.017）。腫瘤易感性比較：維吾爾族 rs16941位點(diǎn)中 AG與 AA基因型相比，其能夠降低乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR＝0.964，95%CI：0.260～3.583，P＝0.009）；維吾爾族 rs16942位點(diǎn)中 AG與 AA基因型相比，其能夠增加乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR＝1.017，95%CI：0.293～3.916，P＝0.017）。漢族 rs16941位點(diǎn)中 AG與 AA基因型相比，其能夠降低乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR＝0.824，95%CI：0.210～3.234，P＝0.044）。結(jié)論rs16941及 rs16942的 AA、AG、GG基因型在維吾爾族、漢族乳腺癌組的分布，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SNPs與腫瘤易感性有相關(guān)性。

乳腺腫瘤；BRCA1基因；單核苷酸多態(tài)性；腫瘤易感性

乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，每年約450 000人死于該病，其發(fā)病率以每年 2%的速度增長［1－2］，我 國 乳腺 癌的發(fā) 病 率 為 16.39／100 000人［3］。國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道許多乳腺癌易感基因主要有 BRCA1／2、ATR、CHEK1、ERCC1、XPF、ORAI1等［4－7］。目前單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）已被應(yīng)用于許多復(fù)雜疾病的研究［8－9］。乳腺癌 BRCA1基因突變位點(diǎn)眾多，且不同種族 之 間 高 發(fā) 突 變 位 點(diǎn) 存 在 差 異［10－12］，其 中BRCA1基因以外顯子（Exon）2、10、20多見［13］。新疆是多民族地區(qū)以維吾爾族和漢族為主，本文收集100例散發(fā)性乳腺癌及 100例乳腺腺病作為分析對(duì)象，對(duì)BRCA1 Exon10進(jìn)行測序，旨在分析新疆維吾爾族和漢族之間是否存在基因型分布差異，同時(shí)探討 SNPs與腫瘤易感性的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料收集 2004年12月～2015年 3月新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院HIS系統(tǒng)檢索經(jīng)病理學(xué)確診活檢標(biāo)本 200例，所有患者的HE切片均經(jīng)兩名病理診斷醫(yī)師閱片，診斷明確；其中維吾爾族和漢族乳腺浸潤性導(dǎo)管癌各50例、乳腺腺病各50例；收集乳腺腺病100例作為對(duì)照組。

1.2 方法

1.2.1 基因組 DNA提取 蠟塊按 3～4 mm厚連續(xù)切片 3～5張，并收集于干凈的 EP管中，根據(jù)QIAamp DNA FFPE Tissue Kit（Qiagen，Cat＃56404）提取方法進(jìn)行。

1.2.2 PCR擴(kuò)增及基因型分析 所有核酸序列位置編碼參考 NCBI GenBank中野生型 cDNA序列BRCA1（U14680.1）。BRCA1基因引物設(shè)計(jì)參考NM＿007300.3和NC＿000017.11，引物由上海生工公司合成。Exon10-F1：5′-GAGGCAACGAAACTGGACTCATTAC-3′，Exon10-R1：5′-ACGCTTTTGCTAAAAACAGCAGAAC-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物長度667 bp；Exon10-F2：5′-CTGAGACACCTGATGACCTGTTAGA-3′，Exon10-R2：5′-AATAGACTGGGGCAAACACAAAAAC-3′擴(kuò)增產(chǎn)物長度695 bp；DNA樣本質(zhì)檢方法：核酸蛋白定量儀檢測濃度，合格標(biāo)準(zhǔn)：A260／280為1.7～1.9，濃度≥30 ng／μL。收集質(zhì)檢合格的 DNA樣本在預(yù)先配置好的PCR反應(yīng)體系中進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)體系為30μL，包括模板DNA模板0.6μL，10×PCR緩沖液（含Mg2＋）5 μL，10mmol／L dNTP混合物0.6μL，Pfu DNA聚合酶（Tiangen，EP101）0.3μL，上、下游引物（10μmol／L）各0.6μL。反應(yīng)條件：95℃5 min；95℃ 30 s，58℃30 s，72℃60 s，40個(gè)循環(huán)。取 PCR產(chǎn)物 5μL經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳鑒定，PCR產(chǎn)物利用Applied Biosystems 3730XL DNA Analyser測序。測序圖形用Chromas Pro 1.33軟件分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析使用 SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用 χ2檢驗(yàn)分析基因型在不同民族間的分布差異，采用 Logistic回歸分析計(jì)算OR值及95%CI。

2 結(jié)果

2．1 BRCA1 rs16941及 rs16942基因型在維吾爾族及漢族乳腺癌組中的分布rs16941及 rs16942 的AA、AG、GG基因型，在維吾爾族及漢族乳腺癌組中的分布差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.009，P＝0.017，表1，圖1～6）。

表1 BRCA1 rs16941及rs16942在維吾爾族及漢族乳腺癌組中的分布［n（%）］

表2 維吾爾族 BRCA1 rs16941及 rs16942頻率分布與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系［n（%）］

表3 漢族 BRCA1 rs16941及 rs16942頻率分布及其與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系［n（%）］

2．2 維吾爾族 BRCA1 rs16941及 rs16942頻率分布及其與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系rs16941及rs16942在維吾爾族乳腺癌組及對(duì)照組中 AA、AG 及GG基因型分布，差異有顯著性（P＝0.010，P＝0.032）。rs16941位點(diǎn)中 AG與 AA基因型相比，其能夠降低乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR＝0.964，95%CI：0.260～3.583，P＝0.009）。rs16942位點(diǎn)中 AG與AA基因型相比，其能夠增加乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR ＝1.017，95%CI：0.293～3.916，P＝0.017，表2）。

2．3 漢族 BRCA1 rs16941及 rs16942頻率分布及其與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系rs16941及 rs16942在漢族乳腺癌組及對(duì)照組中 AA、AG及GG基因型分布，差異無顯著性（P＝0.178，P＝0.145）。rs16941位點(diǎn)中AG與 AA基因型相比，其能夠降低乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR＝0.824，95%CI：0.210～3.234，P＝0.044，表3）。

Kuusisto等［14］發(fā)現(xiàn)與乳腺癌遺傳易感性高度相關(guān)的基因有 BRCA1、BRCA2、p53、PTEN、STK11／LKB1，而其他一些ATM、CHECK2、BRIP1和PALB2被認(rèn)為是溫和的遺傳基因。家族遺傳性乳腺癌和卵巢癌綜合征主要由BRCA1或BRCA2基因種系突變引起，BRCA1和BRCA2基因是乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)最

3 討論

高的抑癌基因，攜帶BRCA1和BRCA2突變基因的患者乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)分別增加59%～87%及38% ～80%，且BRCA1和BRCA2基因的突變似乎與高級(jí)別乳腺癌相關(guān)，這可能與BRCA蛋白參與同源重組修復(fù)破損的雙鏈 DNA及細(xì)胞周期調(diào)控密切相關(guān)［15］。BRCA1和 BRCA2基因突變可能與男性乳腺癌及前列腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增高相關(guān)，BRCA2基因突變可增加胰腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，BRCA1基因突變可增加結(jié)腸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)［15－16］。

圖1 BRCA1 Exon10 rs16941位點(diǎn)AA基因分型 圖2 BRCA1 Exon10 rs16941位點(diǎn)AG基因分型 圖3 BRCA1 Exon10 rs16941位點(diǎn)GG基因分型 圖4 BRCA1 Exon10 rs16942位點(diǎn) AA基因分型 圖 5 BRCA1 Exon10 rs16942位點(diǎn) AG基因分型 圖 6 BRCA1 Exon10 rs16942位點(diǎn)GG基因分型

BRCA1基因位于17q21上并參與1 863種氨基酸蛋白編碼及 DNA損傷調(diào)節(jié)，約41.5%的 BRCA1基因通常由 Alu序列和其它低密度的重復(fù)序列組成［17］。BRCA1基因含 24個(gè)外顯子，Exon10是該基因最重要、發(fā)生突變最多的外顯子。全球BRCA1基因與乳腺癌多態(tài)性的報(bào)道較多，BRCA1基因 SNPs改變的作用大致可分為四大類：沉默、非同義的、有害的、未分類的，但仍有待進(jìn)一步明確［1］。

本組對(duì)100例散發(fā)性乳腺癌（維吾爾族及漢族各50例）及乳腺腺病患者100例（維吾爾族及漢族各50例）作為分析對(duì)象，檢測BRCA1 Exon10 rs16941及 rs16942的 SNPs。結(jié)果顯示：rs16941及rs16942中 AA、AG、GG基因型在維吾爾族及漢族乳腺癌組之間的分布，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.009，P＝0.017）。維吾爾族rs16941及 rs16942中 AA、AG、GG基因型在乳腺癌組和對(duì)照組的分布，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.010，P＝0.032），漢族rs16941及rs16942中 AA、AG、GG基因型在乳腺癌組和對(duì)照組的分布，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.178，P＝0.145）。SNPs位點(diǎn)與腫瘤易感性比較，維吾爾族 rs16941位點(diǎn)：AG與 AA基因型相比，其能夠降低乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR＝0.964，95%CI：0.260～3.583，P＝0.009）；，維吾爾族 rs16942位點(diǎn)：AG與 AA基因型相比，其能夠增加乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR＝1.017，95%CI：0.293～3.916，P＝0.017）。漢族rs16941位點(diǎn)：AG與 AA基因型相比，其能夠降低乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)（OR＝0.824，95%CI：0.210～3.234，P＝0.044）。饒南燕等［18］發(fā)現(xiàn) BRCA1基因的 rs16942位點(diǎn)等位基因G對(duì)乳腺癌發(fā)病具有保護(hù)作用，可降低乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn) 0.49倍（95%CI：0.29～0.86）。Cox等［19］發(fā)現(xiàn)BRCA1 rs16942位點(diǎn)攜帶稀有等位基因 C的野生型能降低乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述，本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果與國內(nèi)外報(bào)道基本一致，由于本實(shí)驗(yàn)僅收集新疆地區(qū)維吾爾族、漢族散發(fā)性乳腺癌各50例，分析對(duì)象選擇較局限，且存在標(biāo)本量較小等問題；且維吾爾族及漢族人群普遍存遺傳背景、生活方式、生育史、哺乳史、飲食習(xí)慣等許多體內(nèi)外因素的差異，基因型頻率分布可能不一致。因此，要詳細(xì)進(jìn)一步闡明 BRCA1基因SNPs改變與乳腺癌易感性之間的關(guān)系，還有待于對(duì)本地區(qū)、不同種族進(jìn)行多位點(diǎn)、大樣本量的深入細(xì)致分析。

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Polymorphism analysis of rs16941 and rs16942 lociof BRCA1 gene Uighur and Han sporadic breast cancer

GOUWen-bin1，WANG Ye2，ZHANGWei3
（1Department of Pathology，Hospital of Sixth Agricultural Divison of Xinjiang Corps，Wujiaqu 831300，China；2Department of Pathology，Affiliated Cancer Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China；3Department of Pathology，the First Affiliated Hospital，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China）

PurposeTo investigate whether there is a difference in BRCA1 gene single nucleotide polymorphisms（SNPs）in Uighurs and Han Chinese sporadic breast cancer，and to analyze the relationship between SNPs locus and tumor susceptibility.M ethods100 cases of sporadic breast cancer （Uighur and Han 50 cases each）and 100 cases of mammary gland disease（Uighur and Han 50 cases each）were collected as the research object，the BRCA1 gene rs16941 and rs16942 were sequenced.Results The distribution of AA，AG and GG genotypes of rs16941 and rs16942 between Uygur and Han breast cancer groups were statistically significant（P＝0.009，P＝0.017）.Compared with AA genotype of rs16941，AG genotype of rs16941 could reduce the risk of breast cancer in Uighurs（OR ＝0.964，95%CI：0.260－3.583，P＝0.009）.Compared with AA genotype of rs16942，AG genotype of rs16942 could increase the risk of breast cancer in Uighurs（OR＝1.017，95% CI：0.293－3.916，P＝0.017）.Compared with AA genotype of rs16941，AG genotype could reduce the risk of breast cancer in Han nationality（OR＝0.824，95%CI：0.210－3.234，P＝0.044）.ConclusionThe distribution of AA，AG and GG genotypes of rs16941 and rs16942 in Uygur and Han breast cancer groups are statistically significant，and SNPs is correlated with tumor susceptibility.

breast neoplasm；BRCA1 gene；single nucleotide polymorphisms；cancer susceptibility

R 737.9

A

1001－7399（2017）01－0046－05

10.13315／j.cnki.cjcep.2017.01.012

接受日期：2016－11－21

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金（201421lc049）

1新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第六師醫(yī)院病理科，五家渠 831300

2新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科，烏魯木齊 830011

3新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，烏魯木齊 830054

緱文斌，男，碩士，主治醫(yī)師。E-mail：736623646＠qq.com

張 巍，女，教授，主任醫(yī)師，博士生導(dǎo)師，通訊作者。

E-mail：zwyhr100＠163.com