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        液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)在甲狀腺結(jié)節(jié)細(xì)針穿刺病理診斷中的應(yīng)用

        2017-03-20 07:09:44信芳杰林東亮張曉娟

        信芳杰,林東亮,趙 誠,張曉娟,劉 暉

        液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)在甲狀腺結(jié)節(jié)細(xì)針穿刺病理診斷中的應(yīng)用

        信芳杰1,林東亮1,趙 誠2,張曉娟2,劉 暉1

        甲狀腺;液基細(xì)胞學(xué);細(xì)針穿刺

        甲狀腺結(jié)節(jié)為臨床常見疾病,隨著高分辨率超聲的普及應(yīng)用,甲狀腺結(jié)節(jié)的檢出率可達(dá)20%~76%[1],其中惡性結(jié)節(jié)占 5%~6.5%[2]。鑒別結(jié)節(jié)的良惡性一直是臨床上的難點(diǎn),超聲引導(dǎo)下細(xì)針穿刺活檢(ultrasonic guidance fine-needle aspiration biopsy,UG-FNAB)是一種簡便、安全、微創(chuàng)的細(xì)胞學(xué)檢查方法,被國內(nèi)外公認(rèn)為是診斷甲狀腺結(jié)節(jié)性質(zhì)的首選方法[3-4]。液基薄層細(xì)胞學(xué)檢查 (thinprep cytologic test,TCT)廣泛應(yīng)用于婦科宮頸脫落細(xì)胞學(xué)檢測,在非婦科尤其是甲狀腺細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查中的應(yīng)用報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)對甲狀腺細(xì)針穿刺標(biāo)本進(jìn)行傳統(tǒng)涂片和液基細(xì)胞學(xué)制片,比較兩種方法的制片質(zhì)量和診斷陽性率,旨在提高甲狀腺結(jié)節(jié)的早期診斷準(zhǔn)確率。

        1 材料與方法

        1.1 臨床資料收集2014年7月 ~2015年10月青島大學(xué)附屬醫(yī)院行 UG-FNAB的患者184例,其中男性 43例,女性141例,年齡24~76歲,平均41歲,對甲狀腺結(jié)節(jié)細(xì)針穿刺物分別進(jìn)行傳統(tǒng)涂片和液基細(xì)胞學(xué)制片。

        1.2 方法

        1.2.1 手術(shù)取材 患者取平臥位,墊高肩頸部,充分暴露甲狀腺,常規(guī)消毒鋪巾。使用連接22G針頭的5mL注射器,超聲引導(dǎo)下穿刺入甲狀腺結(jié)節(jié)內(nèi),不同方向快速來回穿刺 15 ~20次,拔出針頭后囑患者局部壓迫30 min。

        1.2.2 細(xì)胞學(xué)制片方法 (1)傳統(tǒng)涂片:細(xì)針穿刺物吹打于清潔載玻片上,置于2張載玻片之間,稍加壓力反向拉開,每個(gè)標(biāo)本拉片2~4張,95%乙醇固定30 min,HE染色購自珠海貝索公司。(2)液基細(xì)胞學(xué)制片:細(xì)針穿刺物直接注入液基細(xì)胞保存液中,針管在保存液中反復(fù)抽吸 5次,清洗殘留在針管中的細(xì)胞,液基制片試劑購自廣州安必平公司。第一次離心:600 g 10 min,棄上清液,置漩渦混合器上振蕩30 s;加入5 mL細(xì)胞保存液,用軟吸管將標(biāo)本混勻后轉(zhuǎn)移至 12 mL離心管中;第二次離心:600 g 5 min,棄上清液,漩渦振蕩30 s;根據(jù)沉淀量,加入1~2 mL緩沖液,漩渦振蕩混勻。使用 LBP液基細(xì)胞沉降式自動(dòng)制片系統(tǒng),每張涂片取200μL細(xì)胞混懸液制片,HE染色。

        1.3 結(jié)果判斷滿意標(biāo)本為涂片中可見至少6個(gè)濾泡細(xì)胞團(tuán),每團(tuán)有10個(gè)以上濾泡上皮細(xì)胞[5]。結(jié)果分析采用 Bethesda報(bào)告系統(tǒng),將細(xì)胞制片分為以下6類:(1)標(biāo)本無法診斷或不滿意;(2)良性;(3)意義不明確的濾泡性病變;(4)濾泡性腫瘤或可疑濾泡性腫瘤;(5)可疑惡性腫瘤;(6)惡性腫瘤。惡性腫瘤患者取手術(shù)后病灶組織,行組織病理學(xué)檢查并以此作為金標(biāo)準(zhǔn),所有涂片及組織切片由病理診斷醫(yī)師在顯微鏡下觀察并比較。細(xì)胞學(xué)陽性診斷率 =(惡性腫瘤病例數(shù)/總病例數(shù))×100%,細(xì)胞學(xué)標(biāo)本滿意率 =(總病例數(shù) -無法診斷或不滿意病例數(shù)/總病例數(shù))×100%。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用 SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)數(shù)資料率的比較進(jìn)行 χ2檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)比較液基細(xì)胞學(xué)制片與傳統(tǒng)涂片在背景、細(xì)胞量、細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)、制片質(zhì)量等方面均有所不同(圖1、2),詳見表1。

        表1 兩種制片方法細(xì)胞學(xué)形態(tài)比較

        2.2 診斷率比較184例液基制片及傳統(tǒng)涂片中,無法診斷或不滿意標(biāo)本分別有 7、16例,標(biāo)本滿意率分別為96.2% (177/184)和91.3%(168/184);液基制片及傳統(tǒng)涂片的陽性診斷率分別為51.1%(94/184)和46.2%(85/184),兩種方法陽性診斷率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.88,P>0.05,表2)。惡性腫瘤患者手術(shù)后行組織病理學(xué)檢查,術(shù)后診斷均為甲狀腺癌,液基制片及傳統(tǒng)涂片陽性診斷與組織學(xué)診斷符合率為100%。

        圖1 甲狀腺乳頭狀癌傳統(tǒng)涂片,細(xì)胞重疊,背景雜亂,血細(xì)胞、膠質(zhì)多 圖2 甲狀腺乳頭狀癌液基制片,細(xì)胞單層排列,背景清晰,可見核內(nèi)假包涵體

        表2 兩種制片方法診斷結(jié)果比較

        3 討論

        甲狀腺結(jié)節(jié)臨床發(fā)病率較高,結(jié)節(jié)性質(zhì)的確定對甲狀腺腫瘤的早期診斷、早期手術(shù)十分重要,UG-FNAB是確定甲狀腺結(jié)節(jié)良惡性最可靠、最有價(jià)值的診斷方法[3-6]。甲狀腺組織血供豐富,濾泡中膠質(zhì)含量較多,細(xì)針穿刺物及其細(xì)胞學(xué)涂片極易受血細(xì)胞、膠質(zhì)等成分的影響。因此,提高細(xì)針穿刺的準(zhǔn)確性和特異性,獲得良好的穿刺標(biāo)本和高質(zhì)量的細(xì)胞學(xué)涂片尤為重要。

        1991年美國最先使用 TCT檢測婦科脫落細(xì)胞學(xué),近年來逐漸應(yīng)用于痰液、尿液、胸腹水等非婦科標(biāo)本的檢查,在細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)方面也取得了良好效果[7],本實(shí)驗(yàn)也得出相似結(jié)論:TCT利用專門的細(xì)胞保存瓶和保存液最大限度的收集細(xì)針穿刺細(xì)胞,穿刺針頭可在保存液中反復(fù)抽吸沖洗,使細(xì)胞富集集中,避免傳統(tǒng)涂片穿刺針中大量穿刺物的殘留和丟失。液基細(xì)胞學(xué)制片過程中,通過反復(fù)離心、振蕩、去上清液,利用沉降式制片富集有效的診斷性細(xì)胞,全自動(dòng)制片染色機(jī)制片,使細(xì)胞單層排列,均勻分布,制成直徑 13 mm的圓形薄片。Frost等[8]表明 TCT涂片1~2張就可以滿足甲狀腺穿刺細(xì)胞學(xué)的診斷。相比傳統(tǒng)涂片法液基細(xì)胞學(xué)制片可使診斷細(xì)胞更加集中,縮小觀察范圍,提高診斷效率。

        鏡下觀察兩種制片細(xì)胞學(xué)形態(tài),傳統(tǒng)涂片背景雜亂,細(xì)胞成團(tuán)塊狀或重疊排列,紅細(xì)胞、膠質(zhì)等成分混合,診斷性細(xì)胞易被遮蓋,且細(xì)胞量多少不定、分散分布,易導(dǎo)致假陰性;而液基細(xì)胞學(xué)制片細(xì)胞集中于玻片中央,背景干凈清晰,細(xì)胞呈單層排列,紅細(xì)胞、膠質(zhì)減少,細(xì)胞核更清晰,更易觀察核膜、核溝和核內(nèi)假包涵體,細(xì)胞學(xué)制片質(zhì)量明顯提高。

        液基細(xì)胞學(xué)制片通過標(biāo)本的收集、轉(zhuǎn)運(yùn)、分離提取和自動(dòng)化制片,降低了涂片不滿意率,本組184例標(biāo)本中,TCT無法診斷或不滿意標(biāo)本僅7例,相較于傳統(tǒng)制片16例,標(biāo)本滿意率由91.3%(168/184)提高到96.2%(177/184);兩者陽性診斷率分別為51.1%(94/184)和46.2%(85/184),檢出的陽性例數(shù)有所提高,但兩種方法的陽性診斷率差異尚不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,與許映斌等[9]報(bào)道的一致。本實(shí)驗(yàn)兩種制片方法的惡性檢出率均高于文獻(xiàn)報(bào)道的 5%~6.5%[2],是由于患者在首次甲狀腺超聲檢查后,超聲醫(yī)師對可疑惡性病例進(jìn)行篩選,再次行超聲引導(dǎo)下細(xì)針穿刺,導(dǎo)致惡性檢出率的提高。

        液基細(xì)胞學(xué)制片與傳統(tǒng)涂片一樣,也有一定的局限性,細(xì)針穿刺的結(jié)節(jié)太小或未取到典型病變區(qū)域,或穿刺細(xì)胞量少等,均可影響病理診斷。因此,有經(jīng)驗(yàn)的超聲醫(yī)師和熟練準(zhǔn)確的穿刺手法是獲得高質(zhì)量標(biāo)本的前提。另外,細(xì)針穿刺標(biāo)本無法提供病變組織的整體結(jié)構(gòu)及其與周圍組織的關(guān)系,無法觀察是否浸潤包膜或血管。因此 TCT對濾泡性腫瘤的診斷較為困難。

        細(xì)針穿刺細(xì)胞量對病理診斷有著重要作用,本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)根據(jù)細(xì)針穿刺物的多少,向液基細(xì)胞學(xué)制片最終離心沉淀物加入1~2 mL的緩沖液,制片時(shí)每張玻片吸取200μL細(xì)胞混懸液可獲得滿意涂片。液基細(xì)胞學(xué)制片可以提供良好的背景和清晰的形態(tài),有利于存儲標(biāo)本和對同一標(biāo)本進(jìn)行多種分析,可進(jìn)行特殊染色或免疫組化以輔助診斷[10-11]。

        本組結(jié)果顯示,TCT技術(shù)應(yīng)用于甲狀腺細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)診斷中,可改善穿刺細(xì)胞丟失率高、涂片不均勻等問題,使制片質(zhì)量明顯提高,且陽性診斷率與傳統(tǒng)涂片相似,具有臨床應(yīng)用價(jià)值。

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        R 446.8

        :B

        1001-7399(2017)01-0107-03

        10.13315/j.cnki.cjcep.2017.01.029

        接受日期:2016-10-30

        青島大學(xué)附屬醫(yī)院青年科研基金(No2093)

        青島大學(xué)附屬醫(yī)院1病理科、2腹部超聲科,青島 266555

        信芳杰,女,碩士,主管技師。Tel:(0532)82919350,

        E-mail:179370264@qq.com

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