姜 峰，杜 然

TAP聯(lián)合K i-67對(duì)判斷非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的臨床意義

姜 峰1，杜 然2

目的探討腫瘤異常蛋白（tumor abnormal protein，TAP）和 Ki-67在非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）中的表達(dá)，并分析其與 NSCLC臨床病理特征關(guān)系及患者術(shù)后預(yù)后的意義。方法收集113例 NSCLC患者的臨床資料和存檔石蠟組織標(biāo)本，按生存時(shí)間將患者分為 A組（生存時(shí)間 ＜5年）和 B組（生存時(shí)間≥5年）。免疫組化檢測(cè)腫瘤組織中 Ki-67蛋白的表達(dá)，分析 TAP面積及Ki-67增殖指數(shù)與患者預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果（1）TAP面積越大，生存時(shí)間越短。Ki-67增殖指數(shù)越高，生存時(shí)間越短；兩者之間呈負(fù)相關(guān)。（2）A組 TAP面積陽(yáng)性率為81.70%，明顯高于B組（54.76%），且兩組相比差異有顯著性（P＜0.05），表明Ki-67增殖指數(shù)與患者的生存期成反比；A組 Ki-67增殖指數(shù)陽(yáng)性率為76.06%，明顯高于B組（57.14%），且兩組相比差異有顯著性（P＜0.05），表明 Ki-67增殖指數(shù)與患者的生存期成反比。（3）A組 TAP、Ki-67均 陽(yáng)性 的比 率為57.75%，明顯高于B組（35.71%），A組TAP、Ki-67均陰性的比率為9.86%，明顯低于 B組（26.20%）；113例 NSCLC患者均陽(yáng)性的比率為40.71%，均陰性比率為 15.93%，兩組相比差異有顯著性（P＜0.05），且比單項(xiàng)比較更為精確，表明 TAP聯(lián)合Ki-67對(duì)患者預(yù)后判斷更準(zhǔn)確。結(jié)論TAP聯(lián)合 Ki-67可作為判斷 NSCLC患者預(yù)后的重要指標(biāo)。

肺腫瘤；非小細(xì)胞肺癌；TAP；Ki-67；預(yù)后

原發(fā)性肺癌無(wú)論發(fā)病率和病死率均增長(zhǎng)較快［1－3］，其中約 85% 為 非 小 細(xì) 胞 肺 癌 （non-small cell lung cancer，NSCLC）［4］，其預(yù)后也越來(lái)越引起人們的關(guān)注。Ki-67是一種與細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白質(zhì)，與腫瘤的增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移潛能和預(yù)后密切相關(guān)［5］。腫瘤異常蛋白（tumor abnormal protein，TAP）是細(xì)胞中癌基因和抑癌基因突變后表達(dá)的產(chǎn)物，TAP高凝聚是癌細(xì)胞在異常增生過程中的共同特征［6］。近年來(lái)，TAP已被廣泛應(yīng)用于消化系統(tǒng)、肺癌、乳腺癌等早期篩查或臨床治療后效果評(píng)估。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)113例 NSCLC患者的TAP凝聚情況及 Ki-67的表達(dá)，探討 TAP面積和 Ki-67增殖指數(shù)與 NSCLC患者的預(yù)后關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料收集2009年7月 ～2010年12月聊城市腫瘤醫(yī)院術(shù)前行 TAP檢測(cè)并術(shù)后病理學(xué)確診的113例 NSCLC。淋巴結(jié)均無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，術(shù)前均未接受放療、化療或其它抗癌治療。術(shù)后均行放、化療。113例NSCLC患者中臨床資料完整，男性78例，女性35例；年齡32～73歲，中位年齡51歲；無(wú)吸煙史者52例，有吸煙史者 61例；腺癌 37例，鱗癌 59例，腺鱗癌17例；中央型肺癌68例，周圍型肺癌45例；高分化19例，中分化46例，低分化 48例；生存時(shí)間＜5年者71例，≥5年者42例。腫瘤TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期36例，Ⅲ期24例。按生存時(shí)間將患者分為A組（生存時(shí)間＜5年）和 B組（生存時(shí)間≥5年）。所有病例采取電話或門診隨訪方式，隨訪截止日期2016年4月30日。

1.2 方法

1.2.1 制片 采指端末梢血，推至厚薄均勻的血片2張，干燥后移置操作水平凈化臺(tái)內(nèi)（溫度18～25℃）；相對(duì)濕度（45%～60%）約 10 min，使血片的溫度和濕度達(dá)到工作條件。將凝聚助劑充分搖勻滴加 3滴（每滴約 50μL，液滴斑點(diǎn)直徑10～12 mm）。1.5～2 h待血片上凝聚助劑自然干燥（TAP與凝聚助劑反應(yīng)的過程）后，在滴過試劑的地方形成圓形“斑點(diǎn)”，即標(biāo)本制作完成。

1.2.2 檢測(cè) 將標(biāo)本置于圖像分析儀的顯微鏡下，用 4×平場(chǎng)消色差物鏡，在顯示屏上依次掃描觀察血片標(biāo)本的3個(gè)斑點(diǎn)，尋找特異形態(tài)的凝聚物，有不規(guī)則類圓形晶體顆粒，顆粒呈淡綠色、淡黃色或棕色，中心有屈光性，四周因混合物較多而呈棕黑色或墨綠色為陽(yáng)性，無(wú)上述顆粒檢出為陰性。將有可疑圖像的斑點(diǎn)轉(zhuǎn)用高倍鏡觀察，在瑞生 TAP檢測(cè)圖文系統(tǒng)中采集 ＞80μg以上的特異凝集物，面積總和乘以0.62，所得數(shù)值為檢測(cè)特異凝集物的最終數(shù)。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn)按照WHO（2010）肺癌標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類［7］，術(shù)前有 TAP檢測(cè)結(jié)果，術(shù)后經(jīng)病理確診的NSCLC臨床相關(guān)資料完整；病理資料中有 Ki-67免疫組化表達(dá)的結(jié)果。

1.4 結(jié)果判定TAP面積 0～121μm2為陰性；陽(yáng)性包括：TAP異常／凝聚物較小，面積121～225μm2；TAP異常／凝聚物較大，面積≥225μm2。原發(fā)腫瘤組織Ki-67免疫組化結(jié)果，對(duì)相應(yīng)病理切片免疫組化結(jié)果進(jìn)行復(fù)閱，Ki-67按陽(yáng)性細(xì)胞的百分比進(jìn)行計(jì)數(shù)，以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤20%為陰性，21%～60%為弱陽(yáng)性，≥61%為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用 SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料采用 χ2檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析；關(guān)聯(lián)分析采用 Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 TAP面積和 K i-67增殖指數(shù)與 NSCLC患者生存時(shí)間關(guān)系經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示，TAP面積和NSCLC患者生存時(shí)間呈顯著負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（rs＝－0.903，P＝0.000）；Ki-67增殖指數(shù)大小與 NSCLC患者生存時(shí)間呈顯著負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（rs＝－0.794，P＝0.000）；即TAP面積越大、Ki-67增殖指數(shù)越高，NSCLC患者生存時(shí)間越短。

2．2 A、B兩組患者 TAP面積和 Ki-67增殖指數(shù)與 NSCLC患者術(shù)后生存時(shí)間的關(guān)系A(chǔ)、B組患者術(shù)后生存時(shí)間差異與患者的病理類型、分化程度、TNM分期及吸煙史無(wú)關(guān)，與患者性別、年齡有關(guān)（表 1）。A組患者TAP面積陽(yáng)性率為81.70%，明顯高于B組（54.76%），且兩組相比差異有顯著性（P＜0.05），表明 TAP面積與NSCLC患者生存時(shí)間成反比；A組 Ki-67增殖指數(shù)陽(yáng)性率為 76.06%，明顯高于B組（57.14%），且兩組相比差異有顯著性（P＜0.05），表明 Ki-67增殖指數(shù)與 NSCLC患者的生存時(shí)間成反比（表2）。

表1 兩組患者的臨床資料［n（%）］

表2 A、B兩組TAP面積和 Ki-67增殖指數(shù)與NSCLC患者術(shù)后生存期的關(guān)系

2．3 聯(lián)合 TAP、K i-67檢測(cè)與 NSCLC患者生存時(shí)間的關(guān)系

A組 TAP、Ki-67均陽(yáng)性的比率為 57.75%，明顯高于 B組（35.71%），A組Ki-67、TAP均陰性的比率為9.86%，明顯低于 B組（26.20%）；113例 NSCLC患者均陽(yáng)性的比率為40.71%，均陰性比率為15.93%，兩組相比差異有顯著性（P ＜0.05），且比單項(xiàng)比較更精確，表明聯(lián)合 TAP、Ki-67對(duì)患者預(yù)后判斷更精確（表3）。

表3 聯(lián)合 TAP、K i-67檢測(cè)與 NSCLC患者生存時(shí)間關(guān)系

3 討論

臨床實(shí)踐證明，腫瘤和腫瘤標(biāo)志物沒有嚴(yán)格意義上的一一對(duì)應(yīng)關(guān)系，一種腫瘤可以產(chǎn)生多種腫瘤標(biāo)志物，一種腫瘤標(biāo)志物也可以出現(xiàn)在多種腫瘤中。TAP并不取決于惡性生成物的具體位置和組織結(jié)構(gòu)，是各種腫瘤的共性物質(zhì)，TAP檢測(cè)在同一反應(yīng)中可以將幾十種腫瘤進(jìn)行一次性組合檢測(cè)、高度聚集，極大的放大腫瘤信號(hào)，大大提高腫瘤檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。另有研究表明，TAP與腫瘤大小無(wú)一定關(guān)系，在晚期腫瘤中的表達(dá)反而下降或陰性，認(rèn)為此現(xiàn)象與終末期時(shí)癌細(xì)胞代謝下降、分泌的糖蛋白下降有關(guān)［8－9］。本組結(jié)果表明：隨著TAP面積增加，生存時(shí)間總趨勢(shì)越短，但亦有個(gè)例除外。

Ki-67是目前應(yīng)用最廣泛的增殖細(xì)胞標(biāo)記之一，它的表達(dá)出現(xiàn)于G1中期到晚期，S期和 G2期逐漸增加，有絲分裂期達(dá)高峰，分裂后迅速降解或丟失抗原決定簇，到 G0期則不表達(dá)，半衰期為 1 h或更短［10］。Ki-67被認(rèn)為涉及細(xì)胞增殖的維持，然而其發(fā)揮功能的機(jī)制尚未清楚。資料表明 Ki-67增殖指數(shù)高低與腫瘤分化程度、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移以及預(yù)后密切相關(guān)［11］。所以在腫瘤的研究中是一種重要的參考依據(jù)。文獻(xiàn)［12］還發(fā)現(xiàn) Ki-67增殖指數(shù)越高，腫瘤分化程度越低，提示腫瘤的增殖指數(shù)往往代表腫瘤的惡性程度。本組結(jié)果也印證這一特征：Ki-67增殖指數(shù)越高，患者的生存時(shí)間越短。

綜上所述，Ki-67和 TAP可以作為 NSCLC患者的獨(dú)立預(yù)后因素，聯(lián)合檢測(cè)兩者對(duì) NSCLC患者術(shù)后預(yù)后判斷更加準(zhǔn)確，值得臨床推廣。

［1］ Belani C P，Liao J.Maintenance therapy for non-small cell lung cancer［J］.Lancet，2010，375（9711）：281－282.

［2］ Dahlberg SE，Sandler A B，Brahmer JR，et al.Clinical course of advanced non-small cell lung cancer patients experiencing hypertension during treatmentwith bevacizumab in co-mbination with carboplatin and paclitaxel on ECOG 4599［J］.J Clin Oncol，2010，28（6）：949－954.

［3］ Jemal A，CenterM M，Desantis C，etal.Global patterns of cancer incidence and mortality rates and trends［J］.Cancer Epidemiol Biom Prev，2010，19（8）：1893－1907.

［4］ Suresh S，Ramalingam M D，Taofeek K，et al.Lung cancer：new biological insightsand recent therapeutic advances［J］.CA Cancer JClin，2011，61（2）：91－112.

［5］ 武世伍，承澤農(nóng)，俞 嵐，等.p16和 Ki-67在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系［J］.中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志，2011，20（6）：605－609.

［6］ 吳永梅，張霽雯，蔡 琰.腫瘤異常蛋白（TAP）檢測(cè)在 Barrett食管及食管腺癌臨床診斷中的意義［J］.現(xiàn)代消化及介入診療，2015，2：83－84.

［7］ Molina JR，Yang P，cassivi SD，etal.Non-small cell lung cancer：epidemiology，risk foctors，treatment，and survivorship［J］. Mayo Clin Proc，2008，83（5）：584－594.

［8］ Molina JR，Yang P，cassivi SD，etal.Non-small cell lung cancer：epidemiology，risk foctors，treatment，and survivorship［J］. Mayo Clin Proc，2008，83（5）：584－594.

［9］ Matsumura M，Niwa Y，Kato N，et al.Detection of alphafetoproteinm RNA，an indicator of hematogenous spreading hepatocellular carcinoma，in thecirculation：a possible predictor ofmetastatic hepatocellular carcinoma［J］.Hepatology，1994，20（6）：1418－1425.

［10］Schulter C，Duchrow M，Wohlenberg C，etal.Molecular cloing of the cell proliferation associated nuclear antigen defined by antibody Ki-67 an unique green coding for anew，PEST protein［J］.Cell Biol，1993，123（3）：513.

［11］馮志寅，王維娜，董娟娟，等.P53、P63、Ki67分子標(biāo)志物與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)性 Logistic回歸分析［J］.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，9：1091－1094.

［12］任秋華，肖明明，侯 慧，等.ER、PR、CerbB-2、p53和Ki67蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及其意義［J］.中國(guó)腫瘤臨床與康復(fù)，2010，1：13－5.

R 655.3

：B

1001－7399（2017）01－0104－03

10.13315／j.cnki.cjcep.2017.01.028

接受日期：2016－11－31

1山東省聊城市腫瘤醫(yī)院胸外科 252000

2山東省聊城市人民醫(yī)院病理科 252002

姜 峰，男，碩士，主治醫(yī)師。E-mail：jiangfengyisheng＠163.com