李西山，姜曦，丁光輝，馬心蕊，齊志鑫，熊德琪

大連海事大學環(huán)境科學與工程學院，大連 116026

原油及其煉制品引起的油污染是造成水生生態(tài)系統(tǒng)污染的重要來源之一。來自海上運輸、海上鉆井開采、溢油事故等的石油化合物釋放至水體中，會嚴重危害水生生態(tài)環(huán)境并嚴重危及潛鳥類[1]、濱鳥類[2]、無脊椎動物[3]、哺乳動物[4]和紅樹林[5]等水生生物的生存。為盡快清理溢油減小其對環(huán)境的影響，化學溢油分散劑越來越廣泛地被應用到溢油事故應急預案中?，F(xiàn)在常用的化學溢油分散劑是陰性和中性表面活性劑的烴類混合物，其原理是減弱油水之間的界面張力，在極小的波浪作用或湍流情況下使得油分散成小油滴(<70 μm)進入到水體中[6]。研究表明，大多數(shù)溢油分散劑本身是微毒的[7-8]。因其帶來的潛在危害尚不清楚[9]，故溢油分散劑的使用仍存在爭議。

斑馬魚(Danio rerio)作為國際標準化組織(International Organization for Standardization, ISO)和經(jīng)濟合作與發(fā)展組織(the Organization for Economic Co-operation and Development, OECD)等權(quán)威機構(gòu)認可的經(jīng)典模式生物之一，近年來越來越廣泛地應用在生態(tài)毒理學評估中。斑馬魚胚胎毒理試驗，因其試驗周期短、培養(yǎng)簡便和易觀察等特點，逐漸應用于評估污染物誘導硬骨魚胚胎早期發(fā)育毒性效應[10-11]。目前，大多數(shù)研究都是基于幾個發(fā)育終點(如孵化、卵黃吸收和心率等)和致死率計算半數(shù)最大效應濃度(EC50)或半數(shù)致死濃度(LC50)，卻沒有一個系統(tǒng)性標準來完整地評估胚胎形態(tài)發(fā)育狀況。為此Hermsen等[10]制定了斑馬魚胚胎—幼魚毒性暴露0～72 hpf形態(tài)學得分系統(tǒng)(General Morphology Score System, GMS)，該系統(tǒng)包含12個亞致死形態(tài)學終點，使得評估工作更為準確化、系統(tǒng)化和標準化。而有研究報道指出斑馬魚胚胎—幼魚發(fā)育過程中，至72 hpf時主要器官發(fā)育完成，到120 hpf時斑馬魚幼魚才發(fā)育完全[12-13]；Jomaa等[7]研究甲狀腺活化物暴露對斑馬魚胚胎—幼魚毒性效應時指出暴露至120 hpf的形態(tài)發(fā)育及致畸數(shù)據(jù)的可靠性高于72 hpf。

因此，本研究選取斑馬魚胚胎作為受試生物，采用半靜態(tài)急性暴露(0～120 hpf)的方法，應用斑馬魚胚胎發(fā)育毒性試驗形態(tài)學得分系統(tǒng)(GMS)探討阿曼原油的水溶組分(water-accommodated fractions, WAF)、化學增強型水溶組分(chemically enhanced water-accommodated fractions, CEWAF)和化學濃縮型溢油分散劑(GM-2)對斑馬魚胚胎—幼魚形態(tài)發(fā)育的毒性效應，并評估溢油分散劑的應用對于水體環(huán)境造成的風險。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 實驗儀器與試劑

儀器：IX73型研究級倒置顯微鏡(日本奧林巴斯(Olympus)公司)，斑馬魚飼養(yǎng)系統(tǒng)ZebTec Active Blue(意大利泰百尼斯(Tecniplast)公司)，MGC-400B型光照培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司)，EMS-10型磁力攪拌器(天津歐諾儀器股份有限公司)，F(xiàn)A1004型精密電子分析天平(上海衡平儀器儀表廠)，紫外分光光度計Epoch 2(美國寶特(Bio-Tek)公司)，Costar 24孔板(美國康寧(Corning)公司)，7103型單凹載玻片(帆船牌)，15 mm×60 mm玻璃培養(yǎng)皿(葡萄牙Normax公司)。

試劑：阿曼原油購自大連石化公司，GM-2化學濃縮型溢油分散劑購自青島光明環(huán)保技術(shù)有限公司(經(jīng)查詢其主要成分為乙二醇單丁醚、有機磺酸鹽和丙二醇等)，CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、NaHCO3、KCl和C6H14(均為分析純(AR))均購自天津市科密歐化學試劑有限公司，H2SO4(含量95%～98%，分析純(AR))購自天津市化學試劑一廠。

1.2 實驗材料

實驗用斑馬魚(Danio rerio，AB系)，購自武漢市農(nóng)業(yè)科學技術(shù)研究院水產(chǎn)科學研究所，雌雄分開，飼養(yǎng)于ZebTec Active Blue系統(tǒng)。生長環(huán)境參數(shù)：光暗周期14 h∶10 h，溫度(27.5 ± 0.5) ℃，pH 7.5 ± 0.5，電導率(550 ± 50) μS·cm-1，溶解氧≥80%，同時設定飼養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi)水每天更新20%[14]。每天固定時間喂食2次，分別喂食新鮮孵化36 h的豐年蝦(Artemia salina)幼蟲(購自四川亞峰生物公司)和TetraMin營養(yǎng)薄片飼料(德國德彩(Tetra)公司)。

1.3 斑馬魚受精卵的采集

暴露實驗前1 d，暗周期開始前30 min內(nèi)，將健康且達到性成熟的成魚按照雌雄比例1:2放入繁殖缸內(nèi)，并用隔板隔開，置于光照培養(yǎng)箱中。暴露實驗當天給光5 min內(nèi)抽掉隔板，讓其交配；待1 h后，用3 mL吸管將魚卵吸出，并用27.5 ℃干凈的水清洗魚卵，在顯微鏡下篩選發(fā)育正常的受精卵。

1.4 暴露實驗

1.4.1 WAF和CEWAF的制備

WAF和CEWAF的制備方法是在Singer等[15]的方法基礎上加以修正的。WAF制備方法如下：將阿曼原油和水按質(zhì)量體積比10 g∶1 L置于10 L的玻璃吸氣瓶內(nèi)(留出20%上層空間)，用磁力攪拌器以低能、恒定的轉(zhuǎn)速(100 r·min-1，無渦流)避光攪拌23.5 h，靜置30 min后分離下層水相即為WAF儲存液。CEWAF制備方法如下：將阿曼原油和水按質(zhì)量體積比10 g∶1 L置于10 L的玻璃吸氣瓶內(nèi)(留出20%上層空間)，以低能、恒定的轉(zhuǎn)速(25%～30%渦流)攪拌，速度達到穩(wěn)定后，加入20 g GM-2型溢油分散劑，避光攪拌18 h，靜置6 h后分離下層水相即為CEWAF儲存液。為保證WAF和CEWAF儲存液中組分的穩(wěn)定性，置于4 ℃內(nèi)避光密封保存。

1.4.2 暴露方法

根據(jù)OECD魚類急性毒性試驗的標準，選取半靜態(tài)暴露方法。暴露實驗時，將WAF和CEWAF儲存液用標準稀釋水稀釋至20%、40%、60%、80%和100%這5個濃度；標準稀釋水是參照ISO 7346-2:1996標準配制的[16]，具體成分含量如表1。每個濃度組設3個重復。篩選受精且發(fā)育良好的魚卵(8-細胞期)進行暴露實驗，選用24孔細胞培養(yǎng)板作為暴露容器，每孔注入相應濃度的工作液3.5 mL，每孔吸入1枚受精卵，并置于光照培養(yǎng)箱內(nèi)進行孵化，光暗周期14 h∶10 h，溫度(27.5 ± 0.5) ℃，暴露至120 hpf (hour post-fertilization)。暴露期間，每孔內(nèi)工作液每天更新80%(2.8 mL)。為了確保試驗結(jié)果的可重復性，以上暴露實驗連續(xù)重復3次。同時，實驗期間，不喂食。

1.4.3 致死率和形態(tài)學評估

胚胎暴露24、48、72、96和120 hpf時，在顯微鏡下觀察并記錄各組的致死率、孵化率和畸形率(包括卵黃水腫、心包水腫、尾部畸形和背部畸形等)。本研究采用的形態(tài)學得分系統(tǒng)(GMS)是在Hermsen等[10]制定的0～72 hpf形態(tài)學得分系統(tǒng)的基礎上加以修正的，將暴露時間延長至120 hpf，觀察阿曼原油對斑馬魚胚胎—幼魚整個發(fā)育階段的影響。GMS系統(tǒng)包含12個亞致死形態(tài)學終點(如表2所示)，通過GMS得分高低評估油暴露對斑馬魚胚胎形態(tài)發(fā)育的毒性效應。GMS得分越低，代表胚胎發(fā)育越慢；相反，得分越高，代表胚胎發(fā)育越快。

1.5 總石油烴(TPH)的測定

本研究是根據(jù)國標GB173178.4—2007《海洋監(jiān)測規(guī)范》應用紫外分光光度法測定WAF和CEWAF中的總石油烴(total petroleum hydrocarbons, TPH)的濃度[17]。油標準使用溶液(200 μg·mL-1)使用時現(xiàn)配，以正己烷為參比，測定吸光值并繪制油標準曲線。水樣經(jīng)硫酸酸化處理，加入正己烷，萃取2次。將2次萃取液合并于比色管中，定容。測定在225 nm波長處的吸光值A，以正己烷為參比計算水樣中油濃度。為保證實驗的準確性，CEWAF的標準曲線用阿曼原油與GM-2混合制備的標準使用液(200 μg·mL-1)制定。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

通過IBM SPSS 21.0對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，各組數(shù)據(jù)通過單因素方差分析(analysis of variance, ANOVA)比較各暴露組與對照組之間的差異顯著性；數(shù)據(jù)差異顯著性水平由P值體現(xiàn)，P>0.05表明2組數(shù)據(jù)之間無顯著性差異；P≤0.05表明2組數(shù)據(jù)之間有顯著性差異，用*表示；P≤0.01表明2組數(shù)據(jù)之間有顯著差異，用**表示。

2 結(jié)果(Results)

2.1 阿曼原油WAF和CEWAF暴露120 hpf對斑馬魚胚胎—幼魚致死率的影響

不同稀釋比阿曼原油WAF和CEWAF暴露對斑馬魚胚胎—幼魚致死率隨時間變化情況如圖1所示。120 hpf時，GM-2溢油分散劑(圖1 B GM-2)暴露對斑馬魚胚胎—幼魚的致死率(5.2%±1.7%)略高于水(圖1 A Water)的致死率(1.0%±0.8%)，但無顯著差異(P>0.05)。與對照組(分別為Water和GM-2)比較，WAF(圖1 A)和CEWAF(圖1 B)各組的致死率均有不同程度的升高，并且隨著稀釋比的增加和暴露時間的增長，致死率逐漸升高。WAF各組的致死率均未達到50%致死率，100% WAF的致死率為30.2%±2.8%；CEWAF暴露下(圖1 B)，與對照組(GM-2)比較，48～96 hpf致死率出現(xiàn)不同程度的顯著增加，96～120 hpf增加趨勢趨于平緩；40%、60%、80%和100% CEWAF組在120 hpf時致死率分別達到51.4%±3.3%、74.2%±7.3%、94.4±3.2%和98.7%±1.6%，均已超過半數(shù)致死率(50%)。

表1 標準稀釋水的成分Table 1 Composition of standard dilution water

表2 一般形態(tài)學得分系統(tǒng)Table 2 General morphology score (GMS) system

圖1 阿曼原油水溶組分(WAF)和化學增強型水溶組分(CEWAF)暴露0～120 hpf對斑馬魚胚胎—幼魚致死率Fig. 1 The lethality of zebrafish embryo-larva from 0 to 120 hpf after exposure to water-accommodated fractions of Oman crude oil (WAF) and chemically enhanced water-accommodated fractions (CEWAF)

圖2 不同稀釋比WAF和CEWAF暴露至120 hpf對斑馬魚胚胎—幼魚致死率的影響Fig. 2 The lethality of zebrafish embryo-larva at 120 hpf after exposure to WAF and CEWAF

根據(jù)急性暴露實驗數(shù)據(jù)，使用SPSS對WAF和CEWAF的數(shù)據(jù)進行劑量-效應關(guān)系(dose-response relationship)分析，得出WAF和CEWAF的劑量效應關(guān)系曲線如圖2所示。

為得到CEWAF的半數(shù)致死濃度LC50，CEWAF稀釋比/TPH濃度與斑馬魚胚胎致死率之間的劑量-效應擬合方程如表2所示；CEWAF暴露120 hpf時對斑馬魚胚胎—幼魚的LC50為153.318 mg·L-1(38.9% CEWAF)。

2.2 阿曼原油WAF和CEWAF暴露120 hpf對斑馬魚胚胎孵化率的影響

不同稀釋比阿曼原油WAF和CEWAF暴露至120 hpf對斑馬魚胚胎孵化率影響隨時間變化情況如圖3所示。正常發(fā)育的胚胎在48～72 hpf時基本孵化完成(100%±0%，圖3 A Water)，GM-2組(120 hpf時，97.9%±2.4%，圖3 B GM-2)暴露的斑馬魚胚胎—幼魚的孵化率略低于對照組(Water)，但無顯著差異(P>0.05)。與對照組(分別為Water和GM-2)比較，WAF(圖3 A)和CEWAF(圖3 B)各組的孵化率均有不同程度的降低；并且隨著稀釋比的增加和暴露時間的增長，孵化速度逐漸下降。120 hpf時，相比于對照組(Water)，20% WAF組的孵化率(59.5%±3.9%)顯著性降低(P≤0.05)，≥40% WAF各個組的孵化率均顯著降低(P≤0.01)，其中100% WAF的孵化率低至11.9%±4.4%；CEWAF各組的孵化率均低于對照組(GM-2)且有顯著性差異(P≤0.01)，其中60%和80% CEWAF的孵化率接近于0%(分別為5.2%±4.0%和3.1%±1.0%)，100% CEWAF組均未孵化。同時，CEWAF各稀釋組的孵化率均低于對應的WAF稀釋組。

圖3 WAF和CEWAF暴露0～120 hpf對斑馬魚胚胎孵化率的影響Fig. 3 The hatching rate of zebrafish embryo from 0 to 120 hpf after exposure to WAF and CEWAF

劑量-效應Dose-response關(guān)系方程RelationshipequationR2LC50CEWAF-致死率CEWAF-Lethality0.99438.9%CEWAFTPH-致死率TPH-Lethality0.993153.318mg·L-1

注：CEWAF表示阿曼原油化學增強型水溶組分，TPH表示水樣中的總石油烴。

Note: CEWAF stands for chemically enhanced water-accommodated fractions of Oman crude oil; TPH stands for total petroleum hydrocarbons of water sample.

2.3 阿曼原油WAF和CEWAF暴露120 hpf對斑馬魚胚胎的畸形率的影響

不同稀釋比阿曼原油WAF和CEWAF暴露至120 hpf時斑馬魚胚胎總畸形率的變化如表3所示。相比于對照組，各個暴露組均出現(xiàn)不同程度的畸形現(xiàn)象，這表明阿曼原油WAF和CEWAF暴露會對斑馬魚胚胎發(fā)育及組織器官分化產(chǎn)生影響。60%、80%和100% WAF暴露組畸形率顯著高于對照組(Water)(P≤0.05)，其他各組無顯著性差異；40% CEWAF的畸形率顯著高于對照組(GM-2)(P≤0.05)，60%、80%和100% WAF畸形率顯著高于對照組(GM-2)(P≤0.01)。GM-2組畸形率高于對照組(Water)但無顯著性差異(P>0.05)；同時，CEWAF各稀釋組的畸形率均高于對應的WAF稀釋組。

同時，觀察發(fā)現(xiàn)致畸現(xiàn)象主要表現(xiàn)為心包水腫、卵黃水腫、身體彎曲和尾部彎曲這4個方面。由圖4 A可知，相比于對照組(Water)，僅100% WAF的心包水腫率和卵黃水腫率顯著升高(P≤0.05)；80%和100% WAF背部彎曲顯著升高(P≤0.01)；60%和80% WAF組尾部彎曲顯著升高(P≤0.05)，100% WAF組尾部彎曲顯著升高(P≤0.01)。而CEWAF(圖4 B)暴露造成的心包水腫、卵黃水腫、身體彎曲和尾部彎曲等均要高于對應的WAF(圖4 A)。相比于對照組(GM-2)，60%、80%和100% CEWAF心包水腫顯著升高(P≤0.01)；60% CEWAF組卵黃水腫顯著升高(P≤0.05)，80%和100% CEWAF卵黃水腫顯著升高(P≤0.01)；40% CEWAF背部彎曲顯著升高(P≤0.05)，60%、80%和100% CEWAF背部彎曲顯著升高(P≤0.01)；60%、80%和100% CEWAF尾部彎曲顯著升高(P≤0.01)。

圖4 不同稀釋比WAF和CEWAF暴露至120 hpf對斑馬魚胚胎4個畸形終點的影響Fig. 4 The malformation ratios of zebrafish embryo at 120 hpf after exposure to WAF and CEWAF

組別Group心包水腫/%Pericardialedema/%卵黃水腫/%Yolkedema/%背部彎曲/%Dorsalmalformation/%尾部彎曲/%Tailmalformation/%總畸形率/%Malformationratios/%Water0000020%WAF1.5±1.302.8±2.21.4±1.22.8±2.540%WAF4.2±0.3020.9±2.015.0±5.523.6±2.960%WAF6.4±3.21.5±1.121.1±2.929.1±2.0*32.0±1.2*80%WAF26.5±5.05.6±2.846.9±4.1**33.4±1.6*56.5±3.6**100%WAF54.3±2.4**33.3±1.8*70.4±1.3**60.9±1.4**66.8±4.2**GM-21.5±1.00001.5±1.020%CEWAF11.5±3.0011.4±5.85.0±2.918.1±4.940%CEWAF13.8±5.111.8±4.826.1±2.3*58.3±11.532.0±6.4*60%CEWAF58.1±1.0**39.8±3.9*53.7±3.5**58.3±4.7**63.9±10.4**80%CEWAF82.6±6.0**74.7±4.5**81.8±2.9**78.8±6.4**86.1±8.7**100%CEWAF96.3±3.7**83.7±2.7**100.0±6.6**92.1±4.0**97.2±4.8**

注：WAF和CEWAF分別表示阿曼原油水溶組分和化學增強型水溶組分；*P≤0.05、**P≤0.01，指2組數(shù)據(jù)有顯著性差異。

Note: WAF and CEWAF stand for water-accommodated fractions and chemically enhanced water-accommodated fractions of Oman crude oil;*P≤0.05,**P≤0.01, significant difference between two group.

2.4 阿曼原油WAF和CEWAF暴露120 hpf對斑馬魚胚胎—幼魚發(fā)育GMS的影響

不同稀釋比阿曼原油WAF和CEWAF暴露至120 hpf時對斑馬魚胚胎—幼魚發(fā)育GMS的影響情況如圖5 A所示。由圖可知，隨著稀釋比的增加，WAF和CEWAF暴露均會造成GMS的降低；且CEWAF暴露的GMS比WAF暴露下降幅度更大。相比于對照組(Water)，60% WAF組GMS顯著低于對照組(Water)(P≤0.05)，80%和100% WAF組GMS更低且有顯著性差異(P≤0.01)，其他各組無顯著性差異。GM-2組GMS略低于Water組但無顯著性差異(P>0.05)；20% CEWAF組的GMS低于對照組(GM-2)但無顯著性差異(P>0.05)；40% CEWAF組GMS顯著低于對照組(GM-2)(P≤0.05)；而≥60% CEWAF組低于對照組(GM-2)且有顯著性差異(P≤0.01)。

同時，將GMS系統(tǒng)中的12個亞致死形態(tài)學終點得分進行標準化處理后繪制成熱圖(heat-map)分析(如圖5 B所示，紅色為0，綠色為1)。由圖可知，GM-2各個形態(tài)學終點數(shù)值均略低于Water組，WAF和CEWAF暴露至120 hpf對斑馬魚幼魚的孵化、魚鰾形成、心跳、血液循環(huán)和行動的影響最為顯著。

圖5 不同稀釋比WAF和CEWAF暴露至120 hpf對斑馬魚胚胎—幼魚發(fā)育GMS得分的影響Fig. 5 The GMS of zebrafish embryo-larva at 120 hpf after exposure to WAF and CEWAF

圖6 TPH測定標準曲線(A)和TPH濃度結(jié)果(B)Fig. 6 The standard curve of TPH concentration (A) and the actual TPH concentration of WAF and CEWAF (B)

2.5 TPH結(jié)果

對阿曼原油WAF和CEWAF中TPH的測定結(jié)果如圖6所示。圖6 A是WAF和CEWAF水樣的吸光值與TPH濃度梯度標準曲線(范圍0～25 mg·L-1)。測得WAF和CEWAF水樣中的TPH濃度值如圖6 B所示，100% WAF水樣中TPH濃度為(5.233±0.213) mg·L-1，加入GM-2溢油分散劑后CEWAF的TPH濃度顯著增加，20% CEWAF的TPH濃度為(48.214±7.738) mg·L-1，100% CEWAF中TPH的濃度高達(292.989±11.905) mg·L-1。

3 討論(Discussion)

近年來，渤海灣蓬萊19-3油田漏油事故、大連中石油原油泄漏事故和大連新港輸油管爆炸等大規(guī)模溢油事故的發(fā)生，造成大量原油進入水體中，對周邊水生生態(tài)環(huán)境和水生生物產(chǎn)生嚴重危害。溢油分散劑因其能夠快速清理溢油減小對水生生態(tài)環(huán)境的影響，被逐步應用于處理溢油事故應急預案中[6]。然而，隨著溢油分散劑廣泛使用而所引發(fā)的一系列新的環(huán)境問題也日益顯現(xiàn)，溢油分散劑處理溢油對水生生物的毒性及其相關(guān)機理正亟待研究。

本文應用斑馬魚胚胎發(fā)育形態(tài)學得分系統(tǒng)(GMS)研究阿曼原油(WAF)和經(jīng)GM-2化學濃縮型溢油分散劑處理的阿曼原油(CEWAF)暴露對斑馬魚胚胎—幼魚的形態(tài)學發(fā)育影響。Perrichon等[18]在研究不同油種暴露對斑馬魚胚胎早期發(fā)育的影響時指出，油類暴露能夠顯著延遲胚胎孵化，導致部分發(fā)育停滯或畸形，高濃度時會出現(xiàn)嚴重的急性死亡。而本試驗結(jié)果中，WAF和CEWAF暴露均會在不同程度上延遲斑馬魚胚胎發(fā)育和器官形成，更會顯著地延遲胚胎孵化甚至造成胚胎不孵化；同時，阿曼原油還具有較強的致畸性，主要表現(xiàn)為心包水腫、背部彎曲和尾部彎曲等；而通過GMS系統(tǒng)，本試驗定量評估了油類暴露對形態(tài)發(fā)育的影響，其影響主要表現(xiàn)在魚鰾缺失、心率異常、血液循環(huán)停滯和行動(胸鰭擺動、尾部擺動和游動等)遲緩。試驗結(jié)果顯示油暴露能夠顯著地造成胚胎心包水腫、心率異常，這與Perrichon等[18]和Adeyemo等[19]的研究結(jié)果相近；油類污染能夠顯著持久性地損害魚類胚胎的心臟功能[18,20]，最直接體現(xiàn)是心跳異常和血液循環(huán)衰竭甚至停滯，引起魚體供養(yǎng)不足，進而導致軀體和器官的延遲發(fā)育。

本試驗還發(fā)現(xiàn)阿曼原油暴露能夠誘使斑馬魚魚鰾缺失；魚鰾作為大多數(shù)硬骨魚類的重要功能器官，具有調(diào)節(jié)浮力保持身體平衡等生理功能[21-22]；近年來有關(guān)化學污染物(如消毒劑、聯(lián)苯類、除草劑等)暴露能夠使硬骨魚類的魚鰾出現(xiàn)發(fā)育異常甚至缺失等毒性效應的報道越來越多[22-24]。魚鰾的缺失會導致其無法正常發(fā)揮生理學功能，最直接是對行動方面的影響，進而使得幼魚游動能力下降甚至喪失游動能力；在本試驗中也觀察到油暴露能夠使得斑馬魚幼魚行動變遲緩或無游動行為。因此，魚鰾的未充氣或缺失可作為評價水體中油類污染引起大多數(shù)硬骨魚類形態(tài)學發(fā)育毒性的重要指標之一。而斑馬魚一般形態(tài)學得分系統(tǒng)(GMS)可用于溢油應急措施中使用GM-2濃縮型溢油分散劑對斑馬魚造成的長期效應的早期指示。

相較于WAF和GM-2，CEWAF暴露出現(xiàn)更嚴重的致死毒性；暴露至120 hpf時CEWAF對斑馬魚胚胎半數(shù)致死濃度LC50為153.318 mg·L-1(38.9% CEWAF)。本實驗中GM-2單獨暴露時因其致死率、孵化率、致畸率和GMS得分均與空白對照接近，無顯著差異，證明了其本身對斑馬魚胚胎是無毒或低毒的(或毒性不足以產(chǎn)生顯著不利影響)。加入GM-2溢油分散劑加速了阿曼原油進入水體，增加了水體中總石油烴(TPH)的濃度，增大了斑馬魚胚胎對阿曼原油的生物利用度，進而產(chǎn)生更高形態(tài)發(fā)育毒性效應[6,9,25]。同時，本研究為進一步研究魚類暴露于原油污染水體的生物敏感性和影響性提供基礎。為更深入地評估油類暴露對魚類早期生命階段和其生命周期發(fā)育的不利影響，下一步的研究應集中于生理學、行為學的功能變化及誘導這些變化的分子機制。

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