張喆，陳海剛，溫為庚,3，張林寶，黃南建,2，胡瑩，賈曉平，蔡文貴,

1. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所，廣東省漁業(yè)生態(tài)環(huán)境重點實驗室，農(nóng)業(yè)部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點實驗室，廣州 510300 2. 上海海洋大學(xué)海洋科學(xué)學(xué)院，上海 201306 3. 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所，海南熱帶水產(chǎn)研究開發(fā)中心，三亞 572018

近年來，隨著我國經(jīng)濟的高速發(fā)展，對石油產(chǎn)品的需求量呈逐年上升的趨勢。2014年，我國進口原油達到3.1億噸，基本均是通過船舶運輸進入我國。石油類污染物成為我國近海海洋環(huán)境的主要污染物之一，給海洋生態(tài)系統(tǒng)造成嚴重的影響。據(jù)2015年中國海洋環(huán)境狀況公報數(shù)據(jù)顯示，僅2015年就有近5.9萬噸石油類物質(zhì)隨河流排入海洋[1]，與此同時，船舶運輸造成的泄漏和海浪海潮運動導(dǎo)致的溢油遷移均會影響海洋生態(tài)系統(tǒng)的平衡[2]。國內(nèi)外諸多研究表明，原油和燃料油可影響海洋藻類[3]、浮游生物[4]、貝類[5]和魚類[6]的生長發(fā)育，進而導(dǎo)致海洋生物的多樣性和海洋生態(tài)系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。因此，研究溢油污染對海洋生物的毒性效應(yīng)，對評價溢油污染的毒性，保護海洋生態(tài)系統(tǒng)的健康具有重要意義。

我國學(xué)者相繼開展了燃料油和原油對不同種類對蝦的毒性試驗。唐峰華等[7]分析了8種油品對中國明對蝦(Fenneropenaeus chinensis)和日本囊對蝦(Marsupenaeus japonicus)的急性毒性，獲得不同油品對上述對蝦的急性毒性數(shù)據(jù)。沈新強等[8]的研究表明，平湖原油對脊尾白蝦(Palaemon carincauda)的毒性存在顯著的劑量-效應(yīng)關(guān)系，上述研究對深入探討不同種類油品對海洋蝦類的毒性效應(yīng)具有重要意義。然而，目前有關(guān)南海原油對斑節(jié)對蝦(Penaeus monodon)，尤其是其不同發(fā)育階段幼體毒性效應(yīng)的研究尚未見報道。斑節(jié)對蝦廣泛分布于西太平洋和印度洋沿岸區(qū)域，在我國浙江、福建、廣東、海南和廣西沿岸均有分布，是世界三大養(yǎng)殖蝦類品種之一，廣東斑節(jié)對蝦產(chǎn)量占到全國總產(chǎn)量的55%[9]。本文以斑節(jié)對蝦為研究對象，分析0#柴油和LH原油分散劑乳化液對斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體的急性毒性，旨在為評價石油類污染對海洋生物毒性效應(yīng)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，為評估溢油和石油類污染對海洋生態(tài)系統(tǒng)的影響提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物

斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體(N1/N2，體長(0.32±0.01) mm)、蚤狀幼體(Z1，體長(1.05±0.01) mm)、糠蝦(M1，體長(3.81±0.08) mm)和仔蝦(P2，體長(0.92±0.11) mm)取自南海水產(chǎn)研究所海南熱帶水產(chǎn)研究開發(fā)中心，實驗時選用規(guī)格、發(fā)育階段一致的健康幼體作為實驗對象。實驗用海水取自南海水產(chǎn)研究所海南熱帶水產(chǎn)研究開發(fā)中心，為經(jīng)活性碳過濾凈化和消毒的自然海水，水溫(29.2 ± 0.8) ℃，鹽度30‰ ± 1‰，pH值7.2 ± 0.1，溶解氧飽和度不低于87.64%，每12 h更換海水1次，并及時吸出死亡個體。

1.1.2 實驗試劑

實驗用0#柴油購自深圳市大鵬鎮(zhèn)中石化南澳加油站，原油取自中國南海流花油田，溢油分散劑購自廣州富肯環(huán)保科技有限公司(富肯-3號溢油分散劑)，其他實驗用分析試劑均為分析純，購自廣東國藥集團。

1.2 實驗方法

1.2.1 0#柴油和南海LH原油分散劑乳化液母液制備

將溢油分散劑分別與LH原油、0#柴油按1:1(V:V)混合于50 mL小燒杯中，置于超聲波洗滌器中超聲5 min，后將該超聲后的混合液以1:10(V:V)的比例加入過濾海水中，于超聲波洗滌器中連續(xù)超聲3 h后分液漏斗靜置3 h，取下層水相液保存于棕色瓶中，即為0#柴油和LH原油乳化液母液。制備后的0#柴油和LH原油乳化液母液參照文獻方法[10]進行總石油烴(total petroleum hydrocarbon, THP)含量的測定。

1.2.2 急性毒性實驗

斑節(jié)對蝦由受精卵發(fā)育到仔蝦共經(jīng)歷無節(jié)幼體、蚤狀幼體、糠蝦和仔蝦等幾個階段，其中無節(jié)幼體變態(tài)到蚤狀幼體大約需要35 h左右，蚤狀幼體變態(tài)到糠蝦大概需要96 h，糠蝦發(fā)育到仔蝦大約96～120 h[11]。本實驗考慮到斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段對餌料、氧氣的需求以及實驗體系的需要，將無節(jié)幼體和蚤狀幼體實驗時間設(shè)置為48 h，糠蝦和仔蝦設(shè)置為96 h。

以預(yù)實驗結(jié)果為依據(jù)，采用以10為底的等對數(shù)間距設(shè)置不同石油烴濃度的0#柴油和LH原油乳化液作用于斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體(表1)，同時設(shè)置空白對照組(control group, CG)和分散劑對照組(dispersant control group, DCG)。其中，分散劑對照組中分散劑濃度與實驗組最高濃度組所添加的分散劑濃度一致，并通過向低濃度實驗組補充分散劑的形式保證各實驗組分散劑濃度一致。配制實驗液前用UV-2550紫外可見分光光度計(島津儀器有限公司)測定母液總石油烴濃度。

無節(jié)幼體和蚤狀幼體根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果分別設(shè)置10個濃度組、1個空白對照組和1個分散劑對照組，實驗連續(xù)進行48 h。正式實驗于100 mL燒杯中進行，每個燒杯加入50 mL海水，每個濃度組3個平行，每個平行大約200～300個個體。分別于24 h和48 h使用膠頭滴管隨機取樣于實體解剖鏡下進行觀察計數(shù)，無節(jié)幼體和蚤狀幼體以在解剖鏡下針尖碰觸后無反應(yīng)作為死亡標準，分別于實驗36 h和48 h記錄無節(jié)幼體變態(tài)率。正式實驗期間每12 h更換全部試液1次，溶解氧飽和度為92.37% ± 2.59%，脅迫期間不投喂。

表1 0#柴油和南海LH原油乳化液實驗濃度Table 1 Experimental solutions of No. 0 diesel and LH crude oil

注：同一實驗組0#柴油與南海LH原油濃度梯度設(shè)置相同。

Note: Same TPH concentrations of No. 0 diesel and LH crude oil were set according to same experimental groups.

糠蝦和仔蝦則分別設(shè)置5個濃度組、1個空白對照組和1個分散劑對照組，實驗連續(xù)進行96 h。正式實驗于2 L燒杯中進行，每個濃度組3個平行，每個燒杯加入1.2 L砂濾海水和40～50個對蝦個體，每12 h換水1次，分別于24 h、48 h、72 h和96 h記錄對蝦死亡情況?？肺r和仔蝦以軀干彎曲、僵硬、玻璃棒碰觸無反應(yīng)為死亡標準，整個實驗期間不投喂，溶解氧飽和度為95.57% ± 1.25%。

1.2.3 統(tǒng)計與分析

實驗結(jié)果均采用平均數(shù)±標準差(mean ± SD)表示，所得數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan’s法對均值進行多重比較，顯著水平為P < 0.05。實驗中用存活率和變態(tài)率來反映0#柴油和LH原油乳化液對斑節(jié)對蝦生長和變態(tài)發(fā)育的影響，存活率(%)= 實驗期間存活個體數(shù)/實驗個體總數(shù)×100%，變態(tài)率(%)= 變態(tài)個體數(shù)/存活個體總數(shù)×100%[12]。采用直線內(nèi)插法分別計算48 h和96 h 0#柴油和LH原油對斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體的半致死濃度，計算斑節(jié)對蝦幼體存活安全濃度。其中，針對無節(jié)幼體和蚤狀幼體，安全濃度=48 h-LC50× 0.1[13]；針對糠蝦和仔蝦，安全濃度=96 h-LC50× 0.1[14]。

2 結(jié)果與分析(Results and analysis)

2.1 斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體中毒癥狀

前期實驗表明，本實驗所用富肯-3號溢油分散劑在實驗濃度范圍內(nèi)對實驗生物并無顯著的影響，表明其對試驗生物的毒性較小，適于作為助溶劑進行實驗[15]。

空白對照組和分散劑對照組無節(jié)幼體和蚤狀幼體剛毛、附肢、尾棘直，粗壯，游泳迅速，趨光性強；暴露于0#柴油和LH原油乳化液后，無節(jié)幼體附肢和剛毛彎曲可折斷，蚤狀幼體軀干嚴重彎曲，兩者游泳能力和趨光性均較弱，導(dǎo)致多個個體聚集成群。無節(jié)幼體和蚤狀幼體死亡時軀體變?yōu)榘咨奂劣谒?。糠蝦和仔蝦暴露于0#柴油和LH原油初期，低濃度組與對照組沒有顯著的行為差異，而高濃度組則表現(xiàn)出一定的興奮效應(yīng)，在燒杯內(nèi)快速游動。隨著暴露時間的延長和暴露濃度的增加，其活力逐漸下降，匍匐于燒杯底部，活動較少，對外界刺激反應(yīng)遲鈍直至死亡。死亡糠蝦和仔蝦側(cè)躺彎曲，死亡糠蝦通體呈現(xiàn)白色，而仔蝦則通體為暗紅色。

2.2 0#柴油和LH原油對斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體的劑量-效應(yīng)關(guān)系

圖1所示為0#柴油和LH原油乳化液對斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體死亡率和變態(tài)率的影響。由圖中可知，分散劑對照組無節(jié)幼體死亡率和變態(tài)率與空白對照組沒有顯著性差異(P > 0.05)，而0#柴油和LH原油乳化液均對斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體具有較大毒性，0.1 mg·L-1暴露24 h即可導(dǎo)致無節(jié)幼體的死亡，而高濃度暴露24 h后實驗生物死亡率可達到96%左右。0#柴油乳化液可以影響斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體變態(tài)率(圖1)。3.59 mg·L-10#柴油作用36 h后，無節(jié)幼體變態(tài)率下降為93.67%，與對照組存在顯著差異(P < 0.05)；當(dāng)暴露濃度為10.0 mg·L-1時，無節(jié)幼體變態(tài)率下降到最低，為76.33%；暴露濃度低于2.15 mg·L-1時，實驗組與對照組無節(jié)幼體變態(tài)率差異不顯著(P > 0.05)。0#柴油脅迫48 h后，3.59 mg·L-1、5.99 mg·L-1和10.00 mg·L-1濃度組無節(jié)幼體變態(tài)率分別為93.98%、90.85%和86.88%，仍然顯著低于對照組(P < 0.05)。

圖1 0#柴油(a)和LH原油(b)乳化液對斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體濃度-劑量效應(yīng)注：*代表無節(jié)幼體36 h和48 h變態(tài)率與空白組存在顯著差異(P < 0.05)；CG和DCG分別代表空白對照組和分散劑對照組，其總石油烴濃度均為0.00 mg·L-1。Fig. 1 Dose-response of No. 0 diesel emulsion (a) and LH crude oil emulsion (b) to naupliusNote: * represents significant difference of nauplius’ metamorphosis rate between control and experimental groups after 36 and 48 hours (P < 0.05); CG and DCG represent control and dispersant control groups respectively, in which the concentration of THP are both 0.00 mg·L-1.

LH原油同樣可以影響無節(jié)幼體變態(tài)率，低濃度時無節(jié)幼體變態(tài)率差異不顯著，而隨著暴露濃度的增加變態(tài)率逐漸下降，脅迫36 h后當(dāng)濃度僅為0.77 mg·L-1時，變態(tài)率即與空白對照組存在顯著差異(P < 0.05)。3.59 mg·L-1、5.99 mg·L-1和10.0 mg·L-1濃度組無節(jié)幼體變態(tài)率分別為90.45%、83.33%和69.68%，均顯著低于對照組(P < 0.05)。脅迫48 h后，高濃度組無節(jié)幼體變態(tài)率略有升高，3.59 mg·L-1、5.99 mg·L-1和10.0 mg·L-1濃度組無節(jié)幼體變態(tài)率分別為92.95%、90.78%和83.52%。

0#柴油和LH原油乳化液對斑節(jié)對蝦蚤狀幼體劑量-效應(yīng)關(guān)系見圖2。0.10 mg·L-10#柴油和LH原油暴露24 h后，斑節(jié)對蝦蚤狀幼體即開始出現(xiàn)死亡，0.77 mg·L-10#柴油乳化液暴露24 h后蚤狀幼體死亡率達到51.67%，48 h后死亡率達到63.3%；10

mg·L-10#柴油乳化液作用24 h，蚤狀幼體即全部死亡。LH原油乳化液毒性較之0#柴油乳化液略小。當(dāng)LH原油暴露濃度為0.77 mg·L-1時，蚤狀幼體24 h和48 h死亡率分別為46.67%和58.30%。隨著暴露濃度的增加，蚤狀幼體死亡率逐漸上升，10 mg·L-1濃度組在24 h和48 h死亡率分別達到96.67%和100%。當(dāng)石油烴含量高于0.17 mg·L-1時，各個時間點蚤狀幼體死亡率均顯著高于空白組(P < 0.05)。

圖2 0#柴油和LH原油乳化液對斑節(jié)對蝦蚤狀幼體濃度-劑量效應(yīng)注： *代表該濃度組各時間點蚤狀幼體死亡率均與空白組存在顯著差異(P < 0.05)；CG和DCG分別代表空白對照組和分散劑對照組，其總石油烴濃度均為0.00 mg·L-1。Fig. 2 Dose-response of No. 0 diesel emulsion (a) and LH crude oil emulsion (b) to protozoeaNote: *represents significant difference of protozoea mortality between control and experimental groups at different times (P < 0.05); CG and DCG represent control and dispersant control groups respectively, in which the concentration of THP are both 0.00 mg·L-1.

圖3 0#柴油(a)和LH原油(b)對斑節(jié)對蝦糠蝦的濃度-劑量效應(yīng)注：*代表該濃度組各時間點糠蝦死亡率均與空白組存在顯著差異(P < 0.05)；CG和DCG分別代表空白對照組和分散劑對照組，其總石油烴濃度均為0.00 mg·L-1。Fig. 3 Dose-response of No. 0 diesel emulsion (a) and LH crude oil emulsion (b) to mysisNote: *represents significant difference of mysis mortality between control and experimental groups at different times (P < 0.05); CG and DCG represent control and dispersant control groups respectively, in which the concentration of THP are both 0.00 mg·L-1.

圖3和圖4所示分別為0#柴油和LH原油乳化液對斑節(jié)對蝦糠蝦和仔蝦的劑量-效應(yīng)關(guān)系。0.5 mg·L-10#柴油和LH原油乳化液作用24 h后，斑節(jié)對蝦糠蝦均未出現(xiàn)死亡，48 h后死亡率則分別為10%和8.33%。1.58 mg·L-10#柴油乳化液作用后的72 h和96 h，糠蝦死亡率分別達到55.00%和66.67%，而相同濃度LH原油組的死亡率則分別為48.33%和60.00%。當(dāng)斑節(jié)對蝦糠蝦暴露于最高濃度(5 mg·L-1)96 h后，0#柴油和LH原油實驗組的死亡率均達到95.00%，且當(dāng)石油烴含量高于0.89 mg·L-1時，各個時間點糠蝦死亡率均顯著高于空白組(P < 0.05)。較之糠蝦，仔蝦對0#柴油和LH原油的耐受力較高。當(dāng)暴露濃度為3.16 mg·L-1和7.95 mg·L-1時，0#柴油組仔蝦96 h死亡率分別為81.67%和96.67%，而LH原油組則分別為71.67%和91.67%。當(dāng)濃度升高到20 mg·L-1時，0#柴油和LH原油暴露72 h后仔蝦的死亡率分別為98.33%和93.33%，2個實驗組96 h的死亡率則均達到100%。當(dāng)石油烴含量高于1.26 mg·L-1時，各個時間點仔蝦死亡率均顯著高于空白組(P < 0.05)。

2.3 0#柴油和LH原油對斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體的半致死濃度和安全濃度

如表2所示，0#柴油對斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體和蚤狀幼體的48 h-LC50分別為0.55 mg·L-1(0.45～0.65 mg·L-1)和0.42 mg·L-1(0.34～0.50 mg·L-1)，LH原油對斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體和蚤狀幼體的48 h-LC50分別為0.62 mg·L-1(0.51～0.75 mg·L-1)和0.51 mg·L-1(0.42～0.61 mg·L-1)，蚤狀幼體對0#柴油和LH原油乳化液的耐受能力大于無節(jié)幼體。0#柴油和LH原油對糠蝦的96 h-LC50分別為0.95 mg·L-1(0.78～1.13 mg·L-1)和1.05 mg·L-1(0.86～1.25 mg·L-1)，對仔蝦的96 h-LC50分別為1.09 mg·L-1(0.85～1.35 mg·L-1)和1.42 mg·L-1(1.11～1.71 mg·L-1)，糠蝦和仔蝦對0#柴油和LH原油的耐受能力順序均為仔蝦 > 糠蝦，2種油對斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體的毒性大小順序均為0#柴油乳化液 > LH原油乳化液。0#柴油對斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體、蚤狀幼體、糠蝦和仔蝦的安全濃度分別為0.05 mg·L-1、0.04 mg·L-1、0.10 mg·L-1和0.11mg·L-1，LH原油對無節(jié)幼體、蚤狀幼體、糠蝦和仔蝦的安全濃度分別為0.06 mg·L-1、0.05 mg·L-1、0.11 mg·L-1和0.14mg·L-1。

圖4 0#柴油(a)和LH原油(b)對斑節(jié)對蝦仔蝦的劑量-效應(yīng)注：*代表該濃度組各時間點仔蝦死亡率均與空白組存在顯著差異(P < 0.05)；CG和DCG分別代表空白對照組和分散劑對照組，其總石油烴濃度均為0.00 mg·L-1。Fig. 4 Dose-response of No. 0 diesel emulsion (a) and LH crude oil emulsion (b) to post-larvaeNote: *represents significant difference of post-larvae mortality between control and experimental groups at different times (P < 0.05); CG and DCG represent control and dispersant control groups respectively, in which the concentration of THP are both 0.00 mg·L-1.

3 討論(Discussion)

3.1 0#柴油和LH原油對斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體變態(tài)率的影響

溢油污染可以對多種生物的早期生長發(fā)育造成影響[6, 16]。吳彰寬和陳民山[17]分析勝利油田對對蝦無節(jié)幼體變態(tài)率的影響時發(fā)現(xiàn)，其對無節(jié)幼體影響的最低濃度為3.2 mg·L-1，油濃度為10 mg·L-1時，幼體變態(tài)率開始迅速下降，當(dāng)濃度達到100 mg·L-1時，無節(jié)幼體變態(tài)率僅為35%左右。楊柏林等[18]和呂福榮等[19]在分析石油烴對海膽胚胎的發(fā)育毒性時也發(fā)現(xiàn)，0#柴油分散液對海膽胚胎發(fā)育各個時期具有不同程度的延遲效應(yīng)，120#燃料油可以顯著延長海膽胚胎發(fā)育的時間，分散劑的加入使得該延遲效應(yīng)更加明顯[20]。本研究結(jié)果表明0#柴油和LH原油可以影響斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體的變態(tài)率，3.59 mg·L-10#柴油和0.77 mg·L-1原油即可影響斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體的發(fā)育。由36 h和48 h無節(jié)幼體變態(tài)率可知，LH原油對斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體發(fā)育的影響要大于0#柴油，這可能是在原油蒸餾為柴油的過程中，失去的部分化合物可能會對對蝦發(fā)育產(chǎn)生較大影響。隨著暴露濃度的升高，斑節(jié)對蝦無節(jié)幼體變態(tài)率逐漸下降，而暴露48 h后，高濃度組變態(tài)率略有升高，說明與之前的研究結(jié)果相似，一定濃度0#柴油和LH原油乳化液顯著延長了無節(jié)幼體發(fā)育到蚤狀幼體的時間。鑒于試驗設(shè)置時間較短，在試驗期內(nèi)僅觀察到無節(jié)幼體的變態(tài)發(fā)育，有關(guān)0#柴油和LH原油對斑節(jié)對蝦其他發(fā)育階段幼體變態(tài)率的影響仍需要進一步的研究。

3.2 斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體對0#柴油和LH原油的耐受性差異

我國學(xué)者圍繞溢油污染對海洋生物幼體的急性毒性積累了大量數(shù)據(jù)，這些結(jié)果因油品、試驗生物個體大小及種間差異而不同。唐峰華等[7]研究發(fā)現(xiàn)，不同油品分散液對中國明對蝦和日本囊對蝦的LC50分別為0.60～754.87 mg·L-1和0.002～7.62 mg·L-1，可見不同油品之間以及不同的試驗物種之間差別較大。Hemmer等[21]的研究結(jié)果顯示LSC原油乳化液對糠蝦(Americamysis bahia)的LC50介于0.39～9.7 mg·L-1之間，其對糠蝦的毒性因使用的分散劑不同而存在差異。另有研究表明，原油和0#柴油乳化液對3月齡幼參的96 h-LC50分別為246.09 mg·L-1和125.89 mg·L-1[14]；0#柴油分散液對馬糞海膽浮游幼蟲48 h和72 h的EC50分別為3.39 mg·L-1和1.87 mg·L-1[22]；溢油分散劑處理的平湖原油對脊尾白蝦幼體的96 h-LC50為1.20 mg·L-1[8]；原油乳化液對凡納濱對蝦(Litopenaeus Vannamei)成體的48 h-LC50則為631.46 mg·L-1[23]。綜合以上的結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，溢油污染對海洋無脊椎動物幼體的LC50大多介于0.39～246.09 mg·L-1之間，遠低于其對海洋無脊椎動物成體的LC50。本研究結(jié)果表明，0#柴油和LH原油對斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體的LC50分別介于0.42～1.09 mg·L-1和0.51～1.42 mg·L-1之間。根據(jù)魚類毒性等級分級標準[24]，0#柴油和LH原油乳化液對斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體毒性均為劇毒(LC50< 1 mg·L-1)。與以往的研究結(jié)果相比，本次獲得的LC50數(shù)值較低可能存在以下原因：第一，本文采用斑節(jié)對蝦早期發(fā)育階段幼體，其對溢油污染的耐受力較之成體要差；第二，本研究結(jié)果為0#柴油和原油乳化液結(jié)果，分散劑的加入可能使柴油和原油的毒性增加；第三，本次試驗水溫較高，平均水溫在29 ℃左右，水溫較高時實驗生物的耐受性會有所下降[25]。

表2 0#柴油和南海LH原油乳化液對斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體的48 h/96 h-LC50Table 2 48 h/96 h-LC50 and 95% confidence interval of No. 0 diesel oil and LH crude oil emulsion to different development stages of P. monodon

注：*無節(jié)幼體和蚤狀幼體為48 h-LC50，糠蝦和仔蝦為96 h-LC50。

Note: 48 h-LC50of nauplius and protozoea were calculated, and 96 h-LC50of mysis and post-larvae were calculated.

生物不同發(fā)育階段幼體對污染物的敏感度存在顯著差異。黃逸君等[4]分析了原油乳化液對10種海洋橈足類的急性毒性，其對海洋橈足類的急性毒性介于82.33～856.64 mg·L-1之間，且毒性隨著物種個體的增大而減弱。然而對蝦對污染物的耐受力卻并不一定隨著其個體的增長而增加。吳彰寬和陳民山[17]研究發(fā)現(xiàn)對蝦不同發(fā)育階段幼體對石油的耐受能力依次為受精卵 > 仔蝦 > 無節(jié)幼體 > 糠蝦 > 蚤狀幼體，認為在評價石油污染對對蝦的影響時，應(yīng)首先考慮其對蚤狀幼體的影響。溫為庚等[26]分析了復(fù)方三氯異氰尿酸對斑節(jié)對蝦幼體的毒性，發(fā)現(xiàn)其對試驗藥物的耐受力依次為仔蝦 > 無節(jié)幼體 > 糠蝦 > 蚤狀幼體。本研究也發(fā)現(xiàn)了上述現(xiàn)象，斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體對0#柴油和原油的耐受能力依次為仔蝦 > 糠蝦 > 無節(jié)幼體 > 蚤狀幼體。雖然無節(jié)幼體個體較蚤狀幼體小、發(fā)育階段較早，但其對0#柴油和LH原油的耐受能力較蚤狀幼體強，可能是因為無節(jié)幼體主要依靠卵黃營養(yǎng)生長尚未攝食，而蚤狀幼體處于變態(tài)階段，對外源污染物更為敏感[27]。

3.3 0#柴油和LH原油對斑節(jié)對蝦幼體的毒性差異

不同油品之間存在毒性差異，LH原油對斑節(jié)對蝦不同發(fā)育階段幼體的毒性均小于0#柴油，這一結(jié)果在以往的研究中被屢次證實。唐峰華等[28]研究了4種原油和4種成品油對中國明對蝦和日本囊對蝦仔蝦的急性毒性效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)成品油F180和F120對仔蝦的毒性最大，原油TJ016對仔蝦的毒性最小。原油由飽和烴、芳香烴、瀝青質(zhì)和樹脂等有機物組成，這些有機物中大約有75%的烴類物質(zhì)[29]，而在0#柴油分散液中，苯、萘、菲等芳烴及其取代物占22.1%，烷烴占50%左右。不論是原油還是0#柴油，芳香烴均被認為是其毒性最大的成分[2,30]，其毒性往往大于烷烴類化合物[22]。研究顯示，相比總石油烴含量而言，2～4環(huán)的多環(huán)芳烴(polycyclic aromatic hydrocarbon, PAH)含量更能準確反映原油對生物體的毒性[31]。Anderson等[32]的研究表明，Corexit 9500A分散劑的使用，顯著增加了原油對Rhithropanopeus harrisii幼體的毒性，認為是由于分散劑的加入，使得乳化液中PAH的濃度增加，顯著增加了原油乳化液的毒性。Cohen等[33]發(fā)現(xiàn)，MC-252原油水溶液和乳化液對夏唇角水蚤的48 h-LC50分別為61 μg·L-1和255 μg·L-1，而此時二者的總PAH含量非常接近，分別為70.8 μg·L-1和74.3 μg·L-1，分散劑的加入，使得PAH形成了不利于被橈足類攝食的較大的液滴，因此從總石油烴含量來看，分散劑的加入降低了原油的毒性。鑒于此，在今后的研究中，除測定總石油烴含量外，建議應(yīng)增加PAH相關(guān)含量的檢測，以使得研究結(jié)果更加準確。

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