張曉潔 張宇昊 馬 良 馬明思 鄭 紅 孫 藝

(1. 西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶 400715；2. 西南大學(xué)國(guó)家食品科學(xué)與工程實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心，重慶 400715)

超聲輔助提取兔皮膠原蛋白及其理化特性

張曉潔1張宇昊1馬 良2馬明思2鄭 紅2孫 藝2

(1. 西南大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，重慶 400715；2. 西南大學(xué)國(guó)家食品科學(xué)與工程實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心，重慶 400715)

以兔皮為原料，研究超聲波在酶法提取膠原蛋白中的應(yīng)用。結(jié)果表明，超聲輔助制得的膠原蛋白的提取率為(83.69±0.51)%，與傳統(tǒng)酶法相比提高了25%。聚丙烯酰氨凝膠電泳結(jié)果表明，超聲處理制得的兔皮膠原蛋白主要由α1，α2和β亞基組成，并未造成亞基的降解；紫外光譜表明，超聲處理后的膠原蛋白的特征吸收波長(zhǎng)為217 nm，說(shuō)明其較好地保持了I型膠原蛋白的特征；傅立葉變換紅外光譜表明，經(jīng)過(guò)超聲處理后的膠原蛋白分子中的氫鍵遭到部分破壞，但其三螺旋結(jié)構(gòu)仍保持完整；差示掃描量熱儀結(jié)果表明，超聲法制得的兔皮膠原蛋白的熱變性溫度和熱焓值均略低于傳統(tǒng)兔皮膠原，相對(duì)而言仍具有較高的熱穩(wěn)定性。

兔皮；膠原蛋白；超聲波；理化特性

膠原蛋白作為一種纖維蛋白，是細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成成分，廣泛分布于結(jié)締組織、皮膚、骨骼和韌帶等部位，起著支撐器官、保護(hù)機(jī)體的功能，約占總蛋白的30%左右[1]。膠原蛋白及其水解物具有良好的乳化性、起泡性和低免疫原性，這使其在食品方面[2]、生物醫(yī)學(xué)[3]和化妝品等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用。

目前，膠原蛋白的提取方法主要有中性鹽萃取法、酸提取法、堿提取法和酶提取法等，其中，酶法應(yīng)用最為廣泛，酶法提取是利用蛋白酶對(duì)膠原纖維的末端肽進(jìn)行降解，使肽鍵斷裂，再將含有三螺旋結(jié)構(gòu)的主體部分溶解于稀醋酸中而被提取出來(lái)。由于酶切位點(diǎn)有限以及端肽中存在較強(qiáng)的共價(jià)交聯(lián)，使得酶解效率較低，提取周期較長(zhǎng)[4]。

超聲波提取技術(shù)作為一種環(huán)境友好型新技術(shù)，因其具有提取時(shí)間短、能耗少、提取液中雜質(zhì)少、對(duì)有效成分破壞較小等優(yōu)點(diǎn)[5]，在當(dāng)今的生產(chǎn)、生活和科學(xué)研究中被廣泛使用。在超聲波輔助提取過(guò)程中，快速形成的空化泡破裂時(shí)會(huì)對(duì)介質(zhì)產(chǎn)生機(jī)械、化學(xué)和熱效應(yīng)作用，從而顯著提高目標(biāo)物質(zhì)的提取效率[6-7]。近年來(lái)，對(duì)于超聲輔助提取膠原蛋白方面已經(jīng)有一些報(bào)道，Ran等[8]用超聲輔助胃蛋白酶提取牛跟腱中膠原蛋白，酸浸泡12 h后，在超聲功率750 W，頻率20 kHz條件下，先超聲處理18 h，再加入胃蛋白酶酶解30 h，與常規(guī)酶解48 h相比，提取率提高了154.17%。Kyung等[9]將超聲用于酸法提取鱸魚(yú)皮中的膠原蛋白，在超聲功率150 W，頻率20 kHz條件下，酸浸泡超聲處理24 h，與傳統(tǒng)酸法提取24 h相比，膠原蛋白的提取率提高了116.65%，但凝膠電泳結(jié)果表明，膠原發(fā)生了降解。這說(shuō)明，適度超聲可以提高膠原蛋白的產(chǎn)率，但超聲處理過(guò)程中所產(chǎn)生的機(jī)械和熱效應(yīng)會(huì)導(dǎo)致膠原發(fā)生降解。

本研究擬以高蛋白低脂肪的兔皮為原料，考察料液比和超聲時(shí)間對(duì)兔皮膠原蛋白提取率的影響，旨在提高膠原蛋白的產(chǎn)率，并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行研究，以期為其高效生產(chǎn)和潛在應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料與試劑

兔皮：膠原蛋白含量為(13.82±0.24) g/100 g，重慶阿興記食品有限公司，原料獲取后洗凈凍藏于-20℃冰箱中備用；

氫氧化鈉、氫氧化鈣、冰醋酸、鹽酸、硫化鈉、氯化鈉、溴化鉀、十二烷基硫酸鈉：分析純，成都市科龍化工試劑廠；

β-巰基乙醇(2-ME)、過(guò)硫酸銨(APS)、四甲基乙二胺(TEMED)：分析純，美國(guó)BIO BASIC 公司；

Tris、考馬斯亮藍(lán) R-250：優(yōu)級(jí)純，美國(guó)BIO BASIC 公司；

胃蛋白酶(1∶10 000)：酶活800～2 500 U/mg，北京索萊寶科技有限公司；

30%丙烯酰胺：優(yōu)級(jí)純，北京索萊寶科技有限公司；

標(biāo)準(zhǔn)蛋白：分子質(zhì)量 10～200 kDa，加拿大Fermentas公司。

1.1.2 主要儀器設(shè)備

超聲波細(xì)胞破碎儀：JY92-IIDN型，寧波新芝生物科技股份有限公司；

電子天平：JA3003B型，上海精天電子儀器有限公司；

料理機(jī)：FYL-C020E型，九陽(yáng)股份有限公司；

實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)：PE20型，上海梅特勒-托利多儀器有限公司；

大功率磁力攪拌器：99-1型，金壇市科析儀器有限公司；

臺(tái)式高速離心機(jī)：5810 型，德國(guó)Eppendorf 公司；

水浴恒溫振蕩器：SHZ-B型，上海將任實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；

真空冷凍干燥機(jī)：FD-1-50型，北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；

基礎(chǔ)電泳儀：Power PacTM型，美國(guó)Bio-Rad 公司；

凝膠成像系統(tǒng)：G: BOX EF 型，英國(guó) Syn-gene 公司；

差示量熱掃描儀：Pyris4000型， 美國(guó)PerkinElmer 公司；

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：752型，上海箐華科技有限公司；

紅外光譜儀：Spectrun100型，美國(guó)PerkinElmer 公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 酶法提取兔皮膠原蛋白

新鮮兔皮→預(yù)處理→去除雜蛋白(用質(zhì)量濃度為10 g/L 的 NaCl 溶液處理，浸泡攪拌6 h，每2 h 換1次液)→清洗→酸浸泡(在4℃下于pH 2.2的醋酸溶液中浸泡8～10 h)→打漿→胃蛋白酶酶解(酶解液的pH 1.9，酶用量1%，酶解時(shí)間4 h)→中和、鹽析(使NaCl最終濃度為4～5 mol/L，鹽析12 h)→純化(以 pH 3.0的醋酸溶液為透析液透析1 d，再以純水為透析液透析2 d)→凍干→膠原蛋白[10]

1.2.2 超聲輔助酶法提取兔皮膠原蛋白 在1.2.1的基礎(chǔ)上稍作調(diào)整，酸浸泡打漿后先超聲處理，再酶解。超聲處理基本條件為：超聲功率45%(總功率650 W)，頻率為20 kHz，工作5 s，間隔5 s，超聲時(shí)間30 min，料液比1∶15(g/mL)；重點(diǎn)考察料液比和超聲時(shí)間對(duì)膠原蛋白提取率的影響，料液比水平設(shè)置為：1∶10，1∶15，1∶30(g/mL)，超聲時(shí)間水平設(shè)置為：0，10，20，25，30，60 min。

1.2.3 膠原蛋白提取率的計(jì)算

(1)

式中：

C——膠原蛋白的提取率，%

m1——膠原蛋白的凍干重量，g；

m2——兔皮的凍干重量，g。

1.2.4 聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE) 稱(chēng)取 2 mg 膠原蛋白溶解于 1 mL Tris—HCl(pH 8.0)溶液中[9]，使其蛋白濃度為2 mg/mL，其中分離膠和濃縮膠的濃度分別為 6%和5%，具體操作步驟參照文獻(xiàn)[11]。染色完成并脫色后，采用 Gene Tools 數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)電泳圖譜進(jìn)行分析。

1.2.5 紫外光譜分析 以0.05 mol/L醋酸為溶劑，將膠原蛋白樣品溶于其中，配制濃度為0.5 mg/mL的溶液，取0.05 mol/L的醋酸溶液作為空白，對(duì)樣品在190～400 nm的近紫外光區(qū)進(jìn)行掃描[12]。

1.2.6 紅外光譜(FT-IR)分析 稱(chēng)取1 mg樣品與150 mg溴化鉀(KBr)置于瑪瑙研缽中充分混勻研磨，烘干后進(jìn)行壓片，用傅立葉紅外光譜儀在450～4 000 cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行測(cè)定，具體參數(shù)設(shè)置參照文獻(xiàn)[13]。

1.2.7 熱穩(wěn)定性分析 準(zhǔn)確稱(chēng)量樣品3～5 mg，密封于鋁鉗鍋中，在氮?dú)猸h(huán)境下，以5℃/min的速率進(jìn)行加熱，測(cè)定溫度范圍為-5～200℃，記錄差示量熱掃描(DSC)圖譜并進(jìn)行分析[14]。

1.2.8 數(shù)據(jù)分析 每組試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)平行，所得數(shù)據(jù)均采用origin 8.6和 SPSS 17.0軟件進(jìn)行分析，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 料液比對(duì)膠原蛋白提取率的影響

由圖1可知，隨著超聲料液比的增加，膠原蛋白的提取率先增加后降低。超聲波的機(jī)械效應(yīng)和空化作用有利于溶劑的滲透和擴(kuò)散[15]，在料液比為1∶10(g/mL)時(shí)，溶液粘度較大，不利于超聲空化作用的傳導(dǎo)，膠原蛋白分子的溶出速率較低；隨著液料比增加，當(dāng)料液比為1∶15(g/mL)時(shí)，稀釋作用加強(qiáng)，溶液的粘度和蛋白濃度都有所下降，超聲波的強(qiáng)烈振動(dòng)和空化效應(yīng)增加，使得膠原纖維結(jié)構(gòu)得以松散，促使分散的膠原分子溶解于稀醋酸中，因而提取率有顯著提高(P<0.05)；當(dāng)料液比為1∶30(g/mL)時(shí)，溶液體積的增加反而使得超聲的空化作用和機(jī)械效應(yīng)減弱，同樣造成膠原蛋白溶出速率減慢。此外，超聲作用對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)的改變會(huì)導(dǎo)致更多酶切位點(diǎn)的暴露，料液比為1∶15(g/mL)時(shí)，可能更有利于酶切位點(diǎn)的暴露。因此確定最佳料液比為1∶15(g/mL)，這與齊越等[16]研究結(jié)果的變化趨勢(shì)相符。

圖1 料液比對(duì)膠原蛋白提取率的影響Figure 1 Effects of the ratio of solid to liquid on extraction rate of collagen

2.2 超聲時(shí)間對(duì)膠原蛋白提取率的影響

由圖2可知，隨著超聲作用時(shí)間的增長(zhǎng)，膠原蛋白提取率呈先升高后下降的趨勢(shì)，在25 min時(shí)達(dá)到最大值(83.69±0.51)%，與對(duì)照組(66.66±0.72)%相比，膠原蛋白的提取率有顯著提高(P<0.05)。在超聲25 min以?xún)?nèi)，隨著超聲時(shí)間的增加膠原蛋白的提取率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)，這是因?yàn)槌曌饔檬沟媚z原纖維結(jié)構(gòu)松散，促使膠原蛋白三螺旋主體部分溶于酸中而被提取出來(lái)[17-18]；隨著超聲時(shí)間的進(jìn)一步增加，膠原蛋白的提取率逐漸下降，可能是長(zhǎng)時(shí)間超聲處理所產(chǎn)生的熱效應(yīng)和機(jī)械效應(yīng)會(huì)破壞膠原蛋白結(jié)構(gòu)，使部分膠原蛋白發(fā)生變性，在酸中的溶解度降低，提取率有所下降。綜上所述，確定較適超聲時(shí)間為25 min，這與楊萌萌等[19]研究結(jié)果的變化趨勢(shì)一致。

2.3 膠原蛋白的亞基組成

由圖3可知，對(duì)照組和超聲處理組提取的兔皮膠原蛋白都具有明顯的α1、α2和β組分[20]。在相對(duì)分子質(zhì)量120 kDa附近的兩個(gè)條帶分別為α1和α2鏈，其中α1的強(qiáng)度明顯高于α2，說(shuō)明膠原是由兩條α1和一條α2肽鏈構(gòu)成，符合I型膠原蛋白的典型特征[21]，在α2鏈以下未發(fā)現(xiàn)其它電泳條帶，說(shuō)明超聲處理制得的兔皮膠原蛋白純度較高，且未發(fā)生降解。SDS-PAGE 圖譜和膠原蛋白亞基組成證明短時(shí)超聲可以使膠原纖維底物得到松散，促使膠原分子溶于酸中，不會(huì)破壞膠原蛋白結(jié)構(gòu)。

圖2 超聲處理時(shí)間對(duì)膠原蛋白提取率的影響Figure 2 Effects of ultrasonic time on extraction rate of collagen

M. 標(biāo)準(zhǔn)蛋白，1～6. 超聲時(shí)間分別為0,10,20,25,30,60 min

2.4 膠原蛋白的紫外光譜分析

膠原蛋白的近紫外吸收光譜可用于測(cè)量它的酪氨酸含量和非螺旋端肽的完整性。Lin等[22]報(bào)道的哺乳動(dòng)物或魚(yú)類(lèi)的I型膠原蛋白特征吸收光譜在218 nm處，這是由于肽鍵C═O的n→π*躍遷所致。圖4中對(duì)照組的最大吸收峰在219 nm處，超聲25 min的最大吸收峰在217 nm處，說(shuō)明超聲處理后的膠原蛋白較好地保持了I型膠原蛋白的特征。此外，在280 nm處有微弱吸收，這可能與膠原蛋白中酪氨酸(278 nm)，苯丙氨酸(259 nm)的存在相關(guān)，正是這些吸收峰的存在說(shuō)明膠原蛋白非螺旋端肽具有完整性。

2.5 膠原蛋白的紅外光譜分析

在紅外光譜中，酰胺鍵常被作為分析和鑒定蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的特征官能團(tuán)[23]。通常，酰胺A帶位于3 330～3 440 cm-1，主要與υN—H伸縮振動(dòng)有關(guān)，由圖5和表1可知，對(duì)照組和超聲25 min的酰胺A帶吸收特征峰分別出現(xiàn)在3 434.99 cm-1和3 435.45 cm-1，酰胺A帶向高波數(shù)移動(dòng)，說(shuō)明分子中有氫鍵輕微破壞[24]；酰胺I帶位于1 636～1 661 cm-1，與C═O的伸縮振動(dòng)和υN—H彎曲有關(guān)，膠原蛋白肽鏈間的氫鍵發(fā)生變化時(shí)，可由其吸收強(qiáng)度和波長(zhǎng)位置的改變反映出來(lái)，吸收峰向高波數(shù)移動(dòng)表明氫鍵被破壞，對(duì)照組和超聲25 min的酰胺I帶吸收特征峰分別出現(xiàn)在1 654.23 cm-1和1 657.22 cm-1，表明超聲處理制得的膠原蛋白分子中的氫鍵遭到部分破壞[23]；一般酰胺III帶的存在與膠原蛋白三螺旋結(jié)構(gòu)的完整性有關(guān)[25]，且其吸收峰通常位于1 220～1 320 cm-1，對(duì)照組、超聲25 min的酰胺III帶的吸收特征峰分別出現(xiàn)在1 239.66 cm-1和1 239.99 cm-1，此外，若膠原蛋白的酰胺III峰與1 453 cm-1峰面積比為1.0時(shí)，則表明其具有完整的三螺旋結(jié)構(gòu)[26]，對(duì)照組和超聲處理組膠原蛋白的酰胺III峰與1 453 cm-1峰面積比分別為1.063和1.042，說(shuō)明經(jīng)過(guò)超聲處理的膠原蛋白較好地保留了三螺旋結(jié)構(gòu)。

圖4 超聲處理25 min制得的兔皮膠原蛋白的紫外光譜分析Figure 4 UV spectra of collagen from 25 min ultrasonic treatment

圖5 超聲處理25 min制得的兔皮膠原蛋白的紅外光譜分析Figure 5 FTIR spectra of collagen from 25 min ultrasonic treatment

表1 超聲處理25 min制得的兔皮膠原蛋白紅外光譜特征峰吸收波長(zhǎng)Table 1 The absorbance positions of collagen from 25 min ultrasonic treatment

2.6 膠原蛋白的熱穩(wěn)定性分析

由表2可知，超聲法制得的兔皮膠原蛋白的熱變性溫度和熱焓值均略低于傳統(tǒng)兔皮膠原。天然膠原蛋白是由三條肽鏈纏繞形成的一個(gè)三螺旋結(jié)構(gòu)，當(dāng)體系溫度達(dá)到熱變性溫度后，分子內(nèi)氫鍵遭到破壞，分子結(jié)構(gòu)從有序螺旋態(tài)變?yōu)闊o(wú)序態(tài)，維系膠原纖維結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的分子間作用力越大，則其變性溫度和熱焓值越高[27]。超聲輔助提取的膠原蛋白熱變性溫度要稍低于對(duì)照組，可能是超聲處理會(huì)使維系膠原纖維之間的氫鍵遭到輕微破壞，使得變性溫度降低，這與紅外分析中的酰胺I帶結(jié)果一致。但總體來(lái)講本試驗(yàn)超聲條件下提取的兔皮膠原蛋白較好地保持了天然結(jié)構(gòu)，熱穩(wěn)定性較高。

表2 超聲處理25 min制得的兔皮膠原蛋白的熱變性溫度及熱焓值表Table 2 The Tm and ΔH of collagen from 25 min ultrasonic treatment

3 結(jié)論

(1) 在超聲功率45%(總功率650 W)，頻率20 kHz，工作5 s間隔5 s，料液比1∶15(g/mL)，超聲時(shí)間25 min條件下輔助酶法提取兔皮膠原蛋白，其提取率比相同條件下常規(guī)酶解提高了25%，提取率達(dá)(83.69±0.51)%。

(2) 聚丙烯酰氨凝膠電泳結(jié)果表明，超聲處理制得的兔皮膠原蛋白主要由α1，α2和β亞基組成，為典型的I型膠原蛋白；紫外光譜表明，超聲制得的膠原蛋白的特征吸收波長(zhǎng)為217 nm，較好地保持了I型膠原蛋白的特征；傅立葉變換紅外光譜表明，在本試驗(yàn)超聲條件下，超聲波的空化和機(jī)械效應(yīng)等只能使部分氫鍵輕微破壞，對(duì)膠原蛋白保持三螺旋結(jié)構(gòu)的完整性沒(méi)有影響；差示掃描量熱儀結(jié)果表明，與傳統(tǒng)酶法提取的兔皮膠原蛋白相比，超聲輔助提取的兔皮膠原蛋白熱變性溫度和熱焓值略低，但總體而言仍具有較高的熱穩(wěn)定性。

[1] 蔣挺大. 膠原與膠原蛋白[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2006: 3-45.

[2] BILEK S E, BAYRAM S K. Fruit juice drink production containing hydrolyzed collagen[J]. Journal of Functional Foods, 2015, 14: 562-569.

[3] CHI H L, SINGLA A, LEE Y. Biomedical applications of collagen[J]. International Journal of Pharmaceutics, 2001, 221(1/2): 1-22.

[4] 梅鑫東, 曾江南, 蔣柏泉. 酶法提取魚(yú)鱗膠原蛋白的工藝優(yōu)化[J]. 食品與機(jī)械, 2014, 30(6): 156-159.

[5] 焦巖, 王振宇. 藍(lán)靛果花色苷超聲波輔助提取優(yōu)化及其降血脂作用[J]. 中國(guó)食品學(xué)報(bào), 2010, 10(2): 52-59.

[6] LI Hui, CHEN Bo, YAO Shou-zhuo. Application of ultrasonic technique for extracting chlorogenic acid fromEucommiaulmodiesOliv. (E.ulmodies)[J]. Ultrasonics Sonochemistry, 2005, 12(4): 295-300.

[7] 楊昱, 白靖文, 俞志剛. 超聲輔助提取技術(shù)在天然產(chǎn)物提取中的應(yīng)用[J]. 食品與機(jī)械, 2011, 27(1): 170-174.

[8] RAN Xue-guang, WANG Lin-yue. Use of ultrasonic and pepsin treatment in tandem for collagen extraction from meat industry by-products[J]. Journal of the Science of Food & Agriculture, 2013, 94(3): 585-590.

[9] KYUNG K H, HO K Y, JI K Y, et al. Effects of ultrasonic treatment on collagen extraction from skins of the sea bassLateolabraxjaponicus[J]. Fisheries Science, 2012, 78(2): 485-490.

[10] 王雪蒙, 于瑋, 馬良, 等. 兔皮膠原蛋白的提取及其結(jié)構(gòu)鑒定[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2016(4): 209-213.

[11] 陳麗清. 超高壓技術(shù)制備高品質(zhì)明膠及其機(jī)理研究[D]. 重慶: 西南大學(xué), 2013: 22.

[12] 楊玲, 趙燕, 魯亮, 等. 鱘魚(yú)魚(yú)皮膠原蛋白的提取及其理化性能分析[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(23): 41-46.

[13] 于瑋, 王雪蒙, 馬良, 等. 豬皮膠原蛋白提取過(guò)程中酶解條件優(yōu)化及其結(jié)構(gòu)鑒定[J]. 西南大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2015(4): 106-113.

[14] 周夢(mèng)柔. 豬皮膠原蛋白明膠化過(guò)程中的微觀結(jié)構(gòu)變化研究及明膠提取率預(yù)測(cè)模型的構(gòu)建[D]. 重慶: 西南大學(xué), 2014: 14.

[15] 吳倩, 張麗芬, 陳復(fù)生. 超聲波對(duì)蛋白質(zhì)提取及改性影響的研究進(jìn)展[J]. 食品與機(jī)械, 2015, 31(4): 256-259.

[16] 齊越. 超聲波輔助法酶解鹿皮膠原蛋白及其產(chǎn)品研發(fā)[D]. 吉林: 吉林大學(xué), 2014: 21-30.

[17] KIM H K, KIM Y H, PARK H J, et al. Application of ultrasonic treatment to extraction of collagen from the skins of sea bassLateolabraxjaponicus[J]. Fisheries Science, 2013, 79(5): 849-856.

[18] LI De-fu, MU Chang-dao, CAI Su-mei, et al. Ultrasonic irradiation in the enzymatic extraction of collagen[J]. Ultrasonics Sonochemistry, 2009, 16(5): 605-609.

[19] 楊萌萌, 郭兆斌, 余群力, 等. 超聲波輔助法提取膠原蛋白工藝研究[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2013, 48(3): 121-126.

[20] WANG Lin, LIANG Qiu-fang, CHEN Ting-ting, et al. Characterization of collagen from the skin of Amur sturgeon (Acipencserschrenckii)[J]. Food Hydrocolloids, 2014, 38(38): 104 -109.

[21] NALINANON S, BENJAKUL S, KISHIMURA H, et al. Type I collagen from the skin of ornate threadfin bream (Nemipterushexodon): Characteristics and effect of pepsin hydrolysis[J]. Food Chemistry, 2011, 125(2): 500-507.

[22] LIN Yung-kai, LIU Deng-cheng. Comparison of physical-chemical properties of type I collagen from different species[J]. Food Chemistry, 2006, 99(2): 244-251.

[23] MUYONGA J H, COLE C G B, DUODU K G. Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopic study of acid soluble collagen and gelatin from skins and bones of young and adult Nile perch (Latesniloticus)[J]. Food Chemistry, 2004, 86(3): 325-332.

[24] DOYLE B B, BENDIT E G, BLOUT E R. Infrared spectroscopy of collagen and collagen-like polypeptides[J]. Biopolymers, 1975, 14(5): 937-957.

[25] LIU Da-song, LIANG Li, REGENSTEIN J M, et al. Extraction and characterisation of pepsin-solubilised collagen from fins, scales, skins, bones and swim bladders of bighead carp (Hypophthalmichthysnobilis)[J]. Food Chemistry, 2012, 133(4): 1 441-1 448.

[26] SYLVESTER M F, YANNAS I V, SALZMAN E W, et al. Collagen banded fibril structure and the collagen-platelet reaction[J]. Thrombosis Research, 1989, 55(1): 135-148.

[27] 康俊霞, 康永鋒, 包斌, 等. Na+、Ca2+和pH值對(duì)鯨鯊皮膠原蛋白熱變性溫度的影響[J]. 食品科學(xué), 2011(13): 66-70.

Ultrasonic-assisted extraction and physicochemical characteristics of collagen from rabbit-skin

ZHANG Xiao-jie1ZHANGYu-hao1MALiang2MAMing-si2ZHENGHong2SUNYi2

(1.CollegeofFoodScience,SouthwestUniversity,Chongqing400715,China; 2.NationalFoodScienceandEngineeringExperimentalTeachingCenter,SouthwestUniversity,Chongqing400715,China)

The application of ultrasonic irradiation to extract pepsin-soluble collagen from the skins of rabbit was investigated in this study. The results showed that the extraction rate of collagen using the ultrasonic irradiation was (83.69±0.51) % and the yield increased by 25% in comparison with the conventional pepsin isolation method. The result of polyacrylamide gel electrophoresis confirmed that the subunits structure of collagen using the ultrasonic irradiation was mainly ofα1,α2andβ, without subunit degradation. Moreover, the ultraviolet spectrum exhibited a typical absorption peak at 217 nm, indicating that it greatly maintained the characteristics of type I collagen. Additionally, the Fourier transform infrared spectroscopy revealed that hydrogen bond was partially destroyed, but the triple helix structure of collagen remained intact even after the ultrasonic irradiation. However, the result of Scanning Differential Calorimeter analyses showed that the thermal denaturation temperature and enthalpy value of collagen using the ultrasonic irradiation were slightly lower than that of the traditional rabbit collagen, and it still had a relatively higher thermal stability.

rabbit skin; collagen; ultrasonic; physicochemical characteristic

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)：31301425)；中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)重大項(xiàng)目(編號(hào)：XDJK2015A015)；中國(guó)博士后科學(xué)基金面上項(xiàng)目(編號(hào)：2014M562267)；中國(guó)博士后科學(xué)基金特別資助項(xiàng)目(編號(hào)：2015T80951)；重慶市基礎(chǔ)科學(xué)與前沿技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(編號(hào)：cstc2015jcyjBX0116)；第四批重慶市高等學(xué)校優(yōu)秀人才支持計(jì)劃

張曉潔，女，西南大學(xué)在讀碩士研究生。

張宇昊(1978—)，男，西南大學(xué)教授，博士。 E-mail:Zhy1203@163.com

2016—10—28

10.13652/j.issn.1003-5788.2017.01.038