徐慧，郇金亮(江蘇大學(xué)附屬上海第八人民醫(yī)院,上海200235)

甲狀腺乳頭狀癌組織中miRNA-106a的表達(dá)變化及其意義

徐慧，郇金亮
(江蘇大學(xué)附屬上海第八人民醫(yī)院,上海200235)

目的 觀察甲狀腺乳頭狀癌(PTC)組織中miRNA-106a的表達(dá)變化，并探討其意義。方法 30例PTC患者，均行PTC切除手術(shù)，術(shù)中留取PTC組織及瘤旁正常組織標(biāo)本。12例甲狀腺腺瘤手術(shù)患者，術(shù)中留取甲狀腺腺瘤組織。采用RT-PCR法檢測PTC組織、癌旁正常組織及甲狀腺腺瘤組織中miRNA-106a表達(dá)。分析miRNA-106a表達(dá)與PTC臨床病理參數(shù)的關(guān)系，采用受試者工作特征曲線(ROC曲線)判斷miRNA-106a表達(dá)在PTC診斷中的靈敏度、特異度。結(jié)果 PTC組織、癌旁正常組織及甲狀腺腺瘤組織中miRNA-106a相對表達(dá)量分別為3.63±0.36、1.04±0.08、1.71 ± 0.48,PTC組織中miRNA-106a相對表達(dá)量高于癌旁正常組織、甲狀腺腺瘤組織(P均<0．05)。miRNA-106a表達(dá)與PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P均<0.05)，與PTC患者的性別、年齡、腫瘤直徑無關(guān)(P均>0.05)。miRNA-106a診斷PTC的ROC曲線下面積為0.838(95%CI為0.721～0.956)，以相對表達(dá)量3.14為界值時，miRNA-106a診斷PTC的敏感度和特異度分別為70%、80%。結(jié)論 PTC組織中miRNA-106a高表達(dá)，其可能與PTC的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。miRNA-106a檢測PTC的敏感度和特異度均較高。

甲狀腺乳頭狀癌; 組織；MicroRNA-106a;生物標(biāo)記物

甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。甲狀腺乳頭狀癌(PTC)是甲狀腺癌中最常見且病程進(jìn)展最快的類型，約占甲狀腺癌的80%～90%[1]。40%～60%的PTC患者，尤其是年齡≥45歲的中老年患者，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移現(xiàn)象[2]。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可增加甲狀腺癌的復(fù)發(fā)幾率[2]。目前，臨床上常用的甲狀腺癌診斷方法主要包括血清學(xué)檢測、超聲診斷檢查、細(xì)針穿刺(FNA)活檢及組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查等。FNA被認(rèn)為是診斷甲狀腺癌的金指標(biāo)，但臨床中約30%的FNA報告顯示為“不確定性”[2,3]，進(jìn)一步確診仍需切除甲狀腺側(cè)葉后進(jìn)行組織學(xué)診斷分析。甲狀腺切除術(shù)是臨床常用的PTC治療方法[2,4]。微小RNA(miRNAs)是一類由18～25個核苷酸組成的內(nèi)源性非編碼單鏈RNA。近年來，miRNAs在基因調(diào)控過程中的作用逐漸被揭示，其對癌細(xì)胞增殖、凋亡及生物進(jìn)程等各方面的調(diào)節(jié)功能引起了人們的廣泛關(guān)注[5,6]。miRNAs在甲狀腺癌中的潛在診斷能力已得到初步證實[7]。研究[8]發(fā)現(xiàn)，miRNA-146b、miRNA-211、miRNA-222等miRNAs在癌組織中高表達(dá)，可反映PTC的病理階段。最新研究表明，miRNA-106a 在食管癌[9]、胃癌[10]、大腸癌[11]、肺癌[12]等多種癌癥組織中均表達(dá)上調(diào)，但關(guān)于miRNA-106a在PTC組織中的表達(dá)報道則較少。我們觀察了PTC組織中miRNA-106a的表達(dá)變化，并探討其對PTC的診斷效能。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年12 月～2016年3月間在我院住院的PTC患者30例，其中男10例、女20例，年齡22～65歲；均行PTC切除手術(shù)，術(shù)中留取PTC組織及瘤旁正常組織標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18周歲；②術(shù)前經(jīng)超聲診斷及術(shù)后病理確診是PTC及腺瘤組織。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往存在甲狀腺手術(shù)史者；②術(shù)前均接受過放療或化療者；③哺乳期婦女及孕婦；④存在嚴(yán)重心肺疾病、肝腎功能衰竭及惡性腫瘤者。另選擇12例甲狀腺腺瘤患者，其中男6例、女8例，年齡18～66歲；均行甲狀腺腺瘤切除術(shù)，術(shù)中留取甲狀腺腺瘤組織，所有標(biāo)本經(jīng)液氮冷凍，-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩１狙芯拷?jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 PTC組織、癌旁正常組織及甲狀腺腺瘤組織中miRNA-106a檢測 采用RT-PCR法。取 PTC組織、癌旁正常組織及甲狀腺腺瘤組織，按照TAKARA RNA提取說明書提取人甲狀腺組織總RNA。miRNA-106a和U6的引物均由銳博生物有限公司(廣州)設(shè)計及合成。逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，所有操作均參考銳博生物引物使用說明書進(jìn)行操作，使用來自寶生物工程有限公司的逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(PrimeScriptTM RT reagent Kit)，合成目的基因cDNA的第一條鏈。采用SYBR Green Realtime PCR Master Mix進(jìn)行qRT-PCR。qPCR反應(yīng)條件如下：95 ℃預(yù)變性20 s，95 ℃變性10 s，60 ℃退火20 s，70 ℃延伸10 s。qRT-PCR用SYBR熒光染料標(biāo)記，內(nèi)參是U6。重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1 PTC組織、癌旁正常組織及甲狀腺腺瘤組織中miRNA-106a相對表達(dá)量比較 PTC組織、癌旁正常組織及甲狀腺腺瘤組織中miRNA-106a相對表達(dá)量分別為3.63±0.36、1.04±0.08、1.71 ± 0.48,PTC組織中miRNA-106a相對表達(dá)量明顯高于癌旁正常組織及甲狀腺腺瘤組織(P均< 0．05)。

2.2 miRNA-106a表達(dá)與PTC患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系 miRNA-106a表達(dá)與PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)(P均<0.05)，與PTC患者的性別、年齡、腫瘤直徑無關(guān)(P均>0.05)。見表1。

2.3 miRNA-106a表達(dá)診斷PTC的敏感度和特異度 ROC曲線分析結(jié)果顯示，miRNA-106a診斷PTC的ROC曲線下面積為0.838(95%CI:0.721～0.956)，以3.14為界值時，miRNA-106a診斷PTC的敏感度和特異度分別為70%、80%。見圖1。

表1 miRNA-106a表達(dá)與PTC臨床病理參數(shù)的關(guān)系±s)

圖1 miRNA-106a表達(dá)診斷PTC的ROC曲線

3 討論

miRNAs是一類由內(nèi)源性基因編碼的長度約為22個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子[13]，廣泛存在于病毒、植物及動物體內(nèi)，參與機體的生長、發(fā)育、分化等過程。miRNAs主要通過與靶mRNA的3′端非編碼區(qū)完全或不完全互補結(jié)合，誘導(dǎo)RNA干擾途徑，降低mRNA的穩(wěn)定性，抑制編碼蛋白質(zhì)的翻譯，進(jìn)而抑制蛋白質(zhì)合成[14]?；虮磉_(dá)譜檢測發(fā)現(xiàn)，多種腫瘤組織中均存在miRNAs表達(dá)異常的現(xiàn)象[15]，提示miRNAs可作為腫瘤診斷、治療和預(yù)后的潛在生物標(biāo)志物[16]。

腫瘤的發(fā)生發(fā)展與抑癌基因和致癌基因之間的表達(dá)失衡有關(guān)，抑癌基因表達(dá)下調(diào)或致癌基因表達(dá)上調(diào)均能促進(jìn)癌癥的發(fā)生。大量的基因譜數(shù)據(jù)分析表明，多種miRNAs參與到了復(fù)雜的癌癥生成過程中。一方面，某些表達(dá)異常上調(diào)的miRNAs抑制了抑癌基因的表達(dá)。另一方面，某些miRNAs的下調(diào)間接誘導(dǎo)了致癌基因的活化[17]。此外，miRNAs在不同類型的腫瘤中、相同類型腫瘤的不同階段、轉(zhuǎn)移瘤與非轉(zhuǎn)移瘤中的表達(dá)存在明顯差異性，暗示miRNAs的表達(dá)異常在癌癥的早期診斷、病理分期及治療中意義重大，檢測不同類型腫瘤中特異性miRNA的表達(dá)變化可能成為腫瘤臨床診斷新方法。

PTC是最常見的甲狀腺癌類型，約占甲狀腺癌的80%以上。近年來，PTC的發(fā)生與miRNA的表達(dá)異常之間的聯(lián)系逐漸被揭示。He等[8]首次將miRNAs表達(dá)譜應(yīng)用到了PTC診斷中。研究發(fā)現(xiàn)，PTC腫瘤組織中存在多種表達(dá)明顯上調(diào)的miRNAs。Yao等[16]采用qRT-PCR法進(jìn)一步確認(rèn)了PTC癌組織與正常組織中miRNAs的表達(dá)差異?，F(xiàn)已明確在PTC腫瘤組織中上調(diào)的miRNAs有miRNA-221-5P、miRNA-222-5P、miRNA-34a-5P、miRNA-146b-5P、miRNA-21-5P和miRNA-31- 5P，下調(diào)的miRNAs有miRNA-181-5P和miRNA-138-5P。

miRNA-106a由23個核苷酸組成，其基因位于染色體Xq26.2。miRNA-106a屬于miRNA-17家族成員，與miRNA-17-5p、miRNA-20a、miRNA-106b、miRNA-93、miRNA-20b等有同源的基因結(jié)構(gòu)[18]。miRNA-106a是一種致癌的miRNA，在結(jié)直腸癌、胃癌、胰腺癌等多種癌組織中表達(dá)明顯上調(diào)，并且其表達(dá)與腫瘤分期、分化程度、瘤體大小以及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處浸潤現(xiàn)象存在不同程度的相關(guān)性。多項機制研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-106a能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、誘導(dǎo)腫瘤血管生成，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展[9]。Zhu等[19]研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中miRNA-106a的表達(dá)量與腫瘤轉(zhuǎn)移率呈正相關(guān)，同時抑制miRNA-106a表達(dá)能顯著降低癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。Li等[20]證實，胰腺癌組織中強烈高表達(dá)的miRNA-106a能夠促進(jìn)癌細(xì)胞增殖和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，并抑制下游基因基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)胰腺癌的發(fā)生。這一系列研究發(fā)現(xiàn)提示我們miRNA-106a在多種腫瘤多階段演進(jìn)過程中扮演了不可或缺的角色。

本研究中，PTC組織中miRNA-106a相對表達(dá)量明顯高于癌旁正常組織及甲狀腺腺瘤組織。miRNA-106a表達(dá)與PTC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，與PTC患者的性別、年齡、腫瘤直徑無關(guān)。miRNA-106a表達(dá)診斷PTC的ROC曲線下的面積為0.838(95%CI:0.721～0.956)，以3.14為界值時，miRNA-106a表達(dá)診斷PTC的敏感度和特異度分別為70%、80%。說明PTC組織中miRNA-106a高表達(dá)，其可能與PTC的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。miRNA-106a診斷PTC的敏感度和特異度均較高。

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郇金亮(E-mail: huanjl2000@126.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.07.015

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1002-266X(2017)07-0049-03

2016-09-12)