石慶敏，施云剛，萬 潤，龍立書，歐德淵

(貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽 550025)

中藥對(duì)雞實(shí)驗(yàn)性汞中毒臨床癥狀和病變的影響

石慶敏，施云剛，萬 潤，龍立書，歐德淵*

(貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽 550025)

通過觀察中藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性汞中毒雞病變的影響，為中藥治療汞中毒提供基礎(chǔ)資料。將試驗(yàn)雞(脫溫雞苗72只)隨機(jī)分為3組，每組24只，分別為空白對(duì)照組，陽性對(duì)照組和中藥治療組。試驗(yàn)動(dòng)物于第20、40、60天時(shí)，處死試驗(yàn)雞，觀察臟器指數(shù)，取肝、脾和腎制作組織切片，觀察病變。試驗(yàn)結(jié)果表明，中藥在60日齡時(shí)，明顯緩解雞汞中毒臨床癥狀；陽性對(duì)照組第20天臟器指數(shù)明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)，陽性對(duì)照組第40和第60天增加更為顯著(P<0.01)；與陽性對(duì)照組比較,中藥治療第40天各臟器指數(shù)顯著下降(P<0.05)，第60天下降極顯著(P<0.01)；中藥能緩解汞中毒雞組織病變。由此推斷中藥可緩解汞中毒雞組織器官損傷。

汞；中毒；雞；中藥

汞對(duì)環(huán)境造成了嚴(yán)重的污染[1]，并通過食物鏈進(jìn)入體內(nèi)引起汞中毒[2]。西藥治療汞中毒具有快速、顯著的排汞效果，但在排汞的同時(shí)也帶來了負(fù)面效果。中藥因毒副作用小，在防治多種疾病中具有重要的作用。本研究探討中藥方劑對(duì)汞中毒雞的臨床癥狀和病變影響，尋找副作用小而有效的治療汞中毒的中藥方法，為中藥防治人類或家禽汞中毒提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

中藥：黃芪、甘草、茯苓、白茅根、白術(shù)、山藥、蒲公英等，購自貴州省貴陽市花溪區(qū)中醫(yī)院；汞標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；硝酸(優(yōu)級(jí)純，含量65.0%～68.0%)，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；蘇木精和伊紅，天津市富宇精細(xì)化工有限公司產(chǎn)品；萊卡切片機(jī)，德國萊卡公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 中藥制備及預(yù)備試驗(yàn) 把準(zhǔn)備好的中藥飲片裝入粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，然后過100目篩，以“梯分法”均勻的混在飼料中，備用。預(yù)試驗(yàn)確定中毒劑量和中藥治療劑量。

1.2.2 試驗(yàn)用動(dòng)物分組與處理 于貴陽市三橋某禽苗批發(fā)公司購買100只雌性黑腳麻雞，常規(guī)育雛，免疫接種，20日齡時(shí)選出健康、體重大小與個(gè)體差異均衡的雞苗72只，隨機(jī)均分為3組，每組24只，分別設(shè)空白對(duì)照組、陽性對(duì)照組和中藥治療組?？瞻讓?duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，陽性對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧+36 g/kg HgCl2(根據(jù)預(yù)試驗(yàn)得出試驗(yàn)雞汞中毒最適劑量為36 g/kg HgCl2)，中藥治療組飼喂中藥+基礎(chǔ)日糧+36 g/kg HgCl2)，各組自由飲自來水，分籠常規(guī)飼養(yǎng)，試驗(yàn)期為60 d，試驗(yàn)期內(nèi)觀察試驗(yàn)雞只的臨床表現(xiàn)。

1.2.3 樣品采集與處理 試驗(yàn)的第20、40、60天時(shí)，分別禁食12 h，每組隨機(jī)選取8只雞稱重，頸動(dòng)脈放血處死動(dòng)物，取肝、脾、腎固定于中性福爾馬林中，包埋，組織切片，HE染色，鏡檢。

1.2.4 統(tǒng)計(jì)分析 采用Excel軟件(美國微軟：Microsoft Office Excel 2010)對(duì)各試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行初統(tǒng)，用SPSS 20.0軟件(美國IBM：IBM SPSS Statistics 20.0)F檢驗(yàn)(one-way ANOVA)進(jìn)一步分析處理，以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤的方式得出統(tǒng)計(jì)結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 中藥治療實(shí)驗(yàn)性汞中毒雞臨床癥狀觀察結(jié)果

陽性對(duì)照組第20天，無異常；第40天，食欲減退不明顯，渴欲增加，水樣腹瀉，僅有少數(shù)試驗(yàn)雞精神萎靡；第60天，部分雞臨床癥狀嚴(yán)重，表現(xiàn)腹臥，食欲不振，少動(dòng)，精神萎靡，昏睡，雞冠、肉髯和腳爪蒼白，羽毛凌亂無光澤。中藥治療組用藥第40天，部分雞腹瀉，采食量下降，精神萎靡，用藥第60天，其臨床表現(xiàn)有顯著的變化，采食量恢復(fù)正常，渴欲減緩，雞冠、肉髯和腳爪漸漸恢復(fù)正常色澤，流涎，腹瀉現(xiàn)象消失，小部分試驗(yàn)雞仍處于處于精神萎靡狀態(tài)?？瞻讓?duì)照組未見異常。

2.2 汞對(duì)實(shí)驗(yàn)性汞中毒雞臟器指數(shù)影響的結(jié)果

肝臟、脾臟、腎臟指數(shù)中，第20天，中藥治療組和陽性對(duì)照組差異均不顯著(P>0.05)，均顯著 (高于空白對(duì)照組P<0.05)；第40天，中藥治療組均顯著低于陽性對(duì)照組(P<0.05)，且顯著高于空白對(duì)照組(P<0.05)，陽性對(duì)照組均極顯著高于空白對(duì)照組(P<0.01)；第60天，中藥治療組和空白對(duì)照組均差異不顯著(P>0.05)，均極顯著低于陽性對(duì)照組(P<0.01)(表1)。

表1 汞對(duì)實(shí)驗(yàn)性雞臟器指數(shù)的影響

注：同列小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)，大寫字母不同表示差異極顯著(P<0.01)。

Note:Different lowercase letters in the same column show significant difference(P<0.05),different capital letters show highly significant differences(P<0.01).

2.3 病理組織學(xué)觀察結(jié)果

2.3.1 試驗(yàn)雞肝臟病理組織學(xué)觀察 光鏡觀察空白組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞索排列整齊，肝竇正常，肝細(xì)胞無明顯病變 (圖1)。陽性對(duì)照組隨時(shí)間延長，其病理變化與空白組相比明顯加重，正常組織結(jié)構(gòu)消失，小葉界限不清，肝細(xì)胞索異常，肝細(xì)胞呈空泡變性，表現(xiàn)為細(xì)胞體積增大，部分肝細(xì)胞呈典型的氣球樣變，炎性細(xì)胞浸潤逐漸增多，多數(shù)細(xì)胞核體積縮小、深染(圖2)；中藥治療組隨持續(xù)治療時(shí)間延長，各組病理變化情況與空白組相比有明顯好轉(zhuǎn)的趨勢(shì)，中藥治療第60天后，肝索逐漸變的清晰、炎性細(xì)胞浸潤減少、部分細(xì)胞核體積恢復(fù)正常，病理變化在很大程度上減輕了，逐步恢復(fù)至正常水平(圖3)。

圖1 空白對(duì)照組肝臟(肝臟未見異常)

圖2 陽性對(duì)照組肝臟(肝細(xì)胞壞死嚴(yán)重)(HE，100×)

圖3 中藥對(duì)照組肝臟(肝細(xì)胞壞死較少)(HE，100×)

2.3.2 試驗(yàn)雞腎臟病理組織學(xué)觀察 光鏡下空白組腎臟無明顯異常情況，腎小管管型完整，腎小管上皮細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞漿均染，無空泡出現(xiàn)，均無炎性細(xì)胞浸潤(圖4)。陽性對(duì)照組隨時(shí)間增加，病理變化與空白組相比有明顯的加重趨勢(shì)，腎小管管型逐漸由開始完整的管型變成不完整的管型，小管上皮細(xì)胞陽性對(duì)照組第20天偶見玻璃樣變化，第40天和第60天玻璃樣變性增多，間質(zhì)有炎性細(xì)胞浸入，隨時(shí)間增加，陽性對(duì)照組炎性細(xì)胞浸潤明顯增多，小管上皮細(xì)胞排列無異樣變化(圖5)；中藥治療第60天，腎小管上皮細(xì)胞排列整齊，間質(zhì)中炎性細(xì)胞浸入明顯減少，隨治療時(shí)間增加各組病理變化情況逐漸變好趨勢(shì)，逐步恢復(fù)至正常水平(圖6)。

圖4 空白對(duì)照組腎臟(腎臟未見異常)(HE，100×)

圖5 陽性對(duì)照組腎臟(腎小管上皮細(xì)胞變性壞死)(HE，100×)

2.3.3 試驗(yàn)雞脾臟病理組織學(xué)觀察 結(jié)果表明與空白組比較(圖7)，在整個(gè)試驗(yàn)階段陽性對(duì)照組脾臟中僅出現(xiàn)較多紅細(xì)胞，脾臟有出血現(xiàn)象，其中脾臟結(jié)構(gòu)正常，未發(fā)現(xiàn)有明顯病理變化(圖8)；中藥治療組隨持續(xù)治療時(shí)間延長，脾臟中出血現(xiàn)象明顯緩解(圖9)。

圖6 中藥對(duì)照組腎臟(腎小管上皮細(xì)胞損傷緩解)(HE，100×)

圖7 空白對(duì)照組脾臟(脾臟未見異常)(HE，100×)

圖8 陽性對(duì)照組脾臟(脾臟淋巴細(xì)胞趨于正常)(HE，100×)

3 討論

3.1 中藥能緩解汞中毒雞臨床癥狀及臟器指數(shù)

汞中毒癥狀最先在在貓身上被描述，被稱為“貓舞蹈癥”，病貓表現(xiàn)出抽搐、步態(tài)不穩(wěn)、麻痹等臨床癥狀，甚至跳海死去，被稱為“自殺貓”。在人類，患者腦中樞神經(jīng)和末梢神經(jīng)造成不可逆損傷，輕者語言障礙、行走不穩(wěn)、失明、手足變形、震顫，重者精神紊亂，身體呈弓狀凄厲哀嚎，直至而亡[3]。本研究中，實(shí)驗(yàn)性汞中毒雞表現(xiàn)為食欲不振，渴欲增加，水樣腹瀉，精神萎靡，昏睡，雞冠、肉髯和腳爪蒼白，羽毛凌亂無光澤。而中藥能有效緩解實(shí)驗(yàn)性汞中毒的臨床癥狀。

圖9 中藥對(duì)照組脾臟(出血緩解)(HE，100×)

Fig.9 The spleen of treatment group(Hemorrhage was reduced)(HE，100×)

3.2 中藥緩解汞中毒雞組織器官的損傷

神經(jīng)系統(tǒng)是金屬汞的主要靶器官之一，汞對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)具有很強(qiáng)的毒性[4-5]。肝細(xì)胞可因汞離子導(dǎo)致細(xì)胞外Ca2+大量進(jìn)入細(xì)胞，引起“鈣超載”，激活磷脂酶，引起細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化而產(chǎn)生大量的自由基，消耗大量還原GSH，從而損傷細(xì)胞[6]。汞中毒小鼠腎小管上皮細(xì)胞嚴(yán)重變性，部分壞死，腎小管內(nèi)見大量蛋白管型，有管型的腎小管明顯擴(kuò)張[7]，表現(xiàn)為腎病綜合征和急性腎功能衰竭[8]。汞通過誘導(dǎo)免疫細(xì)胞凋亡造成免疫機(jī)能損傷。如氯化汞可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞凋亡，損傷免疫細(xì)胞DNA，引起系統(tǒng)性自身免疫性疾病，對(duì)免疫抑制和免疫調(diào)節(jié)均有影響[9]。本研究表明，中藥緩解了汞中毒造成肝臟和腎臟細(xì)胞變性、壞死和炎性細(xì)胞浸潤等病理變化，緩解了脾臟出血的現(xiàn)象，使肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)、脾臟指數(shù)逐漸減少恢復(fù)至正常水平，保護(hù)機(jī)體，降低汞對(duì)肝、腎和脾臟的病理損傷。

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Effect of Traditional Chinese Medicine on Clinical Symptoms and Pathological Lesions in Experimental Mercury Poisoning Chickens

SHI Qing-min,SHI Yun-gang,WAN Run，LONG Li-shu,OU De-yuan

(CollegeofAnimalScience,GuizhouUniversity,Guiyang,Guizhou,550025,China)

The purpose of this article is to provided basic data for traditional Chinese medicine in curing the mercury poisoning.Seventy-two 21-day-old chicks was randomly and equally divided into blank control group,positive control group and the treatment group.On the 20th,40th,60th day,the animals were sacrificed for determining visceral indexes and the liver,spleen,and kidney tissue slices were used to observe the histopathological lesions.The results showed that the traditional Chinese medicine relieved the clinical symptoms of mercury poisoning in chickens.On day 20,each visceral index was higher (P<0.05) in positive control group compared with control group,and was higher(P<0.01) after 40 and 60 days;Compared with positive control group,with 40 days' treatment,the visceral index was lower(P<0.05) and was significantly lower(P<0.01)after 60 days.The traditional Chinese medicine relieved the pathological lesions of mercury poisoning chickens.So it can be inferred that Chinese traditional medicine can relieve the damage of tissues and organs in chickens exposured to mercury.

mercury；poisoning；chicken；Chinese traditional medicine

2016-07-18

貴州省科技廳農(nóng)業(yè)攻關(guān)項(xiàng)目(黔科合NY字(2011)3104 )

石慶敏(1994-),男(侗族)，貴州榕江人，主要從事動(dòng)物病理學(xué)研究。*通訊作者

S859.81;S853.74

A

1007-5038(2017)03-0055-04