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        忍冬藤可溶性膳食纖維提取及性能分析

        2017-03-09 02:06:15郭鳳倩黃祖順朱寶磊劉謙
        山東科學(xué) 2017年1期
        關(guān)鍵詞:忍冬藤陽(yáng)離子膳食

        郭鳳倩,黃祖順,朱寶磊,劉謙

        (山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,山東 濟(jì)南 250355)

        【中藥與天然活性產(chǎn)物】

        忍冬藤可溶性膳食纖維提取及性能分析

        郭鳳倩,黃祖順,朱寶磊,劉謙*

        (山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,山東 濟(jì)南 250355)

        探討纖維素酶法提取忍冬藤中水溶性纖維素的最佳工藝并對(duì)其性能進(jìn)行分析。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,采用正交試驗(yàn)對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化得到最佳工藝條件組合為pH=4.8,溫度45 ℃,料液比1:12(g/mL),纖維素酶體積分?jǐn)?shù)1.2%,提取時(shí)間6 h,浸提3次。在此條件下,水溶性膳食纖維的提取率為3.57%,所提取的水溶性纖維素持水力為6.1 g/g,膨脹力為5.3 mL/g,持油力為4.53 g/g,陽(yáng)離子交換能力為0.58 mmol/g,DPPH自由基最大清除率為80.13%,具有較好的理化性能。研究認(rèn)為,纖維素酶解法可用于提取忍冬藤中的水溶性膳食纖維。

        忍冬藤;水溶性膳食纖維;纖維素酶;性能

        膳食纖維是一種復(fù)雜的混合物的總稱(chēng),具有多種生理功能,可預(yù)防痔瘡、直腸癌、結(jié)腸癌、糖尿病、乳腺癌和肥胖癥等癥,被列為繼糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水、礦物質(zhì)和維生素之后的“第七營(yíng)養(yǎng)素”[1]。膳食纖維主要存在于大部分谷物、水果和蔬菜中,分為水溶性膳食纖維(soluble dietary fiber, SDF)和水不溶性膳食纖維(insoluble dietary fiber ,IDF)。SDF存在于果膠和凝膠中,為半纖維素多糖,易被腸道微生物所用。IDF存在于植物細(xì)胞壁中,為纖維素、木質(zhì)素和半纖維素,有利于促進(jìn)腸道蠕動(dòng),幫助消化。

        忍冬藤為忍冬科植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)干燥的藤莖?!侗静菥V目》載“忍冬,莖葉及花,功用皆同”,具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效。目前山東省金銀花藥材年產(chǎn)量達(dá)2萬(wàn)噸,忍冬藤產(chǎn)量至少10萬(wàn)噸。目前忍冬藤主要用于飼料加工、直接喂養(yǎng)牲畜或次生代謝成分提取,用于提取次生代謝物質(zhì)的忍冬藤纖維素部分作為廢棄物。利用忍冬藤SDF作為膳食纖維可以提高忍冬藤的利用率,提升忍冬藥材的附加值。本試驗(yàn)參照國(guó)內(nèi)多采用的化學(xué)-酶法相結(jié)合的提取膳食纖維方法[2],以忍冬藤為原料,采用纖維素酶水解法從忍冬藤中提取SDF,并優(yōu)化了提取工藝。

        1 材料與方法

        1.1 試驗(yàn)材料

        忍冬藤:采自山東中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物園,經(jīng)張永清教授鑒定為忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的藤莖,105~120 ℃殺青,60 ℃下干燥 48 h,粉碎,過(guò)40目篩,備用。

        試劑:α-淀粉酶(A109181-100g)、糖化酶(液化型 104U/mL)、纖維素酶C109262-5g(上海阿拉丁生化科技股份有限公司);1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH分析純,和光純藥工業(yè)株式會(huì)社);乙醇、甲醇、鹽酸、氫氧化鈉、氯化鈉、硝酸銀、水楊酸、硫酸亞特、雙氧水、磷酸二氫鉀-磷酸氫二鉀緩沖溶液和醋酸-醋酸鈉緩沖溶液等均為分析純;豆油。

        1.2 儀器與設(shè)備

        微型植物粉碎機(jī)(長(zhǎng)沙市雨花區(qū)中誠(chéng)制藥機(jī)械廠);PL203電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司);TDZ4-MS低速離心機(jī)(長(zhǎng)沙高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)湘儀離心機(jī)儀器有限公司);SHZ-D(III) 循環(huán)水式多用真空泵(鞏義市英峪高科儀器廠);恒溫水浴鍋(功率15 kW,常州博遠(yuǎn)實(shí)驗(yàn)分析儀器廠);202-00S恒溫干燥箱(長(zhǎng)沙科儀儀器設(shè)備有限公司)。

        1.3 忍冬藤SDF提取工藝

        1.3.1 工藝流程

        準(zhǔn)確稱(chēng)取忍冬藤粉末(過(guò)40目篩)3.0 g,以蒸餾水為溶劑,加入α-淀粉酶,調(diào)節(jié)pH,60 ℃恒溫水浴酶解,冷卻至室溫后調(diào)節(jié)pH,加入糖化酶,45 ℃恒溫水浴酶解,冷卻至室溫后調(diào)節(jié)pH,加入纖維素酶,45 ℃恒溫水浴酶解[3],真空抽濾,4 000 r/min離心,濃縮,加入4倍量體積分?jǐn)?shù)80%的乙醇醇析8 h,離心,傾去上清液,80~90 ℃干燥,得到SDF。

        1.3.2 忍冬藤SDF提取率的計(jì)算

        (1)

        1.3.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

        以忍冬藤SDF提取率為指標(biāo),主要考察料液比、纖維素酶體積分?jǐn)?shù)、酶解時(shí)間和浸提次數(shù)對(duì)SDF提取率的影響,根據(jù)公式(1)計(jì)算SDF,每個(gè)因素試驗(yàn)重復(fù)3次,所得結(jié)果取平均值。

        1.3.3.1 最佳料液比的確定

        準(zhǔn)確稱(chēng)取5份樣品,每份3.0 g,在pH=4.8,溫度45 ℃,加入纖維素酶體積分?jǐn)?shù)分別為1.0%的條件下,料液比(g/mL)分別設(shè)為1:9、1:12、1:15、1:17、1:25,均酶解6 h提取。

        1.3.3.2 最佳酶解時(shí)間的確定

        準(zhǔn)確稱(chēng)取5份樣品,每份3.0 g,在料液比(g/mL)為1:12,pH=4.8,溫度45 ℃,加入纖維素酶體積分?jǐn)?shù)為1.0%的條件下,分別酶解4、6、8、10、12 h,提取膳食纖維。

        1.3.3.3 纖維素酶最佳添加量的確定

        準(zhǔn)確稱(chēng)取5份樣品,每份3.0 g,在料液比(g/mL)為1:12,pH=4.8,溫度45 ℃,纖維素酶添加量體積分?jǐn)?shù)為0.5%、0.8%、1.0%、1.2%、1.5%的條件下,均酶解6 h。

        1.3.2.4 最佳浸提次數(shù)的確定

        準(zhǔn)確稱(chēng)取5份樣品,每份3.0 g,在料液比(g/mL)為1:12,pH=4.8,溫度45 ℃,加入纖維素酶添加量體積分?jǐn)?shù)為 0.2%的條件下,酶解6 h,分別提取1、2、3、4、5次。

        1.3.4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

        考察料液比、纖維素酶體積分?jǐn)?shù)、浸提次數(shù)和提取時(shí)間,在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用正交試驗(yàn)對(duì)SDF提取工藝進(jìn)一步優(yōu)化,每個(gè)因素設(shè)置3個(gè)水平,根據(jù)SDF提取率優(yōu)化試驗(yàn)工藝,見(jiàn)表1。

        表1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

        1.3.5 忍冬藤SDF性能測(cè)定

        1.3.4.1 持水力測(cè)定

        準(zhǔn)確稱(chēng)取0.100 g樣品,置于10 mL離心管中,加蒸餾水5 mL,室溫下浸泡24 h后,5 000 r/min離心5 min,傾去上層溶液,甩干水分,稱(chēng)重[4]。

        (2)

        1.3.4.2 膨脹力測(cè)定

        準(zhǔn)確稱(chēng)取樣品100 mg于帶刻度的玻璃試管中,加蒸餾水5 mL。放置24 h ,不斷攪拌。觀察其自由膨脹體積,計(jì)算每克纖維素的膨脹體積[4]。

        (3)

        1.3.4.3 持油力

        準(zhǔn)確稱(chēng)取干物料0.2 g,放入50 mL離心管中,加入豆油10 mL,混合均勻,密封后于37 ℃下靜置1 h,4 000 r/min離心15 min,棄上層油脂,稱(chēng)量剩余殘?jiān)臐裰豙5]。

        (4)

        1.3.4.4 陽(yáng)離子交換能力

        37 ℃恒溫條件下,用0.1 mol/L HCl溶液浸置樣品24 h ,邊抽濾邊用蒸餾水洗去過(guò)量的酸,用質(zhì)量分?jǐn)?shù) 10%的AgNO3溶液鑒定至不含 Cl-為止,干燥樣品。稱(chēng)取250 mg干燥樣品,溶解于100 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5% NaCl溶液中,用0.1 mol/L NaOH 溶液滴定,記錄pH,作VNaOH- pH曲線圖,以pH達(dá)到 7 時(shí),每克樣品所消耗 0.1 mol/L NaOH來(lái)衡量陽(yáng)離子交換能力[6]。

        (5)

        1.3.4.5 DPPH自由基清除能力的測(cè)定

        準(zhǔn)確稱(chēng)取2.0 mg DPPH溶解定容于50 mL容量瓶中,于冰箱中避光保存。將SDF配成系列濃度梯度(1~200 mg/L),精密量取2 mL樣品溶液加入10 mL具塞試管中,再加入2 mL DPPH溶液,于30 ℃恒溫條件下避光反應(yīng)30 min。反應(yīng)結(jié)束后于517 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度Ai。同等質(zhì)量濃度的抗壞血酸溶液作為陽(yáng)性對(duì)照(A0為2 mL DPPH+2 mL甲醇的吸光度,Aj為2 mL樣品溶液+2 mL甲醇的吸光度)。

        (6)

        2 結(jié)果與分析

        2.1 SDF提取的單因素分析

        2.1.1最佳料液比的確定

        由圖1可知,隨著料液比的增加,SDF提取率逐漸增加;當(dāng)料液比(g/mL)大于1:12以后,SDF提取率逐漸下降。這可能是由于隨著料液比的增加,單位面積內(nèi)底物與酶的有效接觸面積減少造成的。因此,確定纖維素酶酶解較佳的料液比(g/mL)為1:12。

        2.1.2 最佳酶解時(shí)間的確定

        由圖2可知,隨著反應(yīng)時(shí)間的增加,SDF提取率逐漸增加,反應(yīng)時(shí)間達(dá)6 h以后,其提取率下降。這可能是由于隨著反應(yīng)的進(jìn)行,產(chǎn)物的生成一定程度上抑制了反應(yīng)的進(jìn)行。因此確定最佳反應(yīng)時(shí)間為6 h。

        圖1 不同料液比對(duì)SDF提取率的影響Fig.1 The effect of material to liquid ratio on yield of SDF

        圖2 不同酶解時(shí)間對(duì)SDF提取率的影響Fig.2 The effect of enzymolysis time on yield of SDF

        2.1.3 纖維素酶最佳添加量的確定

        由圖3可知,在纖維素酶體積分?jǐn)?shù)為1.0 %的條件下SDF的提取率最高,纖維素酶體積分?jǐn)?shù)繼續(xù)升高,提取率顯著下降。這是因?yàn)樵诶w維素酶體積分?jǐn)?shù)較低時(shí),SDF產(chǎn)量隨著纖維素酶的增加而增加;隨著纖維素酶增加到一定程度,酶解產(chǎn)物的增加抑制了SDF的降解,SDF 得率逐漸降低。因此,初步確定纖維素酶的最適加入體積分?jǐn)?shù)為1.0% 。

        2.1.4 最佳浸提次數(shù)的確定

        由圖4可知,提取率隨浸提次數(shù)增加而增大,浸提次數(shù)超過(guò)3次后提取率基本上無(wú)變化。

        圖3 不同纖維素酶體積分?jǐn)?shù)對(duì)SDF提取率的影響Fig.3 The effect of cellulase volume fraction on the yield of SDF

        圖4 浸提次數(shù)對(duì)SDF提取率的影響Fig.4 The effect ofextraction times on the yield of SDF

        2.2 SDF提取的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

        由表2可知,根據(jù)極差大小分析,各因素對(duì)SDF提取率的影響次序?yàn)椋築>A>D>C,即纖維素酶體積分?jǐn)?shù)大于料液比大于提取時(shí)間大于浸提次數(shù)。最佳提取工藝條件組合為A2B2C3D1,采用此最佳提取工藝,在料液比1:12(g/mL)、纖維素酶體積分?jǐn)?shù)1.2%、提取時(shí)間6 h的條件下,SDF的提取率為3.57%,較正交試驗(yàn)中最高浸提率得率3.36%有所提高。

        表2 正交試驗(yàn)結(jié)果及分析

        注:*用SPSS16.0進(jìn)行方差分析,P<0.05;X1、X2、X3為同一水平提取率的平均值,R為極差。

        2.3 忍冬藤SDF性能分析

        SDF作為一種膳食纖維,所具有的理化性能是衡量其商品特性的重要指標(biāo),影響其保健價(jià)值的大小。忍冬藤SDF性能見(jiàn)表3。

        表3 忍冬藤SDF性能表

        2.3.1 持水力和膨脹力

        忍冬藤SDF因其化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有羥基等親水基團(tuán),能吸收相當(dāng)于自身質(zhì)量數(shù)倍的水分,因而具有較高的持水力,可增加人體排便的體積和速度[7],從而減輕直腸內(nèi)和泌尿系統(tǒng)的壓力,對(duì)便秘、高血壓以及冠心病等有一定的預(yù)防和治療作用。SDF吸水膨脹后,對(duì)腸道產(chǎn)生容積作用,易引起飽腹感,對(duì)預(yù)防肥胖癥也大有益處。表3結(jié)果顯示,忍冬藤SDF的持水力為6.1 g/g,膨脹力為5.3 mL/g,吸水力和膨脹力較好,高于小麥膳食纖維[8]。

        2.3.2 持油力

        表3結(jié)果顯示,忍冬藤SDF持油力為4.53 g/g,與蘆筍老莖吸附油脂的能力接近,高于米糠膳食纖維的持油力[9]。

        2.3.4 陽(yáng)離子交換能力

        膳食纖維的陽(yáng)離子交換能力是指SDF在水溶液中離解出某些陽(yáng)離子,通過(guò)吸附溶液中原有的陽(yáng)離子來(lái)進(jìn)行離子交換,從而起到排毒、降血壓的生理功效。表3結(jié)果顯示,忍冬藤SDF的陽(yáng)離子交換能力為0.58 mmol/g,低于脫脂米糠膳食纖維陽(yáng)離子交換能力。

        2.3.3 DPPH自由基清除率

        由圖5可知,在測(cè)定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi),忍冬藤SDF對(duì)DPPH自由基的清除率隨濃度的升高而增大。質(zhì)量濃度為1 g/L時(shí),清除率為10.09%,最大清除率為80.13%。半數(shù)有效濃度(median effective concentration, EC50)低于10 g/L,表明其具有很好的抗氧化活性[10]。

        圖5 DPPH自由基清除能力Fig.5 The DPPH Free radical scavenging capacity of SDF

        3 討論

        生物酶在各種動(dòng)植物中大量存在,是一種天然物質(zhì),生物酶的作用條件溫和,經(jīng)濟(jì)、環(huán)保且提取率高,在天然產(chǎn)物的提取中備受青睞。本研究利用淀粉酶和糖化酶除去淀粉,然后調(diào)節(jié)pH,在堿性環(huán)境下除去蛋白質(zhì),可加速蛋白質(zhì)堿解完全,利用纖維素酶提取膳食纖維,更加高效安全。通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)分析,影響忍冬藤中SDF提取率的因素依次為纖維素酶體積分?jǐn)?shù)大于料液比大于提取時(shí)間大于浸提次數(shù)。最佳工藝條件為pH=4.8,溫度45 ℃,料液比1:12(g/mL),纖維素酶體積分?jǐn)?shù)1.2%,提取時(shí)間6 h,在此條件下,SDF的提取率為3.57%。

        膳食纖維資源開(kāi)發(fā)的來(lái)源多種多樣,谷物、豆類(lèi)、水產(chǎn)、蔬菜和水果等均可提取膳食纖維[11],其優(yōu)良的理化性質(zhì)可改善加工產(chǎn)品的品質(zhì),并有較好的保健功能,燕麥、魔芋、菊苣、蘋(píng)果以及甜菜等中的SDF已實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。忍冬藤SDF較高的持水力和膨脹力可以提高面團(tuán)的蓬松度,改善面粉品質(zhì)。持油力、陽(yáng)離子交換能力和DPPH自由基最大清除率都表明其保健價(jià)值較高。尤其是忍冬藤SDF具有的抗氧化性,是目前膳食纖維開(kāi)發(fā)的熱點(diǎn)方向,較高的抗氧化性與其自身具有的抗氧化性物質(zhì)如有機(jī)酚酸類(lèi)成分密不可分[12]。該研究可以豐富膳食纖維來(lái)源,提高忍冬的綜合利用價(jià)值,有利于促進(jìn)金銀花藥材的產(chǎn)業(yè)發(fā)展。

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        DOI:10.3976/j.issn.1002-4026.2017.01.005

        Extraction and property analysis of soluble dietary fiber from stems ofLonicerajaponica

        GUO Feng-qian, HUANG Zu-shun, ZHU Bao-lei, LIU Qian*

        (Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China)

        ∶The optimal technology of extracting soluble dietary fiber (SDF) from stems ofLonicerajaponicaby cellulose method was investigated and the properties of SDF were also analyzed. Based on single-factor experiments, orthogonal experiments were performed to optimize the extractive conditions, and the results showed the optimum conditions were pH 4.8, at 45 ℃, 1∶12(g/mL)of material and water, cellulase 1.2% by volume, extracting for 6 h, 3 times.Under the above conditions, the yield of SDF was 3.57%, whose water holding capacity was 6.1 g/g, expansion force was 5.3 mL/g, oil holding capacity was 4.53 g/g, cation exchange capacity was 0.58 mmol/g, highest free radical scavenging rate on DPPH was 80.13%, and the SDF had excellent physical and chemical properties. The study indicated that the cellulose method can be used to extracting SDF from stems ofLonicerajaponica.

        ∶ stems ofLonicerajaponica; water soluble dietary fiber; cellulase; properties

        10.3976/j.issn.1002-4026.2017.01.004

        2016-04-26

        山東省科技發(fā)展計(jì)劃(2014GSF11903);2015年度大學(xué)生研究訓(xùn)練計(jì)劃(SRT)(201510441023)

        郭鳳倩(1993—),女,研究方向?yàn)橹兴庂Y源與質(zhì)量控制。

        *通信作者,劉謙(1982—),女,講師,研究方向?yàn)橹兴庂Y源與質(zhì)量控制。

        R284.2

        A

        1002-4026(2017)02-0020-06

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        老友(2017年7期)2017-08-22 02:36:54
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