段秀群，田歡，龔國(guó)富

鄂州市中心醫(yī)院 檢驗(yàn)科，湖北 鄂州436000

兩種儀器測(cè)定血清C反應(yīng)蛋白的性能比對(duì)分析

段秀群，田歡，龔國(guó)富

鄂州市中心醫(yī)院 檢驗(yàn)科，湖北 鄂州436000

目的探討免疫熒光定量床旁檢驗(yàn)法（Point-of-Care Test，POCT）與全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清C反應(yīng)蛋白（C-Reactive Protein，CRP）的結(jié)果是否具有可比性。方法依照美國(guó)國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（CLSI）EP9-A文件規(guī)定，收集符合要求的臨床樣本（包括該項(xiàng)目的高、中、低值）每天8份新鮮血清標(biāo)本，連續(xù)收集5 d，共40份樣本，用POCT儀器i-CHROMA Reader干式免疫分析儀及配套的試劑盤片與AU2700生化分析儀的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)研究。結(jié)果CRP在POCT儀與AU2700生化分析儀上檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性良好，R2＞0.98，但兩系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果存在一定偏差，通過(guò)比對(duì)試驗(yàn)可對(duì)儀器進(jìn)行校正，使兩者之間結(jié)果具有可比性。結(jié)論P(yáng)OCT法能簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)血CRP濃度，非常適用于各類醫(yī)院門、急診血CRP濃度的檢測(cè)，但是必須做好其質(zhì)量控制、定期做比對(duì)試驗(yàn)，及時(shí)進(jìn)行校正，以期使其結(jié)果準(zhǔn)確并具有可比性。

即時(shí)檢驗(yàn)；C反應(yīng)蛋白；生化分析儀；i-Reader免疫熒光分析儀；性能評(píng)價(jià)；醫(yī)療設(shè)備質(zhì)量控制

引言

隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步，近年來(lái)床旁診斷（Point-of-Care Test，POCT）技術(shù)獲得了飛速發(fā)展。其實(shí)現(xiàn)了在病人身邊快速診斷進(jìn)而改善病患治療的效果，在臨床科室急診、危重病房病人的輔助診斷和治療監(jiān)察中可發(fā)揮重要作用。POCT具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)血清C反應(yīng)蛋白（C-Reactive Protein，CRP）濃度等優(yōu)勢(shì)，但是，必須做好其質(zhì)量控制、定期做比對(duì)試驗(yàn)，及時(shí)進(jìn)行校正，只有在檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確和可信時(shí)才能很好地應(yīng)用于各類醫(yī)院門、急診血CRP濃度的檢測(cè)。所以POCT檢驗(yàn)質(zhì)量的控制變得越來(lái)越重要，及時(shí)提供準(zhǔn)確、可靠的檢驗(yàn)結(jié)果是臨床實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量目標(biāo)[1-2]。為了能給醫(yī)生提供及時(shí)的診斷依據(jù)，我科門診引進(jìn)了韓國(guó)i-CHROMA Reader免疫熒光分析儀，采集患者末稍血作為檢測(cè)全血，本研究根據(jù)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的CLSI文件POCT09-A要求[3]對(duì)本科室i-reader干式免疫分析儀與AU2700全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定CRP結(jié)果進(jìn)行比對(duì)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

從我院2015年1月～2015年3月檢測(cè)標(biāo)本中選取40份無(wú)溶血、脂血、及黃疸的新鮮血清及全血標(biāo)本，并含CRP高、中、低3個(gè)濃度水平。

1.2 儀器

以實(shí)驗(yàn)室使用成熟的AU2700生化分析儀作為比較儀，其檢測(cè)CRP原理采用免疫比濁法，以韓國(guó)i-Reader免疫熒光分析儀作為實(shí)驗(yàn)儀，其原理為免疫熒光定量技術(shù)及干化學(xué)層析方法。

1.3 試劑及質(zhì)控

分別采用兩儀器廠家提供的原裝配套試劑，原裝配套定標(biāo)液、質(zhì)控品。

1.4 方法

1.4.1 樣本的測(cè)定

常規(guī)開機(jī)后用各自配套定標(biāo)液及配套質(zhì)控樣品進(jìn)行定標(biāo)和質(zhì)控，確保質(zhì)控在控，每天各檢測(cè)8個(gè)樣本，每個(gè)樣本按正反順序各測(cè)定2次，共測(cè)定5 d。取各自的配套質(zhì)控血清在兩臺(tái)儀器間進(jìn)行批內(nèi)，批間重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。

1.4.2 離群值的檢驗(yàn)

對(duì)方法內(nèi)和方法間進(jìn)行組內(nèi)與組間離群值檢查，雙份測(cè)定的相對(duì)差值＞1/4均值的數(shù)據(jù)為離群數(shù)據(jù)應(yīng)剔除[4]。1.4.3 Χ取值范圍檢查

通過(guò)相關(guān)系數(shù)R2評(píng)估比較儀器AU2700納入數(shù)據(jù)范圍是否適合。若R2≥0.95則認(rèn)為納入數(shù)據(jù)范圍適合。如果R2能滿足上述要求，則可認(rèn)為x變量的誤差已被數(shù)據(jù)范圍所抵消，并且可以用簡(jiǎn)單的直線回歸來(lái)估計(jì)斜率和截距。

1.4.4 線性回歸及誤差分析

計(jì)算兩個(gè)方法間的線性回歸方程：y=ax+b[4]。

1.4.5 預(yù)期偏倚及可信區(qū)間計(jì)算

在醫(yī)學(xué)決定水平濃度處,利用回歸方程得出預(yù)期偏倚及95%可信區(qū)間，以“1/2允許誤差”為標(biāo)準(zhǔn)，將預(yù)期偏差的可信區(qū)間與之進(jìn)行比較判斷[4]。

因考慮到標(biāo)本結(jié)果受紅細(xì)胞壓積（Hematocit，Hct）的影響，故Hct異常需校正[5]。校正公式：全血CRP（校正后）=全血CRP（校正前）×（1-0.425）/（1-實(shí)測(cè)Hct）。校正后的數(shù)據(jù)計(jì)入統(tǒng)計(jì)分析。

1.5 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)用Microsoft Excel 2010軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果

2.1 儀器精密度

各取一瓶配套質(zhì)控血清，在AU2700全自動(dòng)生化分析儀和i-Reader熒光免疫分析儀上檢測(cè)CRP，按CLSI評(píng)價(jià)，得出批內(nèi)、批間CV%分別為AU2700 3.98%、2.67%，i-Reader為4.17、5.28%均符合小于20%的臨床要求。

2.2 離群點(diǎn)檢驗(yàn)（儀器內(nèi)和儀器間）

AU2700與i-Reader兩臺(tái)儀器內(nèi)部CRP均無(wú)離群點(diǎn)，兩儀器間有兩離群點(diǎn)，在文件允許的范圍內(nèi)被刪除，重新進(jìn)行檢測(cè)補(bǔ)上。

2.3 繪制散點(diǎn)圖

AU2700與i-Reader血清測(cè)定均值散點(diǎn)圖，見圖1?？梢钥闯鰅-Reader免疫分析儀與AU2700全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清CRP的回歸方程為y=1.0675x+0.8799,其散點(diǎn)基本在一條直線上（R2=0.9881），說(shuō)明其相關(guān)性較好。

圖1 AU2700與i-Reader血清測(cè)定均值散點(diǎn)圖

AU2700與i-Reader全血（校正后）測(cè)定均值散點(diǎn)圖，見圖2。可以看出i-Reader免疫分析儀與AU2700全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定全血(校正后)的CRP回歸方程為y=1.0372x+1.6873，兩種儀器檢測(cè)值基本在一條直線上（R2=0.9887），說(shuō)明兩種儀器相關(guān)性良好。

圖2 AU2700與i-Reader全血（校正后）測(cè)定均值散點(diǎn)圖

i-Reader血清與i-Reader全血測(cè)定均值（校正后）散點(diǎn)圖，見圖3?？梢钥闯鰅-Reader免疫分析儀測(cè)定血清和全血（校正后）CRP的散點(diǎn)圖幾乎是在一條直線上（R2=0.9965），說(shuō)明其相關(guān)性非常好。

圖3 i-Reader血清與i-Reader全血測(cè)定均值（校正后）散點(diǎn)圖

AU2700與i-Reader測(cè)定均值的偏差散點(diǎn)圖，見圖4。以兩種方法測(cè)定血清CRP的均值差作為縱坐標(biāo)，以AU2700全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清CRP作為橫坐標(biāo)作圖。從圖中可以看出散點(diǎn)大多數(shù)位于橫坐標(biāo)上方，說(shuō)明用免疫分析儀測(cè)定血清CRP值比用AU2700全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定略偏高，據(jù)此我們可以對(duì)i-Reader免疫分析儀進(jìn)行校正。

圖4 AU2700與i-Reader測(cè)定均值的偏差散點(diǎn)圖

2.4 回歸方程及誤差分析

兩種儀器測(cè)定血CRP的結(jié)果具有較好的相關(guān)性，回歸方程為y=1.0675x+0.879，R2=0.9881，AU2700血清與i-Reader全血校正后回歸方程為y=0.9696x+0.9252，R2=0.9987。按CRP項(xiàng)目醫(yī)學(xué)重要水平點(diǎn)（10、50、100 mg/L）計(jì)算方法間的系統(tǒng)誤差，相對(duì)偏差結(jié)果，見表1。

表1 AU2700與i-Reader CRP測(cè)定結(jié)果的偏差（%）

3 討論

CRP是一種急性時(shí)相蛋白、由肝細(xì)胞合成，在正常情況下CRP以微量形式存在于健康人血清中，當(dāng)機(jī)體有急性炎癥、感染、創(chuàng)傷和心血管疾病時(shí)會(huì)成倍增高[6-7]。它在感染發(fā)生后6～8 h即開始升高，24～48 h達(dá)到高峰，高峰值可達(dá)到正常的數(shù)百倍,在感染消除后其含量可急驟下降，一周內(nèi)可恢復(fù)正常。當(dāng)有細(xì)菌、真菌感染時(shí)血清中CRP迅速升高[8]，可用于鑒別診斷病毒或細(xì)菌感染、判斷合并細(xì)菌感染、判斷疾病程度和活動(dòng)性；動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)病程和判定抗生素療效。其中高敏CRP可用于新生兒感染性疾病的診斷和心血管疾病危險(xiǎn)分級(jí)[9]。

POCT被定義為“在接近患者治療處，由未接受臨床實(shí)驗(yàn)室學(xué)科訓(xùn)練的臨床人員或者患者進(jìn)行的臨床檢驗(yàn)，是在傳統(tǒng)、核心或中心實(shí)驗(yàn)室以外進(jìn)行的一切檢驗(yàn)[10]。它作為臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域的一種快速檢測(cè)手段，近年來(lái)取得了快速的發(fā)展，隨著其功能和檢測(cè)項(xiàng)目的不斷完善和應(yīng)用范圍的不斷拓展，已經(jīng)含蓋了生化、免疫、凝血、微生物等各個(gè)領(lǐng)域[11]，必將在臨床檢驗(yàn)中占有極為重要的地位[12]。但是POCT作為檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的新領(lǐng)域還存在很多有待解決的問(wèn)題，比如組織管理、質(zhì)量控制、操作人員的培訓(xùn)等一系列的問(wèn)題，其中如何保證高質(zhì)量的檢測(cè)結(jié)果成為POCT應(yīng)解決的主要問(wèn)題。為了使其更好的服務(wù)于臨床，我們?cè)谑褂肞OCT時(shí)必須首先做好質(zhì)控，在控情況下方可發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告，若失控就需查找原因，直至在控為止；其次要定期與檢驗(yàn)科儀器作比對(duì)試驗(yàn)，適時(shí)對(duì)儀器進(jìn)行校正[13]；再者還應(yīng)接受臨檢中心室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)和盲點(diǎn)現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的考核。

我科使用韓國(guó)i-CHROMA Reader免疫熒光分析儀就是POCT儀器的一種，可以測(cè)定血清及全血CRP，它具有體積小、容易使用、結(jié)果快速、采血量少等優(yōu)點(diǎn)，適用于門診、急診、及兒科患者的及時(shí)檢驗(yàn)[14-15]。它采用的是免疫熒光定量技術(shù)，干化學(xué)層析方法，分析樣本在板條上移動(dòng)的過(guò)程中形成免疫復(fù)合物，通過(guò)檢測(cè)區(qū)域/質(zhì)控區(qū)域的值與分析樣本不同的濃度獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可檢測(cè)樣本中分析物的濃度。血清或全血CRP測(cè)定經(jīng)常用于門、急診病人判斷病毒或細(xì)菌感染中，本研究按照EP9G-A2文件的要求對(duì)POCT分析儀和AU2700全自動(dòng)生化分析儀的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。我們將AU2700血清與i-Reader血清，AU2700血清與i-Reader全血（校正后），i-Reader血清與i-Reader全血（校正后）分別進(jìn)行比較分析，結(jié)果顯示兩種檢測(cè)系統(tǒng)及同種檢測(cè)系統(tǒng)的血清及全血檢測(cè)的相關(guān)性均良好[16]，但對(duì)于POCT分析儀的偏倚評(píng)估結(jié)果顯示在CRP的醫(yī)學(xué)決定水平10 mg/L處存在15.5%和20.6%的相對(duì)偏差，提示測(cè)定結(jié)果應(yīng)予以校正，而我們正好提供了校正的參數(shù)依據(jù)，經(jīng)過(guò)校正后保證了不同儀器間檢測(cè)結(jié)果的一致性。

POCT是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展的必然產(chǎn)物，是醫(yī)學(xué)進(jìn)步和科學(xué)技術(shù)發(fā)展推動(dòng)產(chǎn)生的儀器小型化和操作程序簡(jiǎn)便化的結(jié)晶，是當(dāng)代科技信息化的反映，它已經(jīng)在臨床檢驗(yàn)領(lǐng)域興起和應(yīng)用[17]，檢測(cè)指標(biāo)越來(lái)越多，數(shù)據(jù)管理越來(lái)越完善,我們期望著它能更好的成為常規(guī)實(shí)驗(yàn)室的有益補(bǔ)充，為醫(yī)患雙方提供更加有用的幫助。

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本文編輯 袁雋玲

Comparative Analysis of Two Instruments to Measure Serum C - Reactive Protein

DUAN Xiu-qun, TIAN Huan, GONG Guo-fu
Clinical Laboratory, Ezhou Central Hospital, Ezhou Hubei 436000, China

ObjectiveTo investigate whether the immune fluorescence quantitative point-of-care test (POCT) result and automatic biochemical analyzer test result are comparable in measuring serum C-reactive protein.MethodsAccording to the EP9-A file specified by the National Committee for Clinical Laboratory Standards, we collected clinical samples that meet the requirements (including high, medium and low value of the project). Altogether 40 samples were collected for 5 consecutive days with 8 fresh serum specimens per day. Test results of i-CHROMA Reader dry immunity analyzer and accessory reagent blanks and AU2700 biochemical analyzer were comparatively researched.ResultsTest results of C-reactive protein in POCT device and AU2700 biochemical analyzer were in good correlation, R2＞0.98, but there was a certain deviation in the test results of two methods, through comparative test of instrument calibration, the two results become comparable.ConclusionPOCT method is simple, and can rapidly and accurately detect serum C-reactive protein concentration; it is suitable for all kinds of hospital outpatient and emergency serum C-reactive protein detection. But its quality control must be done and must do comparison test on a regular basis, timely calibrate in order to make its results accurate and comparable.

point-of-care test; C-reactive protein; biochemical analyzer; i-Reader fluorescence immunity analyzer; performance evaluation; medical equipment quality control

776.2+

B

10.3969/j.issn.1674-1633.2017.02.024

1674-1633(2017)02-0087-04

2016-03-28

2016-04-11

作者郵箱：402389961@qq.com