韓博文

（天津曠博協(xié)和生物技術(shù)有限公司，天津 300384）

全血法流式細(xì)胞術(shù)檢測血小板抗體分析

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（天津曠博協(xié)和生物技術(shù)有限公司，天津 300384）

目的 本文針對全血法流式細(xì)胞術(shù)在檢測血小板抗體中的診斷作用進(jìn)行研究分析。方法選取我院2015年6月～2017年5月收治的進(jìn)行質(zhì)量的特發(fā)性血小板減少性紫癜患者77例。將使用傳統(tǒng)方法和全血法流式細(xì)胞術(shù)的患者進(jìn)行對比測試，將結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果使用全血法流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測的患者有56例（72.7%），PALgG陽性的為39例，血漿抗血小板抗體陽性，總陽性率為91.6%；使用傳統(tǒng)的方法進(jìn)行檢測的是46例（59.7%），PALgG陽性的為25例，主要體現(xiàn)為血漿之中的抗血小板抗體為陽性，總陽性率為75.1%，在使用全血法流式細(xì)胞數(shù)進(jìn)行檢測的時候，在血小板降低的情況下，血小板之中的LgG和PALgM的熒光度隨之增加，所以使用次方法能夠比傳統(tǒng)方法更為準(zhǔn)確。結(jié)論全血法流式細(xì)胞術(shù)在檢測血小板抗體的問題上非常有優(yōu)勢，需要的血量比較少，檢測結(jié)果也比較準(zhǔn)確、檢測比較靈敏可以重復(fù)進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果對醫(yī)生進(jìn)行治療有很大的幫助，可以廣泛應(yīng)用在臨床的檢測上面。

血小板；抗體；診斷

特發(fā)性血小板而造成的較少性紫癜，主要是因為血小板抗原抗血小板和血小板的抗原相結(jié)合的過程之中，由于血小板的減少而造成的免疫類疾病，如果想要對于此類疾病進(jìn)行質(zhì)量，就需要對于血小板抗體檢測的分類的過程進(jìn)行全面了解，檢測得到有價值的信息。檢測手段有很多種，傳統(tǒng)的檢測手段對患者來說非常痛苦，因為對血小板的需求很大的，需要不斷地增加采血量，患者和患者家屬都很難接受，這極大的影響了治療效果，還非常容易引起醫(yī)療糾紛。所以在進(jìn)行檢測血小板抗體中減少血量的采取和保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確十分重要。全血法流式細(xì)胞術(shù)在檢測血小板抗體的問題上非常有優(yōu)勢，需要的血量比較少，檢測結(jié)果也比較準(zhǔn)確、檢測比較靈敏可以重復(fù)進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果對醫(yī)生進(jìn)行治療有很大的幫助，可以廣泛應(yīng)用在臨床的檢測上面。近幾年，這一臨床檢測手段對檢測血小板抗體中有了理想效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

BD公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀FACSCantoII。磷酸緩沖液選擇PBS；抗凝劑選擇109 mmol/L檸檬酸鈉；固定液選擇2%的多聚甲醛。CD41-PE選擇北京曠博生物技術(shù)股份有限公司。

1.2 檢測方法

1.2.1 全血法流式細(xì)胞術(shù)檢測將血小板進(jìn)行分離洗滌

離心時候的洗滌，是需要控制好最后的濃度的，最后血小板濃度盡量在5*106左右，具體操作如下：將2 mL周血600轉(zhuǎn)離心，得1 mL上清，加入1 mL多聚甲醛混勻，2000轉(zhuǎn)離心，棄上清，加入2 mLPBS洗滌，2000轉(zhuǎn)離心，棄上清，加入2 mLPBS重懸備用，取100 uL重懸液與20 uL CD41-PE抗體混勻，孵育20分鐘后上機(jī)檢測。

1.2.2 傳統(tǒng)的檢測方法

傳統(tǒng)檢測方法（熒光免疫標(biāo)記）是將血小板進(jìn)行分離，然后洗滌，將數(shù)量進(jìn)行計算、溶解、離心。加上96孔酶標(biāo)板，再加入HRP-lgG，進(jìn)行均勻的混合，保存環(huán)境保證在37攝氏度。60 min之后將酶版取出，使用洗滌液進(jìn)行清洗四次，加上底物，溫度依然控制在37攝氏度，十分鐘之后加上終止劑，在使用酶標(biāo)儀，然后在492 nm下進(jìn)行檢測將顏色度數(shù)和計算含量進(jìn)行比較。

2 結(jié) 果

使用全血法流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測的患者有56例（72.7%），PALgG陽性的為39例，血漿抗血小板抗體陽性，總陽性率為91.6%；使用傳統(tǒng)的方法進(jìn)行檢測的是46例（59.7%），PALgG陽性的為25例，血漿抗血小板抗體陽性。

3 討 論

血小板抗體能夠引發(fā)很多種疾病，比如特發(fā)性血小板減少性紫癜、自身免疫血小板減少癥等并發(fā)癥?，F(xiàn)階段我們對血小板抗體檢測還不夠普及，方法也不夠完善。全血法流式細(xì)胞術(shù)在對血小板抗體檢測、診斷血栓性的疾病和出血性疾病包括血小板等一系列問題的檢測判斷都有優(yōu)勢，能夠幫助醫(yī)生及時的進(jìn)行改善病情。傳統(tǒng)的檢測方法采血量大，并且檢測結(jié)果也不夠準(zhǔn)確，影響了患者的治療效果，對患者和患者家屬的情緒影響也比較大。面對這種情況臨床需要一種快速、簡單、有效、準(zhǔn)確、對患者身體影響比較小的血小板抗體檢測方法。全血法流式細(xì)胞術(shù)恰恰能夠滿足這項需求，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)方法的許多不足之處。通過本文的對比分析得出，在進(jìn)行檢測血小板抗體的問題里，全血法流式細(xì)胞術(shù)和傳統(tǒng)方法比較，醫(yī)生可以獲得更多可靠信息。所以全血法流式細(xì)胞術(shù)對血小板檢測提供了可靠的技術(shù)支持和依據(jù)，醫(yī)生能夠更好地為患者進(jìn)行治療，更多的獲取患者的信息，更準(zhǔn)確更詳細(xì)的了解患者病情信息，對患者的治療、病情的判斷、進(jìn)行手術(shù)的方式、后續(xù)監(jiān)控都十分重要。全血法流式細(xì)胞術(shù)隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，時代的發(fā)展，因為優(yōu)秀的臨床價值，開始逐漸替代傳統(tǒng)方法被逐漸運(yùn)用在臨床上，能夠更好地為患者服務(wù)，提高患者治療效果，減輕患者痛苦，減少醫(yī)療糾紛等各種問題。為臨床醫(yī)療做出了極大貢獻(xiàn)。

[1]聶詠梅,Deborah F.Dumont,Larry J.Dumont.流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠全血中人血小板方法的建立[J].廣東醫(yī)學(xué).2010年16期.

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ISSN.2095-8242.2017.061.12002.01

本文編輯：趙小龍