邵少慰，梁少姬，李文成，羅巧明，梁儲財，陳裕章，陳連紅

一種用于子宮內(nèi)膜病變篩查的細(xì)胞塊制作方法及質(zhì)量控制

邵少慰，梁少姬，李文成，羅巧明，梁儲財，陳裕章，陳連紅

子宮內(nèi)膜癌；篩查；細(xì)胞塊；石蠟切片；質(zhì)量控制

當(dāng)前，脫落細(xì)胞塊技術(shù)是細(xì)胞學(xué)發(fā)展的方向之一，即將采集于自然管腔、器官表面或黏膜面，自然或人為脫落的細(xì)胞經(jīng)離心，將細(xì)胞和微小組織塊高度濃縮后用固定劑凝聚，再經(jīng)脫水、石蠟包埋、染色等步驟制成切片[1-4]，進(jìn)一步觀察診斷。本文用子宮內(nèi)膜采集器采集子宮內(nèi)膜細(xì)胞樣本，應(yīng)用細(xì)胞塊技術(shù)制成HE切片，這種切片的觀察效果遠(yuǎn)比子宮內(nèi)膜脫落細(xì)胞手工抹片或液基細(xì)胞學(xué)制片(endometrial cytological test, ECT)要好，其診斷價值更有優(yōu)勢[5]?，F(xiàn)介紹一種簡易的用于子宮內(nèi)膜病變篩查的細(xì)胞塊制作方法及質(zhì)量控制過程。

1 材料與方法

1.1 材料 SPA-1子宮內(nèi)膜采集器(北京賽普九州公司)，標(biāo)本保存瓶和保存液(主要成分為10%中性福爾馬林)，PBS，圓底離心管，一次性吸管，震蕩器，低速離心機(jī)，自制塑料小鏟，1%麝香草酚蛋清液(防腐、凝固劑，作為細(xì)胞骨架介質(zhì))，HE染色液，巴氏染色液和冰箱。

1.2 方法

1.2.1 取材 使用SPA-1子宮內(nèi)膜采集器采集子宮內(nèi)膜細(xì)胞樣本，剪斷采集器的采集環(huán)，將采集環(huán)及包含的細(xì)胞樣本投入到保存瓶中保存，搖動保存瓶，使瓶內(nèi)采集環(huán)上的細(xì)胞充分涮洗到保存液中，保存液呈混懸狀，完成樣本的采集。

1.2.2 標(biāo)本處理 核對標(biāo)本并編號，搖勻保存瓶，再將保存瓶內(nèi)的液體倒入離心管內(nèi)800～1 000 r/min離心10 min，除去上清液后加入緩沖液，搖勻，吸取離心管內(nèi)約1/3的無明顯懸浮物的細(xì)胞懸液，按沉降式制片法制作一張液基細(xì)胞巴氏染色涂片作對照；將離心管內(nèi)余下2/3的細(xì)胞懸液進(jìn)行離心，吸去大部分上清液，向離心管內(nèi)滴入0.6～1 mL流質(zhì)狀的麝香草酚蛋清液，混勻并使樣本內(nèi)細(xì)胞均勻分散在蛋清液中，再沿著離心管壁加入10%中性福爾馬林1～3 mL，離心管內(nèi)的蛋清變成膠凍狀，再次離心，除去上清液后放入冰箱冷凍約20 min，溫度-4 ℃，待離心管底部樣本結(jié)成凍塊狀，用塑料小鏟推動并將凍塊剔出，用濾紙包埋，常規(guī)固定、脫水后制得石蠟細(xì)胞塊，切片并行HE染色。

1.3 診斷結(jié)果的評估標(biāo)準(zhǔn) 采用雙盲法由兩名細(xì)胞病理學(xué)診斷醫(yī)師獨立閱片，子宮內(nèi)膜細(xì)胞塊切片和ECT涂片評估均參照經(jīng)典子宮內(nèi)膜四級分類診斷系統(tǒng)[6-8]：(1)未見上皮內(nèi)病變及惡性細(xì)胞(正常子宮內(nèi)膜)；(2)良性增生性病變(包括子宮內(nèi)膜炎癥或息肉、不規(guī)則增生、單純性增生和復(fù)雜性增生)；(3)子宮內(nèi)膜非典型增生(包括子宮內(nèi)膜非典型增生和上皮內(nèi)病變)；(4)癌變。

1.4 質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1 標(biāo)本及制片滿意的標(biāo)準(zhǔn) (1)申請單項目填寫完整，有相關(guān)臨床資料；(2)標(biāo)本瓶標(biāo)記清晰，標(biāo)本液無溢出或滲漏現(xiàn)象；(3)制片有足夠數(shù)量的子宮內(nèi)膜組織小片段(至少有5～6個內(nèi)膜腺體和間質(zhì)成分或腺上皮細(xì)胞群，萎縮期子宮內(nèi)膜可呈片狀子宮內(nèi)膜間質(zhì)成分為主)，并且保存完好；(5)有異常細(xì)胞的標(biāo)本均判定為滿意標(biāo)本；(6)染色效果好。

1.4.2 標(biāo)本及制片不滿意的標(biāo)準(zhǔn) (1)申請單填寫缺項；(2)標(biāo)本瓶無明確標(biāo)記，標(biāo)本瓶無擰緊，標(biāo)本液溢出過半；(3)制片的細(xì)胞過度重疊，有血液、炎性細(xì)胞或污染物覆蓋，影響超過75%以上的腺細(xì)胞觀察；(4)保存完好的子宮內(nèi)膜組織片段的腺體數(shù)﹤5個(萎縮期子宮內(nèi)膜除外)；(5)細(xì)胞擠壓變形明顯；(6)染色效果差。對前兩項應(yīng)在申請單上標(biāo)明原因并直接拒絕接收標(biāo)本，對后4項不滿意的制片均在報告單上說明原因，建議重新取材送檢。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞塊切片HE染色觀察 子宮內(nèi)膜細(xì)胞塊切片可見帶有子宮內(nèi)膜組織結(jié)構(gòu)的片段，顯示清晰的腺體形態(tài)，能大致判斷腺體與間質(zhì)的密度，背景清晰，能識別子宮內(nèi)膜不同生理狀態(tài)、良性病變、非典型增生及癌變。

2.2 ECT涂片巴氏染色觀察 背景干凈，已去除炎細(xì)胞、血液等大部分雜質(zhì)，可見散在的子宮內(nèi)膜腺上皮或間質(zhì)細(xì)胞，或成簇狀、緊密連接的蜂窩狀或管狀腺體，有平坦的層狀或三維結(jié)構(gòu)，但由于液基細(xì)胞制片采用的自然沉降法，會出現(xiàn)細(xì)胞單個散在分布或較多成團(tuán)細(xì)胞高度聚集、堆積重疊現(xiàn)象，不利于觀察和診斷評估，容易出現(xiàn)過度診斷或漏診的情況。

3 討論

3.1 技術(shù)特色和優(yōu)勢 目前，子宮內(nèi)膜癌篩查主要采用子宮內(nèi)膜采集器取樣，多采用手工涂片或液基細(xì)胞制片，但因易出現(xiàn)細(xì)胞過于分散或密集、重疊成片現(xiàn)象，閱片時有較大難度，使看慣了組織病理切片的病理醫(yī)師很難把握子宮內(nèi)膜細(xì)胞學(xué)診斷的尺度，需要培訓(xùn)專門的細(xì)胞病理學(xué)醫(yī)師來閱片，這成為子宮內(nèi)膜細(xì)胞學(xué)檢查廣泛用于子宮內(nèi)膜癌篩查的障礙之一。

本文將子宮內(nèi)膜細(xì)胞樣本制作成子宮內(nèi)膜細(xì)胞塊，其HE切片既可看到子宮內(nèi)膜散在脫落的腺細(xì)胞成分，也可見到更多微小的子宮內(nèi)膜組織片段，沒有腺體堆積重疊現(xiàn)象，能直觀的辨別內(nèi)膜腺體的形態(tài)、類型，以及周圍間質(zhì)的改變，其背景更清晰，易于觀察，這更符合病理醫(yī)師的閱片及診斷習(xí)慣，容易正確評估子宮內(nèi)膜良性病變、非典型增生及癌變。同時，制成的細(xì)胞塊可長期保存，也可對有病變的樣本再作連續(xù)切片觀察，或進(jìn)一步作免疫細(xì)胞化學(xué)染色，甚至分子病理檢測來協(xié)助子宮內(nèi)膜腫瘤的分類診斷。

3.2 提高質(zhì)控水平 本文用子宮內(nèi)膜采集器獲取的微量子宮內(nèi)膜成分至閱片、診斷的整個技術(shù)流程，均注重提高子宮內(nèi)膜癌篩查的質(zhì)控水平。首先，本實驗自制的蛋清液既經(jīng)濟(jì)易得，其中加入了麝香草酚起到防腐作用，又可以長時間在冰箱冷藏，隨時備用；麝香草酚蛋清液主要是作為樣本的細(xì)胞骨架媒介，使樣本內(nèi)的細(xì)胞充分混合、凝聚，冷凍后結(jié)塊。其次，用粗的飲料吸管剪成可彎曲的喇叭形小鏟，便于順著離心管的圓底將凍塊狀的樣本推移并完整剔出來，包裹后裝入脫水盒進(jìn)行脫水處理。這些步驟均可最大限度減少在標(biāo)本轉(zhuǎn)移過程中有效細(xì)胞的流失量控制。將細(xì)胞塊HE切片與液基細(xì)胞巴氏涂片以雙盲法分別加以評估，相互對照，對于后續(xù)有診斷性刮宮或子宮切除的病例，與病理組織活檢結(jié)果作對照，可以提高診斷子宮內(nèi)膜病變的準(zhǔn)確性。

3.3 擬解決的關(guān)鍵問題 婦科取材醫(yī)師應(yīng)熟悉標(biāo)本取材的環(huán)節(jié)，保證取得滿足診斷的標(biāo)本。但是，由于子宮內(nèi)膜采集器取得的脫落細(xì)胞成分有限，與診斷性刮宮等內(nèi)膜活檢比較，其診斷信息相對具有局限性，故需總結(jié)經(jīng)驗，制定更利于判斷子宮內(nèi)膜細(xì)胞塊切片的診斷評估模式。

總之，子宮內(nèi)膜細(xì)胞塊技術(shù)對受檢者而言屬于微創(chuàng)或者無創(chuàng)，從技術(shù)流程而言有利于提高從標(biāo)本制作到診斷的質(zhì)控水平，提高診斷的準(zhǔn)確度，是今后子宮內(nèi)膜良性病變乃至癌變篩查的方向。

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肇慶市科技創(chuàng)新計劃項目(2014E286)

廣東省肇慶市第二人民醫(yī)院病理科，肇慶 526060

邵少慰，女，主任醫(yī)師。E-mail: shaoweishao@163.com

時間：2017-6-20 11:19 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/34.1073.R.20170620.1117.027.html

R 737.3

B

1001-7399(2017)06-0696-02

10.13315/j.cnki.cjcep.2017.06.027

接受日期：2017-01-16